一種新的檢測(cè)CIC的方法與結(jié)締組織病的相關(guān)性研究

范念念 井洪 魏丹丹 張弢

摘要：目的 探討自主開(kāi)發(fā)的一種新的檢測(cè)循環(huán)免疫復(fù)合物（circulating immune complex， CIC）的方法在結(jié)締組織病中的應(yīng)用價(jià)值。方法 應(yīng)用速率透射比濁法，上生化分析儀迅速比較系統(tǒng)性紅斑狼瘡（systemic lupus erythematosus， SLE）、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（rheumatoid arthritis， RA）及干燥綜合征（sjogren syndrome， SS）等結(jié)締組織病患者血清中CIC與健康人血清之間的差異。結(jié)果 SLE、RA及SS這三種結(jié)締組織病患者血清中CIC與健康人相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。SLE、RA及SS女性患者與健康女性對(duì)照組比較，t=5.899，5.179，16.571，P<0.01；SLE及RA男性患者與健康男性對(duì)照組比較，t=6.573，6.981，P<0.01；SS患者的CIC水平明顯高于SLE及RA患者；而SLE及RA患者不同性別之間比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。結(jié)論 SLE、RA及SS患者的血清CIC水平高于健康對(duì)照組，因此這種檢測(cè)CIC的新方法可作為判斷疾病的臨床指標(biāo)。而且，這種新方法，即采集標(biāo)本后可立即應(yīng)用生化分析儀檢測(cè)，便于大樣本大批量的基礎(chǔ)篩查和結(jié)果判讀，速度快，敏感性、準(zhǔn)確性更高，能快速間接反映體內(nèi)的CIC的含量，更易于作為病情、療效觀察指標(biāo)。

關(guān)鍵詞：循環(huán)免疫復(fù)合物；系統(tǒng)性紅斑狼瘡；類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎；干燥綜合征

結(jié)締組織病，以疏松結(jié)締組織粘液樣水腫及纖維蛋白樣變性為病理基礎(chǔ)的一組疾病。結(jié)締組織病包括紅斑狼瘡、硬皮病、皮肌炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、結(jié)節(jié)性多動(dòng)脈炎、韋格納氏肉芽腫、巨細(xì)胞動(dòng)脈炎及干燥綜合征等。在70%RA患者血清中出現(xiàn)各種類型的免疫復(fù)合物，尤其是活動(dòng)期和RF（+）患者[1]。SLE活動(dòng)期CIC明顯增高，甚至緩解期也常有升高，特別是狼瘡性腎炎或血管炎，更可作為病情惡化的預(yù)兆[2]。85%干燥綜合征患者的CIC陽(yáng)性。因此，CIC的重要意義在于可作為病情、療效觀察指標(biāo)。而目前檢測(cè)CIC的方法陳舊、費(fèi)時(shí)，準(zhǔn)確性、敏感性差。本研究采用了一種快速檢測(cè)CIC的方法，便于大批量的基礎(chǔ)篩查及結(jié)果判讀。

1資料與方法

1.1一般資料 采集本院2014年6月～2015年1月已明確診斷為系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎及干燥綜合征的患者血清（40±20）歲，并采集來(lái)本院體檢的健康人血清（40±20）歲做為對(duì)照組。

1.2 CIC的檢測(cè) 應(yīng)用2.6%聚乙二醇6000（PEG6000），PBS配制檢測(cè)試劑，上生化分析儀AU640（OLYMPUS）在450nm的吸光度下檢測(cè)血清中的CIC，比較標(biāo)本組與對(duì)照組之間的OD值。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)分析SLE、RA及SS患者與健康對(duì)照組的差異。

2 結(jié)果

2.1血清CIC的反應(yīng)曲線 各分析1例SLE、RA及SS患者的反應(yīng)曲線，發(fā)現(xiàn)在加入單試劑后第3min（point 10）時(shí)反應(yīng)基本上達(dá)到飽和，之后反應(yīng)趨于平衡，如圖1所示。因此，本研究選擇point 10減去point 0的OD值作為結(jié)果。

2.2各樣本間血清CIC的OD值分析 比較SLE、RA及SS患者與健康對(duì)照者的血清CIC的OD值，發(fā)現(xiàn)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），如圖2所示，從圖2也可以看出，SS患者的血清CIC水平明顯高于SLE及RA患者。而SLE及RA不同性別間比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，患者的人數(shù)分布如表1所示。

3 討論

本研究采用一種新的檢測(cè)CIC的方法，能區(qū)分SLE、RA及SS患者與健康對(duì)照者的血清。而一項(xiàng)WHO的研究分析了18種檢測(cè)CIC的方法，僅發(fā)現(xiàn)六種方法能區(qū)分RA患者與健康對(duì)照者的血清[3]。在這六種方法中，評(píng)價(jià)最高的檢測(cè)方法是C1qBA（C1q binding assay）方法，但是另一研究表明此種方法檢測(cè)到的CIC是在體外形成的結(jié)果[4]。另外兩種方法是單克隆類風(fēng)濕因子結(jié)合抑制放射免疫分析法及人Burkitt's淋巴瘤細(xì)胞（Raji細(xì)胞）測(cè)試法，前者受游離RF的影響而不適于RA患者，而后者受抗核抗體的影響，抗核抗體能與Raji細(xì)胞結(jié)合，導(dǎo)致假陽(yáng)性。另外三種方法也是建立在細(xì)胞相互作用的基礎(chǔ)上，抗核抗體的存在會(huì)導(dǎo)致假陽(yáng)性。因此，此種新方法能替代以上六種方法，進(jìn)而可以商品化應(yīng)用于快速檢測(cè)血清CIC。目前，本研究采集的血清標(biāo)本還比較少，因此，還需采集大量的標(biāo)本來(lái)分析CIC與結(jié)締組織病的相關(guān)性。

同時(shí)，本研究比較了CIC與免疫球蛋白的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)CIC與免疫球蛋白呈正相關(guān)，而檢測(cè)免疫球蛋白的方法無(wú)法區(qū)分結(jié)合和游離的免疫球蛋白，因此還需應(yīng)用其他方法區(qū)分是否是與抗原結(jié)合的免疫球蛋白。

CIC含有許多不同的抗原，可反應(yīng)疾病的狀態(tài)。Kaname Ohyama[5]等發(fā)現(xiàn)CIC相關(guān)的抗原成分凝血酶敏感蛋白-1可做為診斷早期RA的指標(biāo)。因此，研究CIC的抗原成分可有助于疾病的早期診斷，活動(dòng)度及預(yù)后判斷，本研究接下來(lái)擬應(yīng)用該文章中的納米液相質(zhì)譜方法分析CIC中的抗原成分與結(jié)締組織病的關(guān)系。

參考文獻(xiàn)：

[1]葉任高，陸再英，等.內(nèi)科學(xué)[M].第5版.人民衛(wèi)生出版社，2004.

[2]許德清，曾凡欽，等. 紅斑狼瘡[M]. 中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2003.

[3]Lambert PH，Dixon FJ，Zubler RH，et al. A WHO collaborative study for the evaluation of eighteen methods for detecting immune complexes in serum[J].J Clin Lab Immun，1978，1：1-15.

[4]Peter Faaber，Truus P.M.Rijke Schilder，Peter J.A.Capel，et al.Circulating immune complexes and Rheumatoid Arthritis[J].J Rheumatol，1985，12：849-853.

[5]Kaname Ohyama， Yukitaka Ueki， Atsushi Kawakami， et al.Immune Complexome Analysis of Serum and Its Application in Screening for Immune Complex Antigens[J].Rheumatoid Arthritis，2011，57：905-909.

編輯/金昊天