芍藥苷對(duì)深Ⅱ度燙傷誘導(dǎo)的肝損傷小鼠肝組織Bax、Caspase-3表達(dá)的影響

韓玉芳，張　瑋，蘇瑜恒，張　潔，張　偉，路　瑤

芍藥苷(paeoniflorin，PF)是從中草藥芍藥中提取的化合物，在藥物化學(xué)分類中屬于單萜類糖苷化合物[1]。近些年來，大量基礎(chǔ)研究提示芍藥苷具有一定的藥理作用[2]。燙傷是日常生活和戰(zhàn)時(shí)常見且復(fù)雜的外傷疾病，燙傷可導(dǎo)致休克、組織器官缺血缺氧，進(jìn)一步損傷肝腎肺等實(shí)體器官[3]。近幾年，中藥成分用于燙傷所致臟器損傷是研究熱點(diǎn)之一[4]。作者通過研究芍藥苷對(duì)深Ⅱ度燙傷誘導(dǎo)的肝損傷小鼠肝組織谷丙轉(zhuǎn)氨酶(alanine transaminase，ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(glutamic-oxalacetic transaminase，AST)水平和Bax、Caspase-3表達(dá)，為燙傷所誘發(fā)的肝損傷防治提供依據(jù)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1　材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)用品與試劑組織蠟塊切片機(jī)(德國(guó)Leica公司)，芍藥苷(西安昊軒生物科技有限責(zé)任公司)，ALT與AST試劑盒(艾美捷科技有限公司)，兔源單抗Bax、Caspase-3(美國(guó)CST公司生產(chǎn))，ABC免疫組化試劑盒(天津麥蘭波公司)，DAB組化顯色試劑套裝(天津麥蘭波公司)。

1.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物雄BABc小鼠30只，體質(zhì)量25～30 g，由軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，在SPF級(jí)條件下飼養(yǎng)。

1.3動(dòng)物建模與用藥30只BABc小鼠隨機(jī)分為3組，每組10只，分別為對(duì)照組、模型組、芍藥苷組。對(duì)模型組、芍藥苷組小鼠進(jìn)行Ⅱ度燙傷處理：實(shí)驗(yàn)前使用100 g·L-1硫化鈉背部去毛，采用水合氯醛(400 mg·kg-1)麻醉小鼠，采用90 ℃熱水燙傷小鼠皮膚，造成占15%體表總面積的深Ⅱ度創(chuàng)面[5]。芍藥苷組則在建模前按60 mg·kg-1芍藥苷進(jìn)行灌胃1次。

1.4樣品采集與處理燙傷后12 h處死小鼠，并取血與肝組織，檢測(cè)ALT與AST 水平變化情況。肝臟固定于4%中性甲醛溶液中，按病理科實(shí)驗(yàn)程序制作組織石蠟切片，然后進(jìn)行HE染色與免疫組化標(biāo)記Bax、Caspase-3表達(dá)與定位。

2　結(jié)果

2.1小鼠ALT與AST水平變化與對(duì)照組比較，燙傷處理后的小鼠血清 ALT與AST 水平顯著上升，兩組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；而芍藥苷組經(jīng)芍藥苷提前預(yù)處理后，小鼠血清ALT與AST水平與模型組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與對(duì)照組比較，芍藥苷組小鼠血清 ALT與AST 水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見表1。

表1　芍藥苷對(duì)損傷小鼠ALT與AST的影響(n=10)　U/L

注：①與模型相比較：P<0.05。

2.2小鼠肝組織病理變化在HE染色中，與對(duì)照組相比，燙傷處理后小鼠肝臟組織出現(xiàn)細(xì)胞水腫，部分區(qū)域可見壞死，且壞死誘發(fā)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，損傷程度明顯，較嚴(yán)重區(qū)域可見肝小葉結(jié)構(gòu)遭受破壞。而芍藥苷預(yù)處理后小鼠肝臟組病理學(xué)改變明顯減輕，肝小葉結(jié)構(gòu)較完整，見圖1。

2.3肝損傷小鼠Bax、Caspase-3表達(dá)對(duì)3組小鼠肝組織進(jìn)行免疫組化染色，光鏡下可見肝臟細(xì)胞胞漿內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒，此著色間接體現(xiàn)為Bax、Caspase-3表達(dá)陽(yáng)性。Bax與Caspase-3蛋白在對(duì)照組小鼠肝組織中呈低表達(dá)，而燙傷處理后的小鼠肝組織Bax、Caspase-3表達(dá)增高；芍藥苷預(yù)處理的小鼠肝組織Bax、Caspase-3表達(dá)均有不同程度減少，結(jié)果提示芍藥苷可抑制深Ⅱ度燙傷誘導(dǎo)的肝損傷小鼠肝組織Bax、Caspase-3表達(dá)，見圖2。

圖1　小鼠肝組織病理變化(HE，×400)

圖2　小鼠肝組織Bax、Caspase-3 表達(dá)(免疫組化染色,×400)

3　討論

嚴(yán)重燙傷后各器官會(huì)發(fā)生不同程度的缺血缺氧損傷[6]，若不及時(shí)治療 ，會(huì)產(chǎn)生大量氧自由基、炎性介質(zhì)等有害物質(zhì)[7-8]，損害各器官功能[9-10]。ALT與AST 主要存在于肝細(xì)胞中，當(dāng)肝細(xì)胞受損時(shí)血中含量增加；深度燙傷可引起肝細(xì)胞損傷，且ALT與AST釋放入血增加[11]。結(jié)果顯示，燙傷后的小鼠血清 ALT與AST 水平顯著上升，而芍藥苷組經(jīng)芍藥苷提前預(yù)處理后，小鼠血清ALT與AST水平與模型組比較顯著減少；與對(duì)照組比較，芍藥苷組小鼠血清 ALT與AST 水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與對(duì)照組相比，燙傷處理后小鼠肝臟組織出現(xiàn)細(xì)胞變性與壞死，壞死誘發(fā)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，損傷程度明顯，較嚴(yán)重區(qū)域可見肝小葉結(jié)構(gòu)遭受破壞；而芍藥苷預(yù)處理后小鼠肝臟組織損傷改變減輕，肝小葉結(jié)構(gòu)較完整。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，芍藥苷可有效減輕深Ⅱ度燙傷誘導(dǎo)的肝損傷。

機(jī)體內(nèi)外各種因素上調(diào)Bax表達(dá)，均能促進(jìn)機(jī)體內(nèi)細(xì)胞凋亡或細(xì)胞壞死[12]。Caspase-3作為蛋白水解酶類，可涉及細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)及細(xì)胞死亡的執(zhí)行[13]，當(dāng)機(jī)體遭到復(fù)雜因素刺激時(shí)，Caspase-3則轉(zhuǎn)為活性片段Cleave Caspase-3，激活凋亡的級(jí)聯(lián)反應(yīng)[14]，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡或死亡[15]。免疫組化結(jié)果表明，對(duì)照組小鼠肝組織Bax、Caspase-3低表達(dá)，模型組小鼠肝組織Bax、Caspase-3陽(yáng)性表達(dá)明顯增多，而芍藥苷組小鼠肝組織Bax、Caspase-3表達(dá)程度均有不同程度降低。經(jīng)芍藥苷干預(yù)的小鼠血清 ALT與AST含量明顯減少，小鼠肝臟組織病理學(xué)結(jié)果得到明顯改善，肝小葉結(jié)構(gòu)較完整，提示芍藥苷可有效減輕深Ⅱ度燙傷誘導(dǎo)的肝損傷，其機(jī)制可能與降低Bax、Caspase-3表達(dá)以抑制肝細(xì)胞凋亡有關(guān)。

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