黃曲霉毒素檢測(cè)方法研究分析

摘 要：黃曲霉毒素是在濕熱環(huán)境中出現(xiàn)的一種曲霉次代謝產(chǎn)物，由于毒性較大，因此對(duì)于人體產(chǎn)生的危害也比其他毒素要顯著。隨著20世紀(jì)微生物學(xué)的發(fā)展，對(duì)于黃曲霉毒素的研究也日益加深。由于黃曲霉毒素極易產(chǎn)生在一些食品中，因此國(guó)際上對(duì)于食品中黃曲霉毒素的含量有一個(gè)嚴(yán)格的限制。而該文就著重對(duì)于黃曲霉毒素的檢測(cè)方法以及研究進(jìn)行分析討論，分析高效液相色譜法以及快速檢測(cè)方法，并對(duì)競(jìng)爭(zhēng)性酶聯(lián)免疫吸附法進(jìn)行重點(diǎn)分析。

關(guān)鍵詞：黃曲霉毒素 檢測(cè)方法 研究

中圖分類(lèi)號(hào)：R284 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1672-3791（2016）08（a）-0054-02

黃曲霉毒素是一類(lèi)物質(zhì)，這類(lèi)物質(zhì)有相似的化學(xué)結(jié)構(gòu)，其主要是黃曲霉與寄生曲霉產(chǎn)生的次生代謝產(chǎn)物。由于其在土壤中以及植物中廣泛存在，因此很容易對(duì)人類(lèi)所攝食的各種農(nóng)作物進(jìn)行感染，進(jìn)而危害人們的身體健康。一旦溫度與濕度達(dá)到一定的范圍內(nèi)，就會(huì)增加食物感染黃曲霉毒素的幾率，這種毒素可急可慢，急性毒素可使人猝死，而慢性毒素會(huì)導(dǎo)致人體患癌癥的幾率大大增加。正是這種巨大的危害性使得諸多國(guó)家對(duì)黃曲霉毒素的檢測(cè)方法進(jìn)行深刻研究，該文就高效液相色譜法與快速檢測(cè)方法進(jìn)行探討分析，并對(duì)競(jìng)爭(zhēng)性酶聯(lián)免疫吸附法進(jìn)行著重介紹。

1 高效液相色譜法

1.1 柱后溴衍生化熒光檢測(cè)

由鄧恩等人在食用調(diào)味品進(jìn)行柱后溴衍操作，然后采用熒光檢測(cè)儀器對(duì)其進(jìn)行檢測(cè)，可以有效地檢測(cè)出被檢測(cè)樣品中的黃曲霉毒素的量，這種定量的檢測(cè)分析操作即是柱后溴衍生化熒光檢測(cè)。在鄧恩團(tuán)隊(duì)得出這一檢測(cè)方法之后，歐洲諸多國(guó)家的研究人員也針對(duì)這一檢測(cè)方法展開(kāi)了研究工作。斯特卡與其他的實(shí)驗(yàn)研究人員將一些農(nóng)作物制備的醬類(lèi)和其他的調(diào)味品作為實(shí)驗(yàn)的研究原料，在這種具備流動(dòng)性質(zhì)的實(shí)驗(yàn)原料添加檢測(cè)所需的溴化物，利用相應(yīng)的熒光檢測(cè)儀器進(jìn)行檢測(cè)，得出基本的數(shù)據(jù)量，然后，向原料中添加兩個(gè)水平的黃曲霉毒素，再用柱后溴衍生化熒光法進(jìn)行檢測(cè)，最終檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，黃曲霉毒素的檢測(cè)增加量為實(shí)際添加量的73%～91%，進(jìn)一步證明了柱后溴衍生化熒光法檢測(cè)黃曲霉毒素的有效性。柱后溴衍生化熒光檢測(cè)由于其準(zhǔn)確性較高，靈敏度較強(qiáng)，要求較低等優(yōu)點(diǎn)曾在一段時(shí)間內(nèi)成為黃曲霉毒素檢測(cè)的關(guān)鍵手段。

1.2 柱后碘衍生化熒光檢測(cè)

柱后碘衍生化熒光檢測(cè)與柱后溴衍生化熒光檢測(cè)相似，但在柱后碘衍生化熒光檢測(cè)當(dāng)中由碘作為熒光追蹤標(biāo)記。這種方法是由歐美以及南非等24個(gè)實(shí)驗(yàn)室聯(lián)合實(shí)驗(yàn)確認(rèn)的。他們?cè)谶M(jìn)行實(shí)驗(yàn)的過(guò)程中，依次采用了柱后碘衍生化熒光檢測(cè)以及柱后溴衍生化熒光檢測(cè)，其單獨(dú)檢測(cè)方式與上述的柱后溴衍生化熒光檢測(cè)方式相同，然后對(duì)檢測(cè)出的黃曲霉毒素進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)。最終數(shù)據(jù)顯示兩者的檢測(cè)精確度相近，但柱后溴衍生化熒光檢測(cè)相比較于柱后碘衍生化熒光檢測(cè)要更加接近。且通過(guò)他們的實(shí)驗(yàn)，最終這種黃曲霉毒素的檢測(cè)方法得到了確立以及廣泛的應(yīng)用，被納入了諸多國(guó)家的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)方法當(dāng)中，同樣也列入了我國(guó)的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)當(dāng)中。

1.3 柱前衍生化熒光檢測(cè)

柱前衍生化熒光檢測(cè)是由我國(guó)的李佐卿等人開(kāi)發(fā)出來(lái)的方法，主要是運(yùn)用親和柱以及三氟醋酸對(duì)待檢驗(yàn)產(chǎn)品進(jìn)行柱前衍生化，然后利用熒光檢測(cè)儀器對(duì)待檢測(cè)產(chǎn)品中的熒光部位進(jìn)行追蹤與定量分析，進(jìn)而完成對(duì)黃曲霉毒素的檢測(cè)。在我國(guó)，主要被用來(lái)對(duì)進(jìn)出口茶葉中黃曲霉毒素的檢測(cè)以及蜂蜜和酒產(chǎn)品中的黃曲霉毒素定量。李佐卿等人的研究是對(duì)添加一定量黃曲霉毒素的產(chǎn)品進(jìn)行回收率的檢測(cè)，通過(guò)10次的平行試驗(yàn)得出各組的平均回收率。其回收率大多控制在70%～90%左右。實(shí)驗(yàn)人員在進(jìn)行柱前熒光檢測(cè)的同時(shí)，還進(jìn)行了柱后生化熒光檢測(cè)，然后將兩者的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)結(jié)果進(jìn)行對(duì)比，最終發(fā)現(xiàn)，柱前衍生化熒光檢比柱后衍生化熒光檢測(cè)靈敏度提升了3個(gè)層次，因此，在進(jìn)行高效液相色譜法檢測(cè)黃曲霉毒素時(shí)，若對(duì)準(zhǔn)確度的要求極高，則需采用柱前衍生化熒光檢測(cè)。

2 快速檢測(cè)方法

2.1 TLC法

在黃曲霉毒素的快速檢測(cè)當(dāng)中，以3種方法為主，分別為競(jìng)爭(zhēng)性酶聯(lián)免疫吸附法、薄層色譜法以及溴化熒光分光光度計(jì)法。TLC法便是薄層色譜法，其操作步驟是先將薄層鋪展，利用一定納米下的紫外燈光進(jìn)行照射，憑借不同的顯色來(lái)進(jìn)行黃曲霉毒素的檢測(cè)，這種方法操作簡(jiǎn)單，價(jià)格低廉且對(duì)于干擾的抵抗能力較強(qiáng)。這種方法在對(duì)中草藥的污染殘留方面的檢測(cè)有較強(qiáng)的作用，我國(guó)的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)以及美國(guó)藥典都將這種方法納入藥物質(zhì)量安全檢測(cè)的評(píng)價(jià)指南當(dāng)中。

2.2 溴化熒光分光光度法

在溴化熒光分光光度法中，首先將需要檢測(cè)的樣品進(jìn)行處理，經(jīng)過(guò)有機(jī)溶液的提取后，對(duì)提取液進(jìn)行分離，然后用溴試劑進(jìn)行衍生化，利用專門(mén)的熒光檢測(cè)儀器進(jìn)行熒光追蹤與檢測(cè)。通過(guò)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的數(shù)值顯示可以得出黃曲霉毒素在樣品中的含量。其快速、簡(jiǎn)便的優(yōu)點(diǎn)使得這種方法極其適用于大量樣品的黃曲霉毒素檢測(cè)。由于該方法所涉及的實(shí)驗(yàn)用品及儀器相對(duì)較少，且價(jià)格較為低廉，使得許多公司企業(yè)與國(guó)家機(jī)關(guān)選用這種方法對(duì)產(chǎn)品進(jìn)行檢測(cè)把關(guān)。

2.3 競(jìng)爭(zhēng)性酶聯(lián)免疫吸附法

競(jìng)爭(zhēng)性酶聯(lián)免疫吸附法是快速檢測(cè)法當(dāng)中效果最明顯、靈敏度最高的檢測(cè)方法，同時(shí)也是我們探討分析的主要研究方法。競(jìng)爭(zhēng)性酶聯(lián)免疫吸附法又稱ELISA法，這種方法在20世紀(jì)90年代就已經(jīng)成為美國(guó)分析化學(xué)家協(xié)會(huì)的官方指定的黃曲霉毒素檢測(cè)方法。更是被我國(guó)列為國(guó)標(biāo)的第二法。在李延生等研究人員的實(shí)驗(yàn)工作中，利用競(jìng)爭(zhēng)性酶聯(lián)免疫吸附法對(duì)中草藥中的黃曲霉毒素的含量進(jìn)行分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在一些根類(lèi)中草藥以及種子類(lèi)中草藥當(dāng)中含有黃曲霉毒素的概率相比較其他部位的中草藥概率要大。但是，由于這種方法所采用的檢測(cè)試劑盒中的黃曲霉毒素的抗體不能夠有效地將黃曲霉毒素的幾種不同類(lèi)別的毒素有效地分開(kāi)，因此，競(jìng)爭(zhēng)性酶聯(lián)免疫吸附法所測(cè)定的黃曲霉毒素的量同樣是毒素總量，這是我國(guó)研究人員對(duì)于競(jìng)爭(zhēng)性酶聯(lián)免疫吸附法在中草藥中的運(yùn)用。在一些糧油食品中的黃曲霉毒素的檢測(cè)上，競(jìng)爭(zhēng)性酶聯(lián)免疫吸附法同樣能夠發(fā)現(xiàn)重要的功效。由蔡正森團(tuán)隊(duì)主持的糧油食品中的黃曲霉毒素的實(shí)驗(yàn)當(dāng)中，他們采用競(jìng)爭(zhēng)性酶聯(lián)免疫吸附法進(jìn)行檢測(cè)，同樣對(duì)糧油產(chǎn)品的黃曲霉毒素有了明確的了解與確定。競(jìng)爭(zhēng)性酶聯(lián)免疫吸附法相比較薄層色譜法以及溴化熒光分光光度計(jì)法來(lái)說(shuō)，具有更高的靈敏度、更強(qiáng)的選擇性、更快速的檢測(cè)速度以及更高效的檢測(cè)手段。但其對(duì)藥品與儀器的要求相比較另外兩種操作手段來(lái)說(shuō)也相對(duì)較高，因此，其并未能夠在企業(yè)與檢測(cè)機(jī)關(guān)當(dāng)中得到廣泛的應(yīng)用。但是，它的諸多優(yōu)點(diǎn)又使得其成為不可忽視的一種重要的黃曲霉毒素的檢測(cè)方式。

3 結(jié)語(yǔ)

隨著社會(huì)的不斷進(jìn)步，人們生活水平的不斷提升，人們對(duì)于飲食的安全關(guān)注度也越來(lái)越高。黃曲霉毒素作為污染食品的毒素之一，對(duì)人體會(huì)產(chǎn)生極大的危害，若食品中的毒素含量較少隨著逐年的攝入會(huì)增加人體患癌的幾率，而食物中毒素含量較多在攝入后會(huì)引起人體的急劇中毒反應(yīng)，嚴(yán)重會(huì)直接導(dǎo)致死亡。因此，對(duì)食物中的黃曲霉毒素進(jìn)行檢測(cè)成為諸多國(guó)家的食品安全檢測(cè)的重點(diǎn)所在。該文通過(guò)對(duì)高效液相色譜法以及快速檢測(cè)法進(jìn)行分析探討，并就競(jìng)爭(zhēng)性酶聯(lián)免疫吸附法進(jìn)行著重討論，以求提升我國(guó)各企業(yè)與部門(mén)對(duì)于食物中黃曲霉毒素含量的重視，保證我國(guó)的食品安全。

參考文獻(xiàn)

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