無核葡萄胚挽救影響因素研究

霍巖

通常情況下，根據(jù)葡萄果實(shí)內(nèi)是否有種子而將其分為有核葡萄和無核葡萄。在葡萄生長發(fā)育過程中的開花結(jié)實(shí)階段，從雌配子體發(fā)育到有性生殖過程完成的任何一個(gè)階段出現(xiàn)障礙，就會(huì)形成無核果。不同階段出現(xiàn)障礙形成各種類型的無核葡萄。本試驗(yàn)研究了不同取樣時(shí)期、培養(yǎng)基類型及激素濃度等因素對無核葡萄自交胚挽救后代的影響，優(yōu)化昆諾無核和雷明無核胚挽救體系，試驗(yàn)結(jié)果為無核葡萄的育種研究提供了技術(shù)支持。

1 材料與方法

不同的種子敗育型無核品種，根據(jù)其授粉特性可分為兩大類：一類稱單性結(jié)實(shí)型，就是卵細(xì)胞不經(jīng)過受精作用而直接發(fā)育成果實(shí)；另一類稱假單性結(jié)實(shí)型，即種子敗育型，就是雖受精，但受精后的胚很快停止發(fā)育導(dǎo)致無核果實(shí)產(chǎn)生，這種類型的品種占無核品種的85%以上，在無核葡萄胚挽救育種中即是利用這一類型作母本。

試驗(yàn)在撫順縣后安鎮(zhèn)進(jìn)行，供試葡萄雜交組合材料為昆諾無核×雷明無核和雷明無核×昆諾無核?；ǚ鄹副酒贩N在開花前1天至初花期采集，花粉干燥后于4℃冰箱保存?zhèn)溆?。作為母本的所有品種在開花前3～5天進(jìn)行去雄，授粉1～2次，每組合去雄授粉10～20穗果。授粉后系標(biāo)牌，標(biāo)注好去雄授粉的時(shí)間及父、母本名稱。以授粉后的天數(shù)作為花后天數(shù)。

將授粉后一定時(shí)期的幼果采回，果穗用純凈水反復(fù)沖洗，然后將果穗浸泡于酒精中約半分鐘（酒精濃度為70%），用沒有雜菌的純凈水沖洗3次，再將果穗放入0.1%升汞中浸泡8～10分鐘，用無菌水漂洗3～5次，消毒后的果粒用刀切開，取出其中胚珠，接種到三角瓶中（使用100毫升三角瓶，三角瓶中裝入50毫升胚發(fā)育培養(yǎng)基），培養(yǎng)60天后，將培養(yǎng)的胚珠橫切，以發(fā)現(xiàn)白色胚乳的胚珠為發(fā)育胚，將發(fā)育的胚珠轉(zhuǎn)入萌發(fā)培養(yǎng)基（1/2 MS+BA0.5 +IBA1.5+GA0.5+2%蔗糖+0.6%瓊脂+0.1%活性炭），30天后調(diào)查萌發(fā)成苗率。培養(yǎng)條件為溫度（25±1）℃，光強(qiáng)為2000勒克斯，每天光照12～14小時(shí)。

昆諾無核×雷明無核、雷明無核×昆諾無核雜交胚珠為試材，采用L9（34）正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，接種時(shí)期：50天、60天、70天；50天、53天、56天；培養(yǎng)基種類： B5、ER、Nitsch；IBA濃度：1.5毫克/升、2.0毫克/升、2.5毫克/升；GA濃度：0.3毫克/升、0.5毫克/升、0.7毫克/升。每種培養(yǎng)基中均加入6%蔗糖、0.6%瓊脂、0.1%活性炭、BA0.5。每瓶接種8～10枚胚珠，接種7～10瓶。調(diào)查胚珠發(fā)育率、萌發(fā)率。

2 結(jié)果與分析

試驗(yàn)結(jié)果如下表所示，可以看出各組合萌發(fā)或發(fā)育的胚珠都有一定的數(shù)量。從胚珠發(fā)育率來看，昆諾無核×雷明無核的胚珠發(fā)育率較高，在90%～97.5%，其中處理5即花后60天接種，采用ER培養(yǎng)基，IBA濃度為2.5毫克/升，GA濃度為0.3毫克/升時(shí)效果最好；雷明無核×昆諾無核的胚珠發(fā)育率為70%～86.25%，其中處理6即花后53天接種，采用Nitsch培養(yǎng)基，IBA濃度為1.5毫克/升，GA濃度為0.5毫克/升時(shí)效果最好。從胚珠萌發(fā)率來看，昆諾無核×雷明無核的胚珠發(fā)育率較高，在1.82%～38.89%，其中處理6即花后60天接種，采用Nitsch培養(yǎng)基，IBA濃度為1.5毫克/升，GA濃度0.5毫克/升時(shí)效果最好；雷明無核×昆諾無核的胚珠發(fā)育率為0%～8.75%，其中處理4即花后53天接種，采用B5培養(yǎng)基，IBA濃度為2.0毫克/升，GA濃度為0.7毫克/升時(shí)效果最好。

3 結(jié)論

試驗(yàn)結(jié)果得出，接種時(shí)期、培養(yǎng)基種類、IBA濃度及GA濃度都是影響無核葡萄胚挽救的因素，而對胚挽救影響最大的因素是接種時(shí)期。從胚珠萌發(fā)率來看，昆諾無核×雷明無核，花后60天接種，采用Nitsch培養(yǎng)基，IBA濃度為1.5毫克/升，GA濃度0.5毫克/升時(shí)效果最好；雷明無核×昆諾無核，花后53天接種，采用B5培養(yǎng)基，IBA濃度為2.0毫克/升，GA濃度為0.7毫克/升時(shí)效果最好。另外，培養(yǎng)基種類、接種時(shí)期及激素濃度在不同的基因型品種雜交組合下要求也不同。