血細(xì)胞分析稀釋液滲透壓對(duì)e- CHECK質(zhì)控檢測(cè)影響的探討

林曉燕，張惠林，張忠英

(廈門(mén)大學(xué)附屬中山醫(yī)院檢驗(yàn)科，福建廈門(mén)361000)

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血細(xì)胞分析稀釋液滲透壓對(duì)e- CHECK質(zhì)控檢測(cè)影響的探討

林曉燕，張惠林，張忠英

(廈門(mén)大學(xué)附屬中山醫(yī)院檢驗(yàn)科，福建廈門(mén)361000)

摘要:目的探討SYSMEX自動(dòng)化血細(xì)胞分析儀不同批號(hào)稀釋液（EPK）試劑滲透壓的差異，以及該差異對(duì)MCV等紅細(xì)胞參數(shù)產(chǎn)生影響。方法35個(gè)批號(hào)的EPK試劑分別留取5支樣本在中國(guó)上海醫(yī)大FM-8T滲透壓儀上進(jìn)行滲透壓檢測(cè)，統(tǒng)計(jì)更換批號(hào)前后SYSMEX XE2100血細(xì)胞分析儀室內(nèi)質(zhì)控中MCV的結(jié)果，采用t檢驗(yàn)進(jìn)行顯著性分析。結(jié)果34次比對(duì)結(jié)果顯示不同批號(hào)EPK滲透壓并沒(méi)有顯著性差異（P＞0.05）。更換批號(hào)EPK前后室內(nèi)質(zhì)控三個(gè)水平MCV結(jié)果（共19次）不存在顯著性差異（P＞0.05）。結(jié)論SYSMEX XE2100血細(xì)胞分析儀不同批號(hào)EPK試劑滲透壓不存在顯著性差異，故一般不會(huì)對(duì)質(zhì)控品的紅細(xì)胞參數(shù)（如MCV）產(chǎn)生影響。e-CHECK質(zhì)控品貯存壓力及基質(zhì)中化學(xué)成分的變化，儀器檢測(cè)循環(huán)時(shí)間及工作人員操作誤差可能是導(dǎo)致室內(nèi)質(zhì)控紅細(xì)胞參數(shù)MCV出現(xiàn)漂移的原因。

關(guān)鍵詞：EPK滲透壓；MCV；顯著性差異；e-CHECK

本實(shí)驗(yàn)在排除環(huán)境條件、溫濕度、儀器設(shè)備、質(zhì)控品保存、試劑、操作人員、IQC均值設(shè)置等方面原因后，將導(dǎo)致同批號(hào)質(zhì)控品MCV室內(nèi)質(zhì)控圖出現(xiàn)漂移的可疑因素-EPK(稀釋液)的滲透壓的改變，進(jìn)行了比較和驗(yàn)證，探討在血細(xì)胞分析中EPK更換批號(hào)是否存在不同批號(hào)間試劑滲透壓的顯著性差異，是否會(huì)對(duì)室內(nèi)質(zhì)控MCV等紅細(xì)胞參數(shù)產(chǎn)生影響等問(wèn)題，以期改善實(shí)驗(yàn)室工作程序和提高實(shí)驗(yàn)室日常工作的效率。現(xiàn)報(bào)告如下。

1　材料與方法

1.1儀器試劑滲透壓檢測(cè)采用中國(guó)上海醫(yī)大

FM-8T滲透壓儀；血細(xì)胞分析采用SYSMEX XE2100全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀。質(zhì)控品為SYSMEX XE系列配套質(zhì)控品e-CHECK；試劑為SYSMEX XE系列稀釋液（EPK）。

1.2方法2011年12月開(kāi)始至2015年1月，本實(shí)驗(yàn)室共更換了35次批號(hào)的EPK試劑，筆者對(duì)前后兩次不同批號(hào)EPK試劑分裝于5支潔凈一次性使用試管中，進(jìn)行滲透壓檢測(cè)，記錄檢測(cè)結(jié)果并進(jìn)行方差齊性和顯著性檢驗(yàn)，共進(jìn)行了34次的顯著性比較。2011年12月開(kāi)始至2015年1月，本實(shí)驗(yàn)室共更換了20次批號(hào)e-CHECK質(zhì)控品，記錄了20次更換EPK批號(hào)前、后實(shí)驗(yàn)室血常規(guī)室內(nèi)質(zhì)控中MCV的結(jié)果并進(jìn)行顯著性分析，剔除由于更換批號(hào)EPK試劑時(shí)剛更換批號(hào)質(zhì)控品的情況（即更換批號(hào)試劑前后IQC數(shù)據(jù)記錄少于5次的情況）1次，進(jìn)行了19次的顯著性比較。

2　結(jié)果

2.1 XE2100血細(xì)胞分析儀在用的不同批號(hào)EPK的滲透壓差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)果記錄如表1。

2.2更換批號(hào)EPK前后血細(xì)胞分析室內(nèi)質(zhì)控三個(gè)水平L1-L3 MCV結(jié)果差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)果記錄如表2。

3　討論

細(xì)胞膜、膀胱膜等是半透膜，會(huì)讓比較小的溶劑分子自由通過(guò)，但不會(huì)讓比較大的溶質(zhì)分子通過(guò)。溶劑從比較稀的溶液通過(guò)半透膜而擴(kuò)散流入較濃溶液(或純?nèi)軇?的現(xiàn)象，稱為滲透；因?yàn)闈B透而發(fā)生的靜壓力稱做溶液的滲透壓。滲透及滲透壓，與生物的成長(zhǎng)有密切的關(guān)系。EPK滲透壓改變會(huì)影響全血標(biāo)本細(xì)胞分析中紅細(xì)胞參數(shù)，如MCV、HCT、MCHC等的結(jié)果。使用高滲透壓的稀釋液時(shí)，紅細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)的水分通過(guò)細(xì)胞膜滲出，細(xì)胞脫水，體積縮小，造成一定測(cè)量容量?jī)?nèi)的血細(xì)胞過(guò)少；而當(dāng)使用低滲透壓的稀釋液時(shí)，水分通過(guò)細(xì)胞膜進(jìn)入胞質(zhì)內(nèi)，致使細(xì)胞膨脹，體積增大，會(huì)形成細(xì)胞排隊(duì)通過(guò)傳感器的重合缺損，嚴(yán)重影響血液細(xì)胞檢測(cè)的精度，故稀釋液的pH值、電導(dǎo)率和滲透壓是保證測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確可靠的重要參數(shù)[1]。但對(duì)于EPK滲透壓是否會(huì)影響血細(xì)胞分析室內(nèi)質(zhì)控物的檢測(cè)結(jié)果，卻沒(méi)有相關(guān)研究給予支持或說(shuō)明。曾建明等[2]研究提出Sysmex XE5000全血細(xì)胞分析儀的各項(xiàng)檢測(cè)指標(biāo)均在1/5 CLIA’88TEa范圍內(nèi)，遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過(guò)1/2 CLIA’88TEa的要求。本實(shí)驗(yàn)室XE2100血細(xì)胞分析儀的校準(zhǔn)，性能驗(yàn)證和室間質(zhì)評(píng)的數(shù)據(jù)也表明儀器性能良好穩(wěn)定。SYSMEX血細(xì)胞分析室內(nèi)質(zhì)控品e－CHECK為SYSMEX原廠生產(chǎn)配套質(zhì)控品，采用具有穩(wěn)定定值范圍的細(xì)胞懸液控制血液分析儀檢測(cè)結(jié)果的方法已經(jīng)被認(rèn)可。該質(zhì)控品由穩(wěn)定的人類紅細(xì)胞、人類白細(xì)胞、血小板、有核紅細(xì)胞和防腐劑組成。在2－8℃的貯存條件下，有效期為91d，開(kāi)瓶后在2－8℃的條件下可穩(wěn)定7d[3]。本實(shí)驗(yàn)記錄顯示自2011年12月至2015年1月進(jìn)行的34次更換批號(hào)EPK滲透壓比對(duì)，各批號(hào)EPK滲透壓并沒(méi)有存在顯著性差異（P＞0.05）。對(duì)更換批號(hào)EPK前后實(shí)驗(yàn)室室內(nèi)質(zhì)控中MCV的結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析表明：更換EPK前后血常規(guī)室內(nèi)質(zhì)控中MCV的結(jié)果不存在顯著性差異（P＞0.05）。這就說(shuō)明，XE2100血細(xì)胞分析儀配套EPK試劑檢測(cè)室內(nèi)質(zhì)控時(shí)，不同批號(hào)EPK的滲透壓不存在顯著性差異，血常規(guī)室內(nèi)質(zhì)控MCV出現(xiàn)漂移的原因并非EPK滲透壓的改變。

表1　不同批號(hào)EPK滲透壓比對(duì)記錄表

圖1　血常規(guī)MCV出現(xiàn)漂移的室內(nèi)質(zhì)控圖

本實(shí)驗(yàn)室MCV質(zhì)控圖出現(xiàn)整體向上漂移1～2 SD范圍（具體見(jiàn)圖1），整體漂移現(xiàn)象明顯。由于儀器法在測(cè)定HCT時(shí)，是根據(jù)平均紅細(xì)胞壓積(MCV)及紅細(xì)胞數(shù)量得出的計(jì)算值，因此凡是能影響質(zhì)量控制及平均紅細(xì)胞壓積測(cè)定的影響因素，均影響紅細(xì)胞壓積的測(cè)定[4]。e－CHECK為SYSMEX原廠生產(chǎn)配套質(zhì)控品，由穩(wěn)定的人類紅細(xì)胞、人類白細(xì)胞、血小板、有核紅細(xì)胞和防腐劑組成。植物甾醇的結(jié)合強(qiáng)烈地影響分子間的相互作用，導(dǎo)致紅細(xì)胞膜的熱力學(xué)不穩(wěn)定性[5]。雖然含有防腐劑，但若持續(xù)存在影響紅細(xì)胞體積的因素，如由負(fù)壓變?yōu)檎龎?，那么質(zhì)控品基質(zhì)就會(huì)發(fā)生變化。首先，就是貯存壓力變化對(duì)質(zhì)控品中紅細(xì)胞體積的影響。質(zhì)控品在未開(kāi)啟的情況下，瓶?jī)?nèi)壓力為負(fù)壓；本實(shí)驗(yàn)室采用手動(dòng)進(jìn)樣的質(zhì)控模式，故需要開(kāi)啟質(zhì)控品方能完成質(zhì)控檢測(cè)。這就不可避免的會(huì)因?yàn)殚_(kāi)蓋而改變質(zhì)控品的管內(nèi)壓力，使管內(nèi)壓力由負(fù)壓轉(zhuǎn)變?yōu)檎龎褐苯訉?dǎo)致紅細(xì)胞體積的變化。雖然質(zhì)控品經(jīng)過(guò)防腐處理，但其基質(zhì)為人類血細(xì)胞懸液，隨著開(kāi)瓶后貯存壓力由負(fù)壓變?yōu)檎龎?，MCV會(huì)增大，本研究考慮出現(xiàn)MCV檢測(cè)結(jié)果整體漂移是質(zhì)控品貯存壓力改變導(dǎo)致，而且壓力改變導(dǎo)致的MCV變化是當(dāng)壓力達(dá)到某個(gè)點(diǎn)時(shí)候才會(huì)對(duì)MCV造成影響。其次，在稀釋-過(guò)濾系統(tǒng)中，細(xì)胞體積在每個(gè)去除低溫保護(hù)劑的循環(huán)過(guò)程中都會(huì)經(jīng)歷周期性的收縮與膨脹。在血細(xì)胞分析儀中具有固定的稀釋液流速，如果前一個(gè)循環(huán)中平衡時(shí)間不夠長(zhǎng)導(dǎo)致細(xì)胞傳質(zhì)不夠充分（即細(xì)胞沒(méi)有到達(dá)平衡狀態(tài)就進(jìn)入下一個(gè)循環(huán)），細(xì)胞體積的膨脹程度就會(huì)積累起來(lái)，導(dǎo)致細(xì)胞體積變化的最大值與細(xì)胞遭受的滲透性損傷增加。事實(shí)上，每次循環(huán)中周期性的收縮與膨脹也會(huì)使細(xì)胞遭受非滲透性損傷，如鉀滲漏[6，7]、細(xì)胞骨架損傷與磷脂膜重組[8]等，這些均會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞MCV的改變。再者，儀器及質(zhì)控品操作手冊(cè)說(shuō)明：e－CHECK從冰箱拿出平衡室溫（18～30℃），并在室溫下保持15min再使用；質(zhì)控品混勻應(yīng)直到所有紅細(xì)胞都完全浮起來(lái)為止（大約需要顛倒20次），然后再檢測(cè)；質(zhì)控品若在打開(kāi)狀態(tài)下使用，應(yīng)在取樣后重新裝好瓶蓋之前，使用干凈的無(wú)毛紙或布將瓶和蓋上的螺紋均擦拭干凈。及時(shí)將瓶蓋蓋緊，送回冰箱儲(chǔ)存[9]。質(zhì)控品基質(zhì)為人類血液，雖有保存液存在，但仍存在對(duì)葡萄糖、尿素等生化物質(zhì)的反應(yīng)性變化。有研究表明隨著尿素濃度的增加，測(cè)定的MCV值也會(huì)增加，體內(nèi)、體外實(shí)驗(yàn)均如此，而且尿素濃度越大，對(duì)MCV測(cè)定產(chǎn)生的干擾也越大[10]。而陳彤和史小波的研究指出，血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀所測(cè)紅細(xì)胞MCV值隨著滲透壓濃度的增大而呈現(xiàn)假性增高趨勢(shì)；而血尿素、血糖及鈉離子是構(gòu)成滲透壓的三種重要物質(zhì)，由于這三種物質(zhì)含量的改變從而導(dǎo)致滲透壓的改變[11]。當(dāng)然，并非所有批次e－CHECK質(zhì)控品均出現(xiàn)漂移，本研究不能排除某一批質(zhì)控品存在同批號(hào)質(zhì)控品各瓶間的差異問(wèn)題，人員操作不當(dāng)未將質(zhì)控品螺旋帽旋緊也是影響壓力值的因素。此外，在質(zhì)控品運(yùn)輸過(guò)程的某個(gè)環(huán)節(jié)沒(méi)做到位，也會(huì)導(dǎo)致質(zhì)控品的性質(zhì)發(fā)生變化。

表2　更換批號(hào)EPK前后血細(xì)胞分析室內(nèi)質(zhì)控三個(gè)水平L1- L3的MCV結(jié)果比對(duì)記錄表

綜上所述，本研究發(fā)現(xiàn)XE2100配套EPK試劑不同批號(hào)間滲透壓不存在顯著性差異，在使用儀器配套EPK檢測(cè)室內(nèi)質(zhì)控時(shí)，一般不會(huì)出現(xiàn)室內(nèi)質(zhì)控MCV出現(xiàn)漂移的情況。e－CHECK質(zhì)控品的壓力及基質(zhì)中化學(xué)成分的變化可能是導(dǎo)致室內(nèi)質(zhì)控MCV出現(xiàn)漂移的主要原因；至于MCV的變化是漸進(jìn)性改變還是當(dāng)貯存壓力達(dá)到某個(gè)點(diǎn)時(shí)才會(huì)改變還有待進(jìn)一步研究。另外，儀器檢測(cè)時(shí)的循環(huán)檢測(cè)時(shí)間也是影響因素之一，我們不能一味認(rèn)定儀器檢測(cè)性能的完好無(wú)誤。此外，一些未盡的外在因素及人員操作不當(dāng)或許也是原因之一。對(duì)于血細(xì)胞分析室內(nèi)質(zhì)控，我們應(yīng)該全面認(rèn)識(shí)全血質(zhì)控物法的局限性[12]。浮動(dòng)均值法（Bull法）和全血質(zhì)控物法都是屬于全血細(xì)胞分析的室內(nèi)質(zhì)控方法，可以從不同側(cè)面反映儀器、試劑和標(biāo)本狀態(tài)。在常規(guī)應(yīng)用全血質(zhì)控物法時(shí)，可結(jié)合Bull法使用，以確保整個(gè)分析過(guò)程檢驗(yàn)質(zhì)量的可靠性[13]。

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·質(zhì)量控制·

(收稿日期2015－07－27；修回日期2016－02－03)

DOI：10.3969/j.issn.1674-1129.2016.02.019

中圖分類號(hào)：R446.11

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1674-1129(2016)02-0185-04