三種方法批量全血制備的血漿產(chǎn)品質(zhì)量分析

李瑩，楊劍，黃麗紅，彭世球，苗燕平，徐翠玲(、江西省血液中心質(zhì)管科，江西南昌33005；、江西省腫瘤醫(yī)院，江西南昌33009)

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三種方法批量全血制備的血漿產(chǎn)品質(zhì)量分析

李瑩1，楊劍2，黃麗紅1，彭世球1，苗燕平1，徐翠玲1
(1、江西省血液中心質(zhì)管科，江西南昌330052；2、江西省腫瘤醫(yī)院，江西南昌330029)

摘要:目的改進(jìn)儀器自動化批量分離制備全血流程及方法，制備出符合國家標(biāo)準(zhǔn)的血液。方法對比分析手工法、改進(jìn)前儀器法及改進(jìn)后儀器法分離全血制備出的血漿產(chǎn)品質(zhì)量的血漿重量、血漿蛋白含量及Ⅷ因子含量。結(jié)果三種方法血漿外觀質(zhì)量及全項質(zhì)量抽檢均符合國家標(biāo)準(zhǔn)要求，三種方法制備血漿的血漿蛋白含量比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義，改進(jìn)后儀器法制備的血漿Ⅷ因子含量最高。三種方法制備200ml血漿的容量比較差異不具統(tǒng)計學(xué)意義，150ml和100ml血漿容量比較差異具統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)論使用改進(jìn)后儀器法進(jìn)行批量全血分離制備，其血漿產(chǎn)品質(zhì)量符合國家標(biāo)準(zhǔn)，且能提高血漿產(chǎn)品的Ⅷ因子含量。

關(guān)鍵詞：自動化制備；批量全血制備；血漿產(chǎn)品質(zhì)量

近幾年，隨著醫(yī)學(xué)科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，自動化技術(shù)的不斷更新，使用血液成分分離機(jī)對血液進(jìn)行自動化制備較之手工制備的優(yōu)勢越來越明顯，在成分血液制備中的應(yīng)用越來越廣泛[1-7]。為推進(jìn)我省成分制備的自動化信息化，我們對儀器自動化批量分離全血的流程和方法進(jìn)行了改進(jìn)，并對改進(jìn)后制備的血漿產(chǎn)品質(zhì)量進(jìn)行了全面的分析，現(xiàn)報告如下。

1　材料與方法

1.1數(shù)據(jù)來源本中心2013年5月至2015年9月期間，血液成分分離機(jī)分離明細(xì)表和統(tǒng)計分析表、現(xiàn)代血站管理系統(tǒng)（Mordern 5.0）和唐山現(xiàn)代科技公司啟奧9.0信息管理系統(tǒng)中的全血分離信息，以及成分制備現(xiàn)場相關(guān)工作記錄。

1.2樣本來源本血液中心2013年5月至2015 年9月無償獻(xiàn)血者所獻(xiàn)全血，包括400ml（66499袋）、300ml（32311袋）及200ml（33079袋）三種規(guī)格，及全血制備的去白懸浮紅細(xì)胞（以下簡稱“紅細(xì)胞”）和新鮮冰凍血漿（以下簡稱“血漿”）。

1.3儀器與耗材全血成分分離儀LMB SEPAMATIC-SLⅢ（深圳普特公司），大容量低溫離心機(jī)Cryorfuge 6000i（美國熱電公司）。Q-400五聯(lián)袋、T-300四聯(lián)袋及200四聯(lián)袋（上海輸血技術(shù)有限公司）。血細(xì)胞計數(shù)儀KX-21（希森美康公司）、分光光度計7230G、水浴箱Julabo、PHS-25型實驗室PH計、托盤天平BPII、血凝儀CA-500（希森美康公司）、細(xì)菌培養(yǎng)儀BACTEC9050。

1.4制備方法流程

1.4.1手工法（以下簡稱為“方法1”）流程全血濾除白細(xì)胞后，大容量低溫離心機(jī)離心兩次后成漿。第一次離心參數(shù)：離心轉(zhuǎn)速4000r/min，離心時間8min，加速度9，減速度7，離心溫度4℃。離心后手工采用虹吸法盡可能分離出上層血漿，人工熱合后產(chǎn)生紅細(xì)胞成品和血漿，血漿進(jìn)行第二次離心。第二次離心參數(shù)：離心轉(zhuǎn)速3260r/min，離心時間4min，加速度9，減速度4，離心溫度4℃。離心后手工使用分漿夾分離出血漿，人工熱合為成品。2013 年5月至11月本中心采集的全血大部分（其中400ml 9675袋，300ml 5021袋，200ml 6581袋）為該方法制備，2013年12月至2015年9月部分全血(其中400ml 10525袋，300ml 8431袋，200ml 5635袋）使用該方法制備。

1.4.2改進(jìn)前儀器法（以下簡稱為“方法2”）流程全血濾除白細(xì)胞后，大容量低溫離心機(jī)離心兩次后成漿，兩次離心參數(shù)同方法1。離心后使用血液成分分離機(jī)分離出上層血漿，自動熱合后產(chǎn)生成品紅細(xì)胞和血漿，血漿進(jìn)行第二次離心。離心后使用血液成分分離機(jī)分離出血漿，并自動排氣熱合為成品。2014年12月至2015年4月本中心采集的全血部分（其中400ml 9675袋，300ml 872袋，200ml 2369袋）為該方法制備。

1.4.3改進(jìn)后儀器法（以下簡稱為“方法3”）流程全血濾除白細(xì)胞后，大容量低溫離心機(jī)離心一次后成漿。離心參數(shù)：離心轉(zhuǎn)速3880r/min，離心時間15min，加速度9，減速度4，離心溫度4℃。離心后使用血液成分分離機(jī)分離出紅細(xì)胞與血漿，對血漿進(jìn)行外觀檢查，符合外觀質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)者，操作儀器使其自動排氣熱合為成品，不符合外觀質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)者，操作儀器熱合成品紅細(xì)胞，血漿與其聯(lián)接的兩個轉(zhuǎn)移袋熱合后進(jìn)行二次離心，離心參數(shù)及血漿成漿方法同方法1第二次離心。2015年5月至9月采集的全血部分(其中400ml 4685袋，300ml 1067袋，200ml 1179袋）為該方法制備。

1.5質(zhì)量控制指標(biāo)[8]每袋血漿都經(jīng)肉眼外觀質(zhì)量檢查，隨機(jī)抽取血漿檢測血漿重量、血漿蛋白含量及Ⅷ因子含量。

1.6統(tǒng)計學(xué)分析使用STATA 7.0統(tǒng)計學(xué)軟件包，采用方差分析、秩和檢驗（數(shù)據(jù)方差不齊時使用）對各質(zhì)量檢測項目的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析，秩和檢驗兩兩比較采用Bonferroni法調(diào)整檢驗水準(zhǔn)。

2　結(jié)果

2.1外觀采用三種方法制備出來的血漿，肉眼外觀質(zhì)量均符合國家標(biāo)準(zhǔn)。

2.2抽查結(jié)果通過全項質(zhì)量檢測的抽查，三種方法制備的血漿各項目檢測結(jié)果包括血漿蛋白含量、Ⅷ因子含量均符合國家標(biāo)準(zhǔn)，具體見以下分析。

血漿蛋白含量的國家標(biāo)準(zhǔn)為≥50g/L，Ⅷ因子含量的國家標(biāo)準(zhǔn)為≥0.7IU/ml。經(jīng)方差分析、秩和檢驗及Bonferroni法調(diào)整檢驗水準(zhǔn)進(jìn)行分析，三種方法的全項質(zhì)量檢測項目統(tǒng)計見表1。

表1　新鮮冰凍血漿全項質(zhì)量檢測項目的分析（±s）

表1　新鮮冰凍血漿全項質(zhì)量檢測項目的分析（±s）

注：三種方法血漿蛋白含量兩兩比較，方法1與2：χ2=5.832，P=0.0157；方法1與3：χ2=0.452，P=0.5012；方法2與3：χ2=0.436，P=0.5093。三種方法Ⅷ因子含量兩兩比較，方法1與2：χ2=4.220，P=0.0400；方法1與3：χ2=35.889，P=0.0001；方法2與3：χ2=14.942，P=0.0001。

項目方法1方法2方法3總計n(袋)　　血漿蛋白含量（g/L）?、蜃雍?IU/ml) 40 20 24 84 χ2　P 56.41±4.13 59.60±5.41 58.91±7.52 57.88±5.70 4.536 0.1035 0.83±0.13 0.96±0.26 1.40±0.51 1.02±0.39 38.285 0.0001

由表1可知，血漿蛋白含量均值從大到小為方法2、3和1，Ⅷ因子含量均值從大到小為方法3、2和1，但兩者含量的標(biāo)準(zhǔn)差從大到小均為方法3、2和1。

血漿蛋白含量三種方法比較其差異不具統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），其兩兩之間比較，方法1與2的差異具統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.017），但方法1與3，方法2與3的差異均不具統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.017）。

Ⅷ因子含量三種方法比較其差異具統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），其兩兩之間比較，方法1與2的差異不具統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.017），但方法1與3，方法2 與3的差異均具統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.017）。

2.3容量分析結(jié)果三種方法制備的新鮮冰凍血漿產(chǎn)品分為三個規(guī)格，即200ml、150ml及100ml，國家標(biāo)準(zhǔn)的容量要求為標(biāo)示量(ml)±10%，我中心對這三個規(guī)格的紅細(xì)胞設(shè)置的標(biāo)示量分別為200ml、150ml及100ml。我中心日常對三種方法制備的新鮮冰凍血漿產(chǎn)品進(jìn)行隨機(jī)抽取重量稱量，然后換算成容量。

經(jīng)方差分析、秩和檢驗及bonferroni法調(diào)整檢驗水準(zhǔn)進(jìn)行分析，三種方法制備的新鮮冰凍血漿產(chǎn)品容量統(tǒng)計見表2。

表2　三種方法新鮮冰凍血漿產(chǎn)品容量的分析（±s）

表2　三種方法新鮮冰凍血漿產(chǎn)品容量的分析（±s）

注：三種方法制備的200ml新鮮冰凍血漿容量兩兩比較，方法1與2：χ2=0.025，P=0.8732；方法1與3：χ2=0.059，P=0.8085；方法2與3：χ2=1.087，P=0.2971。三種方法制備的150ml新鮮冰凍血漿容量兩兩比較，方法1與2：χ2=80.814，P=0.0001；方法1與3：χ2=98.027，P= 0.0001；方法2與3：χ2=4.469，P=0.0345。三種方法制備的100ml新鮮冰凍血漿容量兩兩比較，方法1與2：χ2=47.642，P=0.0001；方法1與3：χ2=10.286，P=0.0013；方法2與3：χ2=14.759，P=0.0001。

項目　n（袋）容量（ml）200ml 150ml 100ml方法1方法2方法3總計40 690 695 1425 n（袋）53 678 345 1076 21 169 22 212 χ2　P 209±7.48 213±18.22 210±6.39 211±13.57 1.054 0.5903容量（ml）n（袋）容量（ml）157±5.43 173±12.33 175±10.65 173±12.16 95.475 0.0001 105±4.02 126±10.72 115±13.18 123±12.63 58.032 0.0001

三種方法制備的200ml新鮮冰凍血漿容量比較其差異不具統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），其兩兩之間比較，差異均不具統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.017）。

三種方法制備的150ml新鮮冰凍血漿容量比較其差異具統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），其兩兩之間比較，方法1與2、方法1與3的差異具統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.017），但方法2與3的差異不具統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.017）。

三種方法制備的100ml新鮮冰凍血漿容量比較其差異具統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），其兩兩之間比較，差異均具統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.017）。

3　討論

我中心使用的三種方法均依據(jù)國家相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)規(guī)程[9]，濾白、人工熱合的過程均相同，不同的是離心、分漿過程。方法1第一次離心分漿時采用的是虹吸法，在盡可能多的血漿分出時無法有效控制紅細(xì)胞混入血漿的情況，所以絕大部分血漿是需要經(jīng)過二次離心制備。方法2因離心參數(shù)設(shè)置的原因，雖然通過壓板擠壓分漿，但第一次離心后上層血漿仍混有少量紅細(xì)胞，故也需經(jīng)二次離心制備血漿。方法3調(diào)整了離心參數(shù)，有效控制離心后上層血漿紅細(xì)胞量，且儀器分離通過壓板擠壓分漿，探測器有效控制紅細(xì)胞擠壓混入，因此可實現(xiàn)絕大部分血漿不需二次離心制備。

從表1可以看到，三種方法制備血漿其血漿蛋白含量差異不具統(tǒng)計學(xué)意義，但Ⅷ因子含量差異具統(tǒng)計學(xué)意義，說明三種方法的操作差異對血漿蛋白含量影響不明顯，但對Ⅷ因子含量影響明顯。分析原因，Ⅷ因子為不穩(wěn)定的凝血因子，制備時間長短會對其含量造成影響[10]。由于方法3分離制備絕大部分都是一次成漿，制備時間比方法1 和2都要短，因此Ⅷ因子的存活時間比方法1和2要長，含量自然也高。而血漿蛋白是血漿中最主要的固體成分，其含量主要與獻(xiàn)血者相關(guān)，受制備影響較小，因此三種方法對其影響不明顯。

從表2可以看到，三種方法制備200ml血漿容量的差異不具統(tǒng)計學(xué)意義，而150ml和100ml血漿容量差異具統(tǒng)計學(xué)意義，特別是100ml血漿容量，其三種方法兩兩比較其差異均具統(tǒng)計學(xué)意義。這說明血漿規(guī)格量越小，方法的差異對其影響越大，這是因為規(guī)格量越小，增減的量越易對容量產(chǎn)生影響。

綜上所述，使用三種方法對全血進(jìn)行分離制備，制備出的血漿產(chǎn)品質(zhì)量均符合國家標(biāo)準(zhǔn)。三種方法制備血漿血漿蛋白含量的差異無統(tǒng)計學(xué)意義，Ⅷ因子的差異有統(tǒng)計學(xué)意義，方法3制備的血漿其Ⅷ因子含量最高。血漿規(guī)格越小，方法差異對血漿容量的影響越大。

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(收稿日期2015-12-29；修回日期2016-03-18)

基金項目：江西衛(wèi)生和計劃生育委員會課題（編號20155618）

DOI：10.3969/j.issn.1674-1129.2016.02.017

中圖分類號：R457.1+2

文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A

文章編號：1674-1129(2016)02-0180-03