復(fù)方中藥組方對高尿酸血癥影響的研究

張　揚(yáng)(連云港市贛榆區(qū)人民醫(yī)院藥劑科，江蘇 連云港　222100)

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復(fù)方中藥組方對高尿酸血癥影響的研究

張揚(yáng)*(連云港市贛榆區(qū)人民醫(yī)院藥劑科，江蘇 連云港222100)

DOI10.14009/j.issn.1672-2124.2016.03.029

摘要目的：研究復(fù)方中藥組方(AG)對高尿酸血癥的治療作用。方法：分別用酵母，氧嗪酸鉀鹽，腺嘌呤和乙胺丁醇三種方法誘導(dǎo)高尿酸血癥模型，給藥后通過檢測尿酸(UA)、黃嘌呤氧化酶(XOD)、腺苷脫氨酶(ADA)等指標(biāo)，探討AG的治療作用。結(jié)果：AG各劑量組均可顯著降低酵母所致小鼠高尿酸血癥的血清UA值，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；AG高劑量組可顯著降低氧嗪酸鉀鹽所致小鼠高尿酸血癥的血清UA值，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；AG各劑量組在7、14、21 d均可極顯著的降低腺嘌呤和乙胺丁醇大鼠高尿酸血癥的血清UA值，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)；在此模型中，7、14 d 時AG高、中劑量組小鼠的尿液UA值顯著降低，低劑量組小鼠尿液UA值在7 d有顯著的降低，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；AG各劑量組的血清XOD活力均有極顯著的降低，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。結(jié)論：AG對不同造模法所致的高尿酸血癥均有減低體內(nèi)血清UA含量，抑制UA生成的作用。

關(guān)鍵詞復(fù)方中藥組方； 高尿酸血癥； 尿酸

Research on Effects of Chinese Medicines Section(AG) on Hyperuricemia

ZHANG Yang(Dept.of Pharmacy, Lianyungang Ganyu District People’s Hospital， Jiangsu Lianyungang 222100, China)

ABSTRACTOBJECTIVE：To research the treatment effects of Chinese medicines section(AG) on hyperuricemia. METHODS: Three methods interms of yeast, oxonic acid potassium salt, adenine and ethambutol were used to induce hyperuricaemia model; the treatment effects of AG were investigated through the detection of uric acid(UA), xanthine oxidase(XOD) and adenosine deaminase(ADA) and some other indexes after administration. RESULTS: Different dose groups of AG could significantly decrease the serum UA value in the hyperuricemia mice which induced by yeasts, the difference was statistically significant(P<0.05). The high dose group of AG could significantly decrease the serum UA value in the hyperuricemia mice which induced by oxonic acid potassium salt, with statistical significance(P<0.05). Different dose groups of AG could significantly decrease the serum UA value in the hyperuricemia rat induced by adenine and ethambutol in 7 d, 14 d and 21 d, with statistically significant difference(P<0.01). In this model, high and middle dose group of AG could significantly decrease the level of urine UA value in 7 d and 14 d, and low dose group of AG could significantly decrease the level of urine UA value in 7 d, with statistically significant difference(P<0.05)；Different dose groups of AG could significantly decrease the serum XOD activity , the difference was statistically significant(P<0.01). CONCLUSIONS: AG could significantly decrease the serum UA value in different models induced by hyperuricemia and inhibit the generation of UA.

KEYWORDSChinese medicines section; Hyperuricemia; Uric acid

痛風(fēng)是一種以持續(xù)性高尿酸血癥導(dǎo)致尿酸鈉晶體在關(guān)節(jié)及其周圍組織沉積為特征的嘌呤代謝性疾病[1]。血尿酸(UA)升高是痛風(fēng)、高尿酸血癥的重要生化指標(biāo)[2-3]，高尿酸血癥被認(rèn)為是發(fā)生痛風(fēng)的前期狀態(tài)。近年來，高尿酸血癥和痛風(fēng)的發(fā)病率日益增高，人們越來越重視藥物治療和新藥地研發(fā)。目前，治療高尿酸血癥的藥物主要包括抑制UA生成的藥物，如別嘌呤醇；促進(jìn)UA排泄的藥物，如苯溴馬隆；尿酸酶類藥物，如拉布立酶等[4-5]。連云港市贛榆區(qū)人民醫(yī)院(以下簡稱“我院”)根據(jù)傳統(tǒng)中醫(yī)配方研制出復(fù)方中藥組方(AG)，經(jīng)初步篩選發(fā)現(xiàn)療效較好，本研究通過藥理研究手段探討AG對實(shí)驗(yàn)動物高尿酸血癥的治療作用及影響機(jī)制，現(xiàn)報告如下。

1資料和方法

1.1實(shí)驗(yàn)動物

清潔級小鼠140只(18～22 g)，雄性，由揚(yáng)州大學(xué)比較醫(yī)學(xué)中心提供，許可證號：SCXK蘇2014-0007；清潔級大鼠80只(180～220 g)，雄性，由浙江省實(shí)驗(yàn)動物中心提供，許可證號：SCXK浙2014-0008。

1.2藥品與試劑

AG：包括三七、冰片等成分，現(xiàn)成分及配比保密，將該復(fù)方濃縮成浸膏并干燥，1 g浸膏相當(dāng)于6.8 g生藥，三七及冰片磨成粉末入藥，各成分按照處方混合。藥物配制：臨用前用0.5%羧甲基纖維素鈉(CMC-Na)研磨配制成所需濃度的均勻混懸液。苯溴馬?。旱聡諣柭笏帍S，規(guī)格：50 mg/片，批號：1300894。別嘌呤醇：上海信誼萬象藥業(yè)股份有限公司，規(guī)格：0.1 g/片，批號：130823-01。痛風(fēng)舒片：湖南康普制藥有限公司，規(guī)格：0.32 g/片，批號：20131102。氧嗪酸鉀鹽：美國Sigma-Aldrich公司，批號：2213-75-2。酵母：英國oxoid公司，批號：1355226。腺嘌呤：美國Sigma公司，批號：A8626。鹽酸乙胺丁醇片：杭州民生藥業(yè)有限公司，規(guī)格：0.25g/片，批號：T13D521。尿酸試劑盒：南京建成生物工程研究所，批號：20140422。黃嘌呤氧化酶(XOD)測試盒：南京建成生物工程研究所，批號：20140329。腺苷脫氨酶(ADA)測試盒：南京建成生物工程研究所，批號：20140329。

1.3方法

1.3.1酵母所致小鼠高尿酸血癥模型的建立及實(shí)驗(yàn)方法：取雄性小鼠70只，體質(zhì)量18～22 g，按隨機(jī)數(shù)字表法分為空白對照組、模型對照組、別嘌呤醇組及痛風(fēng)舒片對照組，AG高、中、低劑量組，每組10只。除空白對照組外，其余各組以酵母40 g/kg劑量灌胃給藥，連續(xù)7 d，別嘌呤醇組、痛風(fēng)舒片組和AG各劑量組于第5日開始灌胃給藥，連續(xù)3 d。第8日眼眶取血[6]，測定小鼠血清UA和XOD活性，即1 L血清/漿在37 ℃時1 min轉(zhuǎn)化1 μm的底物所需的酶量為1個酶活力單位(U)。血清UA值(mg/L)=(標(biāo)準(zhǔn)管OD值-空白管OD值)/(測定管OD值-空白管OD值)×50 mg/L；XOD活力(U/L)=(測定管OD值-空白管OD值)/呈色物摩爾消光系數(shù)×樣品稀釋倍數(shù)×1/(光徑×反應(yīng)時間)。

1.3.2氧嗪酸鉀鹽所致小鼠高尿酸血癥模型的建立和實(shí)驗(yàn)方法：氧嗪酸鉀鹽是一種尿酸酶抑制劑，作為化學(xué)誘導(dǎo)劑可抑制尿酸分解，增加體內(nèi)血清尿酸水平，極顯著地提高小鼠血清尿酸水平，造成小鼠高尿酸血癥模型，模型中動物血清尿酸水平能維持5 h[7]。

取雄性小鼠70只，體質(zhì)量18～22 g，按隨機(jī)數(shù)字表法分為空白對照組、模型對照組、苯溴馬隆組及痛風(fēng)舒片組，AG高、中、低劑量組，每組10只。除空白對照組外，其余各組在取血前2 h用氧嗪酸鉀鹽按300 mg/kg劑量腹腔注射給藥，各給藥組在取血前1 h分別灌胃給藥。然后各組分別在注射造模后2 h后眼眶取血[8]，測血清UA值和XOD活性。血清UA值(mg/L)=(標(biāo)準(zhǔn)管OD值-空白管OD值)/(測定管OD值-空白管OD值)×50 mg/L；

XOD活力(U/L)=(測定管OD值-空白管OD值)/呈色物摩爾消光系數(shù)×樣品稀釋倍數(shù)×1/(光徑×反應(yīng)時間)。

1.3.3腺嘌呤和乙胺丁醇所致大鼠高尿酸血癥的建立和實(shí)驗(yàn)方法：取大鼠80只，雄性，體質(zhì)量180～220 g，分為空白對照組、模型對照組、苯溴馬隆組、別嘌呤醇組和痛風(fēng)舒片對照組，AG高、中、低劑量組。除空白對照組外，其他各組用腺嘌呤(100 mg/kg)+乙胺丁醇(250 mg/kg)[9]在上午定時灌胃，空白對照組組灌胃蒸餾水5 ml/kg，各組均從誘導(dǎo)模型時開始在下午定時灌胃預(yù)防給藥，給藥時間均為3周。每日均對大鼠的一般情況進(jìn)行觀察，每7 d禁食眼眶取血1次，分離血清，并采集尿液，測血清及尿液UA含量；第21日實(shí)驗(yàn)結(jié)束時,大鼠眼眶取血，按試劑盒說明測血清中黃嘌呤氧化酶(XOD)和腺苷脫氨酶(ADA)的活性。血清UA值(mg/L)=(標(biāo)準(zhǔn)管OD值-空白管OD值)/(測定管OD值-空白管OD值)× 50 mg/L；尿液UA值(mg/L)=(標(biāo)準(zhǔn)管OD值-空白管OD值)/(測定管OD值-空白管OD值)× 50 mg/L × 尿液稀釋倍數(shù)；XOD活力(U/L)=(測定管OD值-空白管OD值)/呈色物摩爾消光系數(shù)×樣品稀釋倍數(shù)×1/(光徑×反應(yīng)時間)；ADA活力(U/mL)=(測定管OD值-對照管OD值)/(標(biāo)準(zhǔn)管OD值-空白管OD值)× 25 μg/ml。

1.4統(tǒng)計學(xué)方法

2結(jié)果

2.1AG對酵母所致小鼠高尿酸血癥的作用

AG對酵母所致小鼠高尿酸血癥的作用結(jié)果見表1。

Tab 1Effects of AG on hyperuricemia mice induced

組別劑量/(mg/kg)血清UA值/(mg/L)血清XOD活力/(U/L)空白對照組(n=10)48.58±6.916.80±1.22模型對照組(n=10)54.33±4.99#8.28±1.09#別嘌呤醇組(n=10)4022.65±5.07**5.95±1.16**痛風(fēng)舒片組(n=10)60044.13±6.35**6.57±0.73**AG組高劑量組(n=10)45028.65±6.33**6.69±1.01**中劑量組(n=10)22538.46±7.93**6.95±1.23*低劑量組(n=10)11345.67±10.92*7.65±2.17

注：與空白對照組比較，#P<0.05，與模型對照組比較，*P<0.05，**P<0.01

Note: vs. the blank control group,#P<0.05，vs. the model control group,*P<0.05，**P<0.01

2.2AG對氧嗪酸鉀鹽所致小鼠高尿酸血癥的作用

AG對氧嗪酸鉀鹽所致小鼠高尿酸血癥的作用結(jié)果見表2。

2.3AG對腺嘌呤和乙胺丁醇所致大鼠高尿酸血癥的作用

AG對腺嘌呤和乙胺丁醇所致大鼠高尿酸血癥血清UA值的作用結(jié)果見表3，AG對腺嘌呤和乙胺丁醇所致大鼠高尿酸血癥尿液UA值的作用結(jié)果見4，AG對腺嘌呤和乙胺丁醇所

Tab 2Effects of AG on hyperuricemia mice induced

組別劑量/(mg/kg)血清UA值/(mg/L)血清XOD活力/(U/L)空白對照組(n=10)54.89±6.458.28±1.31模型對照組(n=10)74.78±7.22##8.42±1.30苯溴馬隆組(n=10)2022.93±3.60**6.90±1.26*痛風(fēng)舒片組(n=10)60070.65±9.188.00±1.46AG組高劑量組(n=10)45066.09±9.51*7.45±1.40中劑量組(n=10)22567.61±11.687.88±1.58低劑量組(n=10)11371.09±9.458.30±1.65

注：與空白對照組比較，##P<0.01，與模型對照組比較，*P<0.05，**P<0.01

Note: vs. the blank control group，##P<0.01，vs. the model control group,*P<0.05，**P<0.01

3討論

AG是我院研究開發(fā)的治療通風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的中藥復(fù)方，配方包括三七、冰片等，對治療痛風(fēng)有較好效果。本研究中的三種高尿酸血癥模型造模原理稍有不同，酵母是UA的前體物質(zhì)，大量攝入可促進(jìn)UA產(chǎn)生；氧嗪酸鉀鹽是尿酸酶抑制劑，可抑制UA分解；腺嘌呤和乙胺丁醇均可抑制腎臟排泄UA，使血UA水平升高[8-10]。XOD是嘌呤合成和代謝最后形成尿酸的關(guān)鍵酶[11]，可連續(xù)氧化黃嘌呤、次黃嘌呤生成UA，直接調(diào)控體內(nèi)UA水平的變化[12]。ADA可催化腺嘌呤核苷分解為次黃嘌呤核苷，而后經(jīng)核苷磷酸化酶催化生成次黃嘌呤，再經(jīng)XOD的氧化作用最終生成尿酸[13]，XOD和ADA活性的升高有利于促進(jìn)這些核酸的分解代謝，使UA生成增加[14]。

表3　AG對腺嘌呤和乙胺丁醇所致大鼠高尿酸血癥血清UA值的作用±s)

注：與空白對照組比較，##P<0.01，與模型對照組比較，**P<0.01

Note: vs. the blank control group，##P<0.01， vs. the model control group，**P<0.01

表4　AG對腺嘌呤和乙胺丁醇所致大鼠高尿酸血癥尿液UA值的作用±s)

注：與模型對照組比較，*P<0.05，**P<0.01

Note: vs. the model control group,*P<0.05，**P<0.01

致大鼠高尿酸血癥血清XOD及ADA活力的作用結(jié)果見5。

表5　AG對腺嘌呤和乙胺丁醇所致大鼠高尿酸血癥血清

注：與空白對照組比較，##P<0.01，與模型對照組比較，**P<0.01

Note: vs. the blank control group，##P<0.01，vs. the model control group，**P<0.01

在酵母所致高尿酸血癥模型中，與空白對照組比較，模型對照組小鼠的血清UA值有顯著的提高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，造模成功。與模型對照組比較，別嘌呤醇組和痛風(fēng)舒片組小鼠的血清UA值有極顯著的降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)；AG組中，高、中劑量組小鼠的血清UA值有極顯著的降低，低劑量組的血清UA值有顯著的降低，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01，P<0.05)。說明AG各劑量均可顯著地降低酵母所致小鼠高尿酸血癥的血清UA值，對高尿酸血癥有治療作用。與空白對照組比較，模型對照組組小鼠的血清XOD值有顯著的提高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，說明此高尿酸血癥模型是通過增加體內(nèi)嘌呤物質(zhì)含量，提高XOD活力，來提高體內(nèi)UA含量的。與模型對照組比較，別嘌醇組和痛風(fēng)舒片組小鼠的血清XOD值有極顯著的降低；AG高劑量組的血清XOD值有極顯著的降低，中劑量組的血清XOD值有顯著的降低，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01，P<0.05)。說明AG可以在一定程度上降低酵母所致小鼠高尿酸血癥的血清XOD活力，對高尿酸血癥達(dá)到治療的效果。

在氧嗪酸鉀鹽所致小鼠高尿酸血癥中，與空白對照組比較，模型組小鼠的血清UA值有極顯著的提高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)，說明氧嗪酸鉀鹽造模成功。與模型對照組比較，苯溴馬隆組小鼠的血清UA值有極顯著的降低；AG高劑量組的血清UA值有顯著的降低，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01，P<0.05)。說明在單次治療給藥途徑下，苯溴馬隆組和AG高劑量組可降低尿酸酶缺乏時異常提高的血清UA值，達(dá)到治療高尿酸血癥的目的。與空白對照組比較，模型組小鼠的血清XOD值無較大變化，說明造模劑氧嗪酸鉀鹽對XOD活性無影響。與模型對照組比較，苯溴馬隆組小鼠的血清XOD活力有顯著的降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，說明苯溴馬隆可降低尿酸酶缺乏所致小鼠高尿酸血癥模型的XOD活性。

在腺嘌呤和乙胺丁醇所致大鼠高尿酸血癥模型中，與空白對照組比較，模型組的血清UA值有極顯著的提高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)，說明利用腺嘌醇和乙胺丁醇造大鼠高尿酸血癥模型成功。與模型對照組比較，苯溴馬隆組、別嘌呤醇組、痛風(fēng)舒片組的血清UA值在7、14、21 d均極顯著的降低；AG各劑量組的血清UA值在7、14、21 d均極顯著的降低，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。與空白對照組比較，模型對照組大鼠尿液的UA值無明顯變化，說明此大鼠高尿酸血癥模型造模成功，體內(nèi)UA生成增加但UA排泄并無顯著提高。與模型對照組比較，苯溴馬隆組大鼠尿液UA值在7、14、21 d均極顯著的提高；別嘌呤醇組大鼠的尿液UA值在7、21 d有極顯著的降低，在14 d有顯著的降低，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01，P<0.01，P<0.05)；AG高、中劑量組大鼠的尿液UA值在7 d及14 d有顯著的降低，低劑量組的尿液UA值在7 d有顯著的降低，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。與模型對照組比較，空白對照組大鼠的血清XOD活力有極顯著的提高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)，說明此大鼠高尿酸血癥模型造模成功，體內(nèi)UA生成增加。與空白對照組比較，苯溴馬隆組、別嘌呤醇組及痛風(fēng)舒片組大鼠血清XOD活力均有極顯著的降低；AG各劑量組的血清XOD活力均有極顯著的降低，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。與模型對照組比較，空白對照組大鼠的血清ADA活力極顯著的提高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)，說明此大鼠高尿酸血癥模型造模成功，體內(nèi)UA生成增加。與空白對照組比較，別嘌醇組的血清ADA活力極顯著的降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，AG對不同造模方法所致的小鼠及大鼠高尿酸血癥模型均有降低體內(nèi)血清UA含量，抑制UA生成的作用[15]，其中預(yù)防給藥比單次治療給藥治療高尿酸血癥作用更好，其治療作用可能是通過抑制UA合成來實(shí)現(xiàn)的，是否有促進(jìn)UA排泄的功能還需要進(jìn)一步的研究。

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(收稿日期：2015-11-09)

中圖分類號R932

文獻(xiàn)標(biāo)志碼A

文章編號1672-2124(2016)03-0360-04

*主管藥師。研究方向：藥學(xué)、醫(yī)改、農(nóng)村公共衛(wèi)生。 E-mail：gyxwsjdcb@126.com