水楊酸對(duì)平菇細(xì)菌性褐斑病的防治效果試驗(yàn)

徐巖巖　劉曉光　李鐵軍　宋曉燕　武曉

摘要：通過平皿抑菌試驗(yàn)和活體藥效試驗(yàn)研究不同濃度的水楊酸對(duì)由托拉斯假單胞桿菌（Pseudomonastolasii）引起的平菇（Pleurotus ostreatus）細(xì)菌性褐斑病的防治效果。結(jié)果表明，濃度為5.00 mg/mL水楊酸可有效防治平菇細(xì)菌。性褐斑病，且可以促進(jìn)平菇菌絲的生長。

關(guān)鍵詞：水楊酸；平菇（Pleurotus ostreatus）；細(xì)菌性褐斑??；托拉斯假單胞桿菌（Pseudomonas tolaasii）

中圖分類號(hào)：S436.46⁺1 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：0439-8114（2016）09-2247-02

平菇（PLeurotus ostreatus）是中國栽培量最大的食用菌，隨著栽培規(guī)模的逐漸擴(kuò)大。平菇細(xì)菌性褐斑病的發(fā)病率也在逐年升高。平菇細(xì)菌性褐斑病又名為細(xì)菌性斑點(diǎn)病，主要為害平菇、香菇等食用菌。平菇細(xì)菌性褐斑病的病原菌為托拉斯假單胞桿菌（Pseudomonas tolaasii），該病原菌可以生長在木質(zhì)索、纖維索豐富的基質(zhì)中，并可直接寄生于平菇菌絲上及其子實(shí)體上，對(duì)平菇生產(chǎn)造成很大威脅。平菇細(xì)菌性褐斑病可能發(fā)生在平菇子實(shí)體生長的任何時(shí)期。在高溫高濕的條件下，子實(shí)體腐爛速度較快，散發(fā)出一種難聞的氣味。這種病菌不僅為害生長著的平菇。采摘后的平菇也易感染這種病菌，影響平菇的產(chǎn)量和質(zhì)量。

水楊酸（Salicvlic acid）化學(xué)名稱為鄰羥基苯甲酸，屬于簡單的酚類化合物，在植物體內(nèi)合成。對(duì)植物生長代謝具有廣泛的調(diào)控作用，是一種高效、廉價(jià)、無毒的植物生長調(diào)節(jié)劑。由于水楊酸在植物體內(nèi)合成，含量很低。并且可以在韌皮部運(yùn)輸。故把水楊酸看作是一種新的植物內(nèi)源激素。大量研究表明。水楊酸可作用于植物的多種生理作用，能夠顯著提高高等植物的抗性。

目前針對(duì)平菇細(xì)菌性褐斑病常用的一些物理和藥物防治方法治標(biāo)不治本，不僅耗費(fèi)人力和物力，常用的化學(xué)試劑農(nóng)用鏈霉素對(duì)人體還有一定的危害。且達(dá)不到預(yù)期目的和效果。前人研究表明，水楊酸對(duì)平菇菌絲的生長有一定的影響，本研究旨在通過測定不同濃度的水楊酸對(duì)托拉斯假單胞桿菌的抑菌作用及對(duì)平菇菌絲生長的影響，為食用菌細(xì)菌性褐斑病的安全、高效防治提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 供試菌種 供試病原菌托拉斯假單胞桿菌強(qiáng)致病菌從發(fā)病平菇子實(shí)體上分離獲得，平菇品種為新育冬豐，由平泉縣希才應(yīng)用菌科技發(fā)展有限公司提供。

1.1.2 培養(yǎng)基 LB培養(yǎng)基：胰蛋白胨10g、酵母提取物5g、NaCl10g、去離子水1000mL、pH7.0、瓊脂16g。用于培養(yǎng)細(xì)菌。LB液體培養(yǎng)基：去除瓊脂，其余同LB培養(yǎng)基，用于培養(yǎng)細(xì)菌。PDA培養(yǎng)基：馬鈴薯200g、葡萄糖20g、瓊脂16g、去離子水1000mL、pH7.0，用于培養(yǎng)平菇菌絲。

1.1.3 試劑 水楊酸為天津市北辰方正試劑廠產(chǎn)品，硫酸鏈霉素可溶性粉劑為江西博萊大藥廠產(chǎn)品。

1.2 方法

1.2.1 托拉斯假單胞桿菌菌懸液的制備 挑取托拉斯假單胞桿菌單個(gè)菌落，接種在LB液體培養(yǎng)基中，30℃、170r/min振蕩培養(yǎng)24h，無菌水配制成3×10⁸cfu/mL的托拉斯假單胞桿菌菌懸液，備用。

1.2.2 平板擴(kuò)散法抑菌試驗(yàn) 取100mLLB培養(yǎng)基微波爐融化后，待溫度降至65℃，倒平板，每皿25mL，冷卻。將100μL的3×10⁸cfu/mL的托拉斯假單胞桿菌菌懸液加到平板上，涂布均勻，晾干，打孔8mm×8mm，每皿1孔，每孔加入100μL藥劑，30℃黑暗培養(yǎng)4d，每隔24h調(diào)查1次，測定抑菌圈直徑。設(shè)置無菌水對(duì)照和0.5mg/mL硫酸鏈霉素對(duì)照處理，每個(gè)處理3個(gè)重復(fù)。

1.2.3 最佳抑菌濃度篩選 將水楊酸利用無菌水分別稀釋2、4、6倍，然后利用平板擴(kuò)散法篩選出抑菌劑的最佳抑菌濃度。

1.2.4 抑菌劑對(duì)平菇菌絲生長的影響 采用平板抑菌法檢測抑菌劑最大濃度對(duì)平菇菌絲生長的影響，將平菇菌絲打成8mm×8mm菌餅。備用。取100mLPDA培養(yǎng)基微波爐融化后，待溫度降至65℃，倒平板，每皿25mL，冷卻。取100μL抑菌劑均勻涂布在平板上，晾干，將菌餅放置在平板中央，25℃培養(yǎng)8d，測定菌絲直徑，設(shè)置無菌水和鏈霉素藥劑對(duì)照處理。每個(gè)處理3個(gè)重復(fù)。

1.2.5 活體藥效試驗(yàn) 在平皿抑菌試驗(yàn)中對(duì)托拉斯假單胞桿菌抑制效果較強(qiáng)而對(duì)平菇菌絲生長影響較小的藥劑濃度進(jìn)行藥效試驗(yàn)。分別在病原菌接種后2h和4h噴施2次水楊酸。另設(shè)只接病原菌的對(duì)照、不接病原菌的空白對(duì)照以及只噴藥劑對(duì)照，每處理3個(gè)重復(fù)。采用微量噴霧器將配制好的藥液均勻噴施在子實(shí)體表面，每袋子實(shí)體噴施2mL。

病原菌接種采用滅菌的刷子蘸取1mL的菌懸液（3×10⁸cfu/mL）。均勻涂抹在生長一致的出菇2d的平菇子實(shí)體菌蓋上（直徑為1-2cm）。

調(diào)查方法：接病原菌24h后每隔12h進(jìn)行病級(jí)調(diào)查，并進(jìn)行病情指數(shù)計(jì)算。參考Rodriguez等的分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)調(diào)查病情指數(shù)及防治效果。

2 結(jié)果與分析

2.1 水楊酸對(duì)托拉斯假單胞桿菌的抑菌活性

水楊酸對(duì)托拉斯假單胞桿菌有一定的抑菌活性，但相對(duì)于硫酸鏈霉素抑菌活性較弱，濃度為5.00、2.50、1.25mg/mL水楊酸均對(duì)托拉斯假單胞桿菌具有一定的抑制作用，其中濃度為5.00mg/mL的水楊酸的抑菌作用較其他濃度顯著（P<0.05）。

2.2 水楊酸對(duì)平菇菌絲生長的促進(jìn)作用

不同濃度的水楊酸對(duì)平菇菌絲的生長具有一定的促進(jìn)作用，其中濃度為5mg/mL的水楊酸對(duì)平菇菌絲生長促進(jìn)作用最為顯著（P<0.05）。濃度為0.83mg/mL的水楊酸對(duì)平菇菌絲的生長幾乎沒有促進(jìn)作用，即表現(xiàn)為隨著水楊酸濃度的增加其促進(jìn)平菇菌絲生長的效果越強(qiáng)。

2.3 活體藥效試驗(yàn)

水楊酸5mg/mL大田防治效果與硫酸鏈霉素防治效果相當(dāng)，較離體藥效試驗(yàn)效果強(qiáng)。在僅施用藥劑的處理中未發(fā)現(xiàn)藥害現(xiàn)象。

3 小結(jié)與討論

目前，對(duì)于平菇細(xì)菌性褐斑病的防治主要是使用化學(xué)試劑，但藥物殘留比較嚴(yán)重，對(duì)平菇和人體健康均不利。對(duì)于平菇細(xì)菌性褐斑病的防治應(yīng)采取對(duì)平菇和人體較安全的方法。水楊酸是植物體內(nèi)產(chǎn)生的一類生長調(diào)節(jié)劑，與農(nóng)用鏈霉素等化學(xué)藥物相比。對(duì)人體和平菇相對(duì)更安全。水楊酸具有廉價(jià)、高效的特點(diǎn)，應(yīng)用水楊酸防治平菇細(xì)菌性褐斑病，可以減少菇農(nóng)的生產(chǎn)成本，提高經(jīng)濟(jì)效益。

本試驗(yàn)結(jié)果表明，濃度為5.00mg/mL的水楊酸對(duì)托拉斯假單胞桿菌的抑菌活性最佳，且可以促進(jìn)平菇菌絲的生長。建議生產(chǎn)上用濃度為5.00mg/mL的水楊酸對(duì)平菇細(xì)菌性褐斑病進(jìn)行防治。此外，水楊酸可誘導(dǎo)植物提高對(duì)非生物逆境的防御能力，是否具有提高平菇菌絲體抗逆性、促進(jìn)子實(shí)體發(fā)育等還需要進(jìn)一步研究。