鼻咽癌組織血管生成擬態(tài)觀察及其意義

葉浩昕，范紹翀，潘永，鐘曉聲，李江，戴智梅，嚴(yán)睿成

(廣州市增城區(qū)人民醫(yī)院，廣州511300)

鼻咽癌組織血管生成擬態(tài)觀察及其意義

葉浩昕，范紹翀，潘永，鐘曉聲，李江，戴智梅，嚴(yán)睿成

(廣州市增城區(qū)人民醫(yī)院，廣州511300)

目的 觀察鼻咽癌組織中血管生成擬態(tài)(VM)情況，并探討其與患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系。方法 選擇鼻咽癌組織(鼻咽癌組)82例份和鼻咽慢性炎癥組織(炎癥組)30例份，采用CD31和PAS雙重染色檢測VM情況，并分析其與鼻咽癌患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系。結(jié)果 鼻咽癌組23例份(28.05%)存在VM，炎癥組不存在VM，兩組VM陽性率比較有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.01)。VM與鼻咽癌患者年齡、性別、組織類型均無關(guān)(P均>0.05)，而與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.01)。Pearson相關(guān)分析顯示，VM陽性率與鼻咽癌患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)(r=0.502，P<0.01)。結(jié)論 鼻咽癌組織中存在VM，且與患者的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。

鼻咽癌；血管生成擬態(tài)；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移；預(yù)后

惡性腫瘤需要獲得足夠血供，才能滿足其快速生長的需求[1]。經(jīng)典觀點認(rèn)為，只有內(nèi)皮細(xì)胞才能形成血管，但是當(dāng)內(nèi)皮細(xì)胞依賴性血管不能滿足快速生長的腫瘤組織時，非內(nèi)皮細(xì)胞的血管性結(jié)構(gòu)會出現(xiàn)在惡性腫瘤組織中，以滿足其生長需要，這一現(xiàn)象被稱為血管生成擬態(tài)(VM)[2]。研究發(fā)現(xiàn)，在宮頸癌[3]、黑色素瘤[4]、卵巢癌[5]、前列腺癌[6]、惡性膠質(zhì)瘤[7]、骨肉瘤[8]、肺癌[9]組織中均存在VM，但目前關(guān)于鼻咽癌組織是否存在VM及其與患者臨床病理參數(shù)關(guān)系的報道較少，為此我們進(jìn)行了如下研究。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 收集2012年1月～2015年4月在我院病理科存檔的鼻咽癌組織82例份(鼻咽癌組)，均經(jīng)組織病理檢查確診?；颊吣?8例、女24例，年齡29～78歲、平均46.2歲；伴頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移32例，不伴轉(zhuǎn)移50例；組織類型分化型非角化性57例，未分化型非角化性25例。另選同期鼻咽部慢性炎癥組織20例份(炎癥組)，患者男15例、女5例，年齡25～71歲、平均44.1歲。兩組性別、年齡具有可比性。本研究均獲得患者的知情同意，并經(jīng)過醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)。

1.2 VM觀察 兩組組織均由4%中性緩沖甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋后進(jìn)行VM觀察。①HE染色：石蠟組織3 μm厚度切片，常規(guī)脫蠟至水。蘇木素染色2 min，自來水洗2～3 min，1%鹽酸乙醇分化6 s，自來水返藍(lán)20 min，伊紅染色5 min。常規(guī)梯度乙醇脫水，二甲苯透明，干片后中性樹膠封片，光學(xué)顯微鏡400倍下由高年資病理醫(yī)師進(jìn)行觀察。②免疫組化CD31聯(lián)合PAS雙重染色：石蠟組織3 μm厚度切片，常規(guī)脫蠟至水，加入檸檬酸鹽抗原修復(fù)液，高壓鍋加熱修復(fù)3 min。自然冷卻后PBS洗5 min×3次，3%H2O2室溫孵育10 min，PBS洗3 min×3次。加入CD31即用型抗體37 ℃孵育1 h，PBS洗3 min×3次；加入快捷型酶標(biāo)羊抗鼠/兔IgG聚合物20 min，PBS洗3 min×3次。DAB顯色試劑盒顯色，顯微鏡下控色，蒸餾水終止染色，0.5%高碘酸氧化10 min；蒸餾水稍洗，Schiff氏液避光染色20 min，0.5%偏重亞硫酸鈉滴洗2 min×2次；蒸餾水稍洗，蘇木素復(fù)染細(xì)胞核，常規(guī)中性樹膠封片，400倍光學(xué)顯微鏡下由高年資病理醫(yī)師進(jìn)行觀察。VM判斷標(biāo)準(zhǔn):VM為CD31陰性的鼻咽癌細(xì)胞圍成的管腔樣結(jié)構(gòu)，一些管腔內(nèi)可見紅細(xì)胞，其外層被PAS陽性物質(zhì)(紫紅色)圍繞[10]。如管壁有CD31陽性的血管內(nèi)皮細(xì)胞，且PAS染色陽性，則判定為內(nèi)皮依賴性血管；PAS陽性而CD31陰性則判定為非內(nèi)皮依賴性血管，即VM。

1.3 鼻咽癌組織VM陽性與患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系 收集觀察組的臨床資料(性別、年齡、組織類型、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移)，并分析其與VM陽性的關(guān)系。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件。率的比較采用χ2檢驗。相關(guān)性分析采用Pearson相關(guān)分析。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組VM情況 ①HE染色：部分鼻咽癌組織中存在有癌細(xì)胞圍繞的呈管腔樣、網(wǎng)格樣結(jié)構(gòu)，內(nèi)無血管內(nèi)皮細(xì)胞被覆(見插頁Ⅲ圖5A)。②CD31和PAS雙重染色：鼻咽癌組織中血管表現(xiàn)為CD31及PAS陽性；管腔樣、網(wǎng)格樣結(jié)構(gòu)PAS陽性、CD31陰性，符合VM的染色表現(xiàn)，且存在VM的腫瘤區(qū)域很少出現(xiàn)壞死；一些CD31和PAS均陰性的網(wǎng)格樣及管道樣結(jié)構(gòu)既不是血管也不屬于VM表現(xiàn)(見插頁Ⅲ圖5B)。觀察組中23例份(28.05%)存在VM，對照組中不存在VM，兩組VM陽性率比較有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.01)。

2.2 VM與鼻咽癌患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系 VM與鼻咽癌患者的年齡、性別、組織類型均無關(guān)(P均>0.05)，而與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.01)，見表1。Pearson相關(guān)分析顯示，VM陽性率與鼻咽癌患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)(r=0.502，P<0.01)。

表1 VM與鼻咽癌患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系

3 討論

鼻咽癌早期不具有特異性臨床表現(xiàn)，因此確診時患者往往處于中晚期。臨床上70%以上的鼻咽癌患者以頸部腫大結(jié)節(jié)就診，其特點是容易發(fā)生浸潤和轉(zhuǎn)移，局部復(fù)發(fā)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移是其治療失敗的主要原因[10]。研究表明，VM在腫瘤的生長及轉(zhuǎn)移過程中具有重要作用，腫瘤患者存在VM者生存期更短，并且比無VM者更容易發(fā)生轉(zhuǎn)移；VM還能降低抗腫瘤血管生成藥物的治療效果[11]。因此，VM在腫瘤的生物學(xué)行為中可能具有重要的作用和意義。

本研究發(fā)現(xiàn)，鼻咽癌組織中有23例傷符合VM表現(xiàn)的管腔樣、網(wǎng)格樣結(jié)構(gòu)，證實鼻咽癌組織中存在VM，且存在VM的腫瘤區(qū)域很少出現(xiàn)壞死，間接證實了VM是一種功能性循環(huán)結(jié)構(gòu)。研究表明，VM不僅是腫瘤獲得血供的一種方式，而且與腫瘤的臨床分期、分級和腫瘤的轉(zhuǎn)移、預(yù)后等均有一定相關(guān)性[5,7,9]。頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是鼻咽癌患者就診的主要原因，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與鼻咽癌患者的臨床分期及預(yù)后有直接關(guān)系[12]。本研究結(jié)果顯示，VM與鼻咽癌患者的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)，而與患者的年齡、性別、組織類型均無關(guān)(本研究未探討VM與鼻咽癌臨床分期的關(guān)系，原因為Ⅲ期以上患者例數(shù)過少)。既往研究表明，鼻咽癌臨床分期為Ⅰ期和Ⅱ期的患者VM陽性率比較無明顯差異，且患者預(yù)后基本相同[12]。因此推測， VM現(xiàn)象的存在可能提示更高的鼻咽癌臨床分期以及更差的預(yù)后，但尚待長期的隨訪及更大樣本資料的支持。

綜上所述，鼻咽癌組織中存在VM，且與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。本研究樣本量較少，尚不足以形成足夠的證據(jù)證明VM與患者的預(yù)后有關(guān)，但多項研究表明，VM主要存在于高度惡性和高轉(zhuǎn)移能力的惡性腫瘤中[4～9]。因此，我們推測鼻咽癌組織中存在VM者更易發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，且預(yù)后更差。

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范紹翀(E-mail: fansc32@163.com)

10.3969/j.issn.1002-266X.2016.20.036

R766.3

B

1002-266X(2016)20-0091-02

2015-08-03)