• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    害螨脅迫對富士蘋果葉片細胞超微結構及游離脯氨酸含量的影響

    2016-05-14 18:42張坤鵬孫瑞紅楊洪強
    山東農業(yè)科學 2016年6期

    張坤鵬 孫瑞紅 楊洪強

    摘要:為明確山楂葉螨、二斑葉螨和蘋果全爪螨脅迫對富士蘋果葉片細胞超微結構及山楂葉螨脅迫對葉片游離脯氨酸含量的影響,利用透射電鏡觀察了上述3種害螨取食6 d 時葉片細胞超微結構的變化,并采用酸性茚三酮法測定了游離脯氨酸含量。結果顯示,正常蘋果葉片細胞呈長方形,大小相近,細胞排列整齊,細胞質中細胞器分布有序,細胞界限清晰;細胞內葉綠體數(shù)量較多,呈船形,緊貼細胞壁分布;細胞核呈長橢圓形,核仁和核膜清晰可見;細胞膜和細胞壁完整,相鄰細胞壁界限明顯。葉片被害螨刺吸為害后,葉肉細胞內部結構嚴重受損,細胞間隙增大,葉綠體和細胞核變形,葉綠體內有淀粉粒出現(xiàn),嚴重影響細胞功能。山楂葉螨為害后的細胞壁上出現(xiàn)針狀結晶沉淀物。山楂葉螨刺吸取食過程中,蘋果葉片內游離脯氨酸含量隨受害時間延長和螨口密度提高總體呈先升后降的趨勢。害螨為害可破壞蘋果葉片細胞超微結構,導致細胞功能喪失,抗逆性物質游離脯氨酸含量的升高表明蘋果葉片對山楂葉螨取食的對抗。

    關鍵詞:富士蘋果;山楂葉螨;二斑葉螨;蘋果全爪螨;細胞超微結構;游離脯氨酸

    中圖分類號:S661.103.4文獻標識號:A文章編號:1001-4942(2016)06-0036-06

    山楂葉螨Tetranychus viennensis、二斑葉螨T. urticae和蘋果全爪螨Panonychus ulmi是為害蘋果葉片的3種重要害螨[1],廣泛分布于我國各蘋果產區(qū),造成葉片光合作用下降甚至提前落葉,抑制樹體生長和花芽形成,給蘋果生產造成嚴重損失。

    植物生長發(fā)育過程中常會遭遇不同逆境脅迫,逆境脅迫可分為生物、化學脅迫和物理脅迫3類,蟲害脅迫屬于典型的生物脅迫[2]。植物被刺吸性害蟲取食后,葉肉細胞會產生生理、生化及形態(tài)結構等一系列生物學變化。研究表明,褐飛虱Laodelphax striatellus為害水稻稻葉后,會引起葉片細胞質壁分離、葉綠體異常發(fā)育、結構松散,膜結構最終溶解或斷裂[3,4]。梨網(wǎng)蝽Stephanitis nashi為害梨葉后,葉肉細胞中葉綠體膜被破壞,片層結構排列松散,最終瓦解,個別細胞線粒體內部嵴數(shù)目減少,基質變稀薄,有些細胞葉綠體內出現(xiàn)淀粉粒,嚴重時細胞凋亡,只剩殘片[5]。桔始葉螨Eotetranychus kankitus為害柑桔葉片后,導致葉片葉綠體膜缺損,淀粉粒異常膨大,基粒片層排列不規(guī)則,甚至消失,嗜鋨顆粒數(shù)目明顯增多[6]。朱砂葉螨T. cinnabarinus為害棉葉后,葉綠體膜逐漸溶解,基粒片層排列混亂,片層結構消失,淀粉粒增多,有些細胞被完全破壞[7]。桑始葉螨Eotetranychus suginamensis為害桑葉后,葉綠體外被膜出現(xiàn)多處斷裂,基粒片層和基質片層排列雜亂并產生較大空洞,細胞質中出現(xiàn)致密顆粒和膜狀物[8]。

    植物體內游離脯氨酸含量常作為評價植物抗逆性高低的一項生理指標。菜豆葉片游離脯氨酸含量隨二斑葉螨為害時間延長明顯增加[9]。番茄刺皮癭螨Aculops lycopersici為害后,番茄葉片游離脯氨酸含量急劇升高,并且隨為害時間延長和接螨量增加而持續(xù)上升[10]。梨癭螨Eriophyes pyri和梨葉銹癭螨Epitrimerus pyri為害后,梨樹葉片游離脯氨酸含量明顯上升,并隨受害程度逐漸加重。游離脯氨酸含量升高主要集中在為害部位,同時也會引起受害部位周圍組織游離脯氨酸含量上升[11]。梨葉銹癭螨取食蘋果梨葉片引起的游離脯氨酸含量的變化與竇彩虹的研究結果相似[12]。臭椿被太行癭螨Aculops taihangensis為害后,葉片內游離脯氨酸含量增加,反映出臭椿對太行癭螨的抵抗,但螨口數(shù)量的增長會終止游離脯氨酸含量上升[13]。梅下毛癭螨Acalitus phloeocoptes為害杏樹嫩芽后,受害芽的游離脯氨酸含量最高上升69.44%[14]。

    目前,關于蘋果葉片受到害螨為害后細胞超微結構及游離脯氨酸含量變化的研究尚未見報道。為此,本研究進行了這方面的試驗,旨在為研究富士蘋果對害螨為害的響應機制奠定基礎。

    1材料與方法

    1.1試驗材料

    1.1.1供試樹網(wǎng)室內的盆栽蘋果樹,品種為短枝富士,樹齡3年。

    1.1.2供試螨山楂葉螨、二斑葉螨和蘋果全爪螨均采自山東省泰安市郊區(qū)蘋果園。然后連續(xù)飼養(yǎng)于室內盆栽海棠苗上,養(yǎng)蟲室條件為溫度(26±1)℃,相對濕度(60±10)%,光周期12 L∶12 D。

    1.2試驗方法

    1.2.1細胞超微結構觀察選擇健康盆栽蘋果苗,按10頭/葉的螨口密度分別將上述3種害螨的雌成螨接到不同植株的成熟葉片上,在葉柄處涂抹凡士林防止螨逃逸,每種害螨接2株樹,重復3次,空白對照不接螨。

    接螨6 d時,分別剪取處理葉片及對照葉片。在葉片葉螨刺吸點處切取0.5 mm2小塊,迅速置于4%戊二醛溶液中進行固定。用注射器抽氣3次,固定后用pH值為7.2的磷酸鹽緩沖液漂洗,然后用1%鋨酸固定,再用乙醇-丙醇梯度脫水。之后用Epon 812環(huán)氧樹脂滲透包埋,使用LKB-5型超薄切片機切片,醋酸鈾-檸檬酸鉛雙重染色,置于JEM-1200EX型透射電鏡下觀察細胞超微結構并拍照。

    1.2.2游離脯氨酸含量測定分別將山楂葉螨雌成螨按10、20、30 頭/葉3個螨口密度接到不同植株的成熟葉片上,每處理4株,重復3次,葉柄處涂抹凡士林防止螨逃逸。以不接螨處理做空白對照。分別在為害6、8、10 d時摘取各處理葉片,于-24℃低溫保存。

    酸性茚三酮試劑:稱取茚三酮2.5 g,加入冰乙酸60 mL和6 mol/L磷酸40 mL,于70℃加熱溶解,冷卻后儲于棕色試劑瓶中,冰箱內4℃保存。

    稱取10 mg脯氨酸溶于少量80%乙醇溶液內,蒸餾水定容至100 mL,濃度為100 μg/mL。分別吸取0、0.5、1.25、2.5、5.0、7.5、10.0、15.0 mL放入50 mL容量瓶內,蒸餾水定容,配成0、1.0、2.5、5.0、10.0、15.0、20.0、30.0 μg/mL標準液。分別吸取各標準液2 mL、冰乙酸2 mL、茚三酮試劑2 mL放入10 mL帶塞刻度試管內,在沸水中放置15 min,取出后于520 nm光波處測定吸光值。以脯氨酸濃度為橫坐標,吸光值為縱坐標繪制標準曲線。

    稱取蘋果葉片0.3 g,剪碎,加入適量80%乙醇液和少量石英砂研磨成漿,轉移至10 mL帶塞刻度試管內,用80%乙醇液洗滌殘渣,定容至10 mL,80℃水浴提取20 min。提取液中加入1勺人造沸石和適量活性炭,強烈振蕩5 min以去除干擾的氨基酸,過濾。

    按照標準曲線測定方法對試樣進行測定,每處理重復測定3次,利用標準曲線和游離脯氨酸含量計算公式計算游離脯氨酸含量,用Duncans新復極差檢驗法進行差異顯著性分析。

    脯氨酸含量(μg/gFW)=X×VFW

    式中,X為根據(jù)標準線算得的樣品濃度值(μg/mL),V為樣品液總體積(mL),F(xiàn)W為樣品鮮重(g)。

    2結果與分析

    2.1蘋果葉片細胞超微結構變化

    2.1.1正常葉片的細胞學特征正常蘋果葉片表皮和葉肉細胞呈長方形,大小相近,細胞排列整齊,細胞質中細胞器分布有序,細胞間隙明顯。細胞內葉綠體數(shù)量較多,呈船形,緊貼細胞壁分布。細胞核呈長橢圓形,核仁和核膜清晰可見。細胞膜和細胞壁完整,相鄰細胞壁界限明顯(圖1)。

    2.1.2山楂葉螨為害葉片的細胞學特征山楂葉螨刺吸為害蘋果葉片6 d,葉肉細胞嚴重變形,細胞間隙變大,細胞器散亂于細胞質內,細胞內容物溢出,有些細胞僅在細胞壁周圍殘存一些碎屑,幾乎成為空胞(圖2A、E)。葉綠體內出現(xiàn)淀粉粒,腫脹趨于圓球狀,甚至葉綠體膜消失,葉綠體溶解散亂在細胞質中(圖2A、B)。細胞核被其他細胞器擠壓變形,細胞膜逐漸消失,細胞核解體(圖2C)。細胞壁分解斷裂,相鄰細胞壁界限逐漸模糊,最終消失形成空胞(圖2B、C、D、E),甚至緊鄰柵欄組織的上表皮細胞壁也分解斷裂(圖2D),有些細胞壁上附著針狀結晶沉淀物(圖2F)。

    2.1.3二斑葉螨為害葉片的細胞學特征二斑葉螨為害6 d,蘋果葉片細胞受到不同程度破壞,細胞質減少,細胞間隙增大,葉綠體縮短膨脹變形,葉綠體中可見大量淀粉粒存在,細胞核核膜界限不清(圖3A),受害嚴重的細胞幾乎完全被破壞,細胞器降解甚至消失,細胞壁溶解斷裂,彎曲變形,細胞器殘渣外溢到細胞間隙內(圖3A、B、C)。

    2.1.4蘋果全爪螨為害葉片的細胞學特征蘋果全爪螨為害6 d,蘋果葉肉細胞內部結構發(fā)生巨大變化,葉綠體由長橢圓形變?yōu)榻鼒A形,其內有淀粉粒沉積,受害嚴重的細胞結構幾乎完全被破壞,細胞器只剩殘渣或消失,只剩細胞壁殘余框架(圖4A)。細胞壁界限趨于模糊,細胞器殘余物從細胞壁缺口處溢出細胞(圖4B、C)。

    2.2葉片內游離脯氨酸含量變化

    2.2.1游離脯氨酸標準曲線經過Microsoft Excel分析確定,脯氨酸標準回歸方程為Y=0.0365X-0.0237,R2=0.9964。其中Y為520 nm的吸光值,X為脯氨酸濃度(μg/mL)。

    2.2.2山楂葉螨為害對蘋果葉片游離脯氨酸含量的影響從表1可知,與對照葉片相比,在山楂葉螨為害期內,蘋果葉片中的游離脯氨酸含量發(fā)生明顯變化。為害6 d時,受害葉片內游離脯氨酸含量隨螨口密度的增加而上升,顯著高于對照的游離脯氨酸含量。但為害8、10 d時,脯氨酸含量隨螨口密度的增加而降低。

    山楂葉螨螨口密度較低時(10 頭/葉),葉片中游離脯氨酸含量隨為害時間延長持續(xù)升高,為害10 d的含量最高,是對照葉片含量的1.79倍。隨著螨口密度的增加,游離脯氨酸含量隨為害時間延長下降,為害8、10 d時,30 頭/葉含量低于對照葉片。

    3討論與結論

    葉螨為害可對植物產生諸多影響,如葉綠素含量[15,16],糖類和礦物質元素含量[15,17,18],蛋白質、氨基酸含量[9,17],抗氧化酶活性[9,19],蛋白酶抑制劑活性[20,21],光合作用、蒸騰作用[15,22,23]等變化明顯,同時,葉片細胞超微結構也會發(fā)生顯著變化[3,8]。葉綠體是植物完成光合作用的場所,其結構完整是保證光合作用正常進行的前提,而其對逆境脅迫比較敏感[24,25]。本研究結果表明,富士蘋果葉片葉肉細胞對3種害螨脅迫反應敏感的細胞器均為葉綠體,受害后的葉綠體形狀發(fā)生改變,排列趨于混亂,內部結構被損壞。相關研究發(fā)現(xiàn),葉綠體是植物細胞中產生活性氧的重要場所之一[26]。在害螨脅迫下,植物會產生過多活性氧,造成細胞水平的氧傷害,葉綠體、線粒體等細胞器功能損害,DNA等其他生物大分子降解和失活,最終誘發(fā)細胞過敏性壞死[19,27]。

    植物細胞內的淀粉粒由光合作用產生,其運輸一般以蔗糖-Pi形式進行[28]。隨著害螨對葉肉細胞膜系統(tǒng)的破壞,光合作用產物輸送受阻,導致在葉綠體中積累大量淀粉粒。本研究在對山楂葉螨為害的富士蘋果葉片細胞進行超微結構觀察時,發(fā)現(xiàn)針狀結晶沉淀物,該類物質可能在抵抗山楂葉螨刺吸脅迫中具有重要作用,是富士蘋果對山楂葉螨為害防衛(wèi)機制的一種表現(xiàn)形式。

    游離脯氨酸作為植物體內重要的滲透調節(jié)物質之一,其含量高低與植物抗逆能力有關[29]。葉片中的游離脯氨酸含量與其相對含水量呈明顯負相關[30],其含量的增加是引起滲透勢下降的一個關鍵因素,有助于細胞或組織保持水分,維持蛋白質、膜和亞細胞結構的穩(wěn)定。湯章城[31]和Hare等[32]研究顯示,逆境下植物體內游離脯氨酸含量往往會升高。山楂葉螨為害初期,蘋果葉片細胞沒有受到嚴重破壞,會通過產生游離脯氨酸對抗葉螨,故葉片內的游離脯氨酸含量上升,這也說明蘋果葉片能夠通過游離脯氨酸的累積避免細胞受到滲透脅迫的傷害。隨著山楂葉螨數(shù)量增加和為害程度加重,當超過蘋果葉片所承受的范圍時,蘋果葉片滲透調節(jié)機制失效,游離脯氨酸含量下降,甚至低于對照。

    本研究只做了3種蘋果害螨在10 頭/葉下為害6 d對富士蘋果葉片細胞超微結構的影響,不同為害時間及不同蘋果品種在不同葉螨為害下的細胞超微結構變化情況仍待進一步研究。前人研究發(fā)現(xiàn)脯氨酸能夠參與植物葉綠素合成[31],其含量的變化是否有利于蘋果葉片通過光合作用對螨害進行營養(yǎng)補償值得進一步研究。

    參考文獻:

    [1]洪曉月. 農業(yè)螨類學[M]. 北京:中國農業(yè)出版社,2012: 223-229.

    [2]張正斌. 植物對環(huán)境脅迫整體抗逆性研究若干問題[J]. 西北農業(yè)學報, 2000, 9(3): 112-116.

    [3]段燦星, 彭高松, 朱振東, 等. 抗感水稻品種受灰飛虱為害后葉片活性氧及超微結構的變化[J]. 華北農學報, 2011, 26(6): 207-211.

    [4]段燦星, 余嬌嬌, 李萬昌, 等. 灰飛虱脅迫對水稻葉片中防御酶活性及細胞超微結構的影響[J]. 植物生理學報, 2012, 48(10): 971-978.

    [5]蘭景華. 梨網(wǎng)蝽對梨葉細胞結構影響的機制[J]. 西南農業(yè)大學學報, 1994, 16(1): 17-19.

    [6]蘭景華. 桔始葉螨對桔葉葉綠體危害的超微變化簡報[J]. 西南農業(yè)大學學報, 1989, 11(4): 346-348.

    [7]蘭景華. 朱砂葉螨對棉葉細胞超微結構的影響[J]. 西南農業(yè)大學學報, 1992, 14(6): 528-530.

    [8]代慶陽,蘇學輝. 桑始葉螨對桑葉細胞超微結構的影響[J]. 四川師范學院學報(自然科學版), 2002, 23(3):265-267.

    [9]黎志輝, 魯亞. 二斑葉螨對菜豆葉片幾種生理指標的影響[J]. 安徽農業(yè)科學, 2011, 39(13): 7683-7684.

    [10]吳娟, 李琳一, 許翔, 等. 番茄刺皮癭螨對番茄葉片生理指標的影響[J]. 園藝學報, 2006, 33(6): 1215-1218.

    [11]竇彩虹. 梨樹癭螨的發(fā)生及螨癭病生理的研究[D].蘭州: 甘肅農業(yè)大學, 2011.

    [12]陳應武, 竇彩虹, 張新虎, 等. 蘋果梨葉片幾種生理生化指標對梨上癭螨為害的響應[J]. 中國科學院研究生院學報, 2006, 23(4): 509-513.

    [13]楊明麗, 付衛(wèi)東, 張國良, 等. 太行刺皮癭螨(Aculops taihangensis Hong & Xue)對臭椿生長及生理生化指標的影響[J]. 山東農業(yè)大學學報(自然科學版), 2009, 40(4): 585-592.

    [14]張瑾, 徐秉良, 吳步梅. 梅下毛癭螨為害對杏樹幼芽結構和生理的影響[J]. 園藝學報, 2014, 41(4): 653-660.

    [15]Sivritepe N, Kumral N A, Erturk U, et al. Responses of grapevines to two-spotted spider mite mediated biotic stress[J]. Journal of Biological Sciences, 2009, 9(4): 311-318.

    [16]Park Y L, Lee J H. Leaf cell and tissue damage of cucumber caused by twospotted spider mite (Acari: Tetranychidae) [J]. Journal of Economic Entomology, 2002, 95(5): 952-957.

    [17]Tomczyk A. Remove from marked records physiological and biochemical responses of plants to spider mite feeding[C]//Halliday R B, Walter D E, Proctor H C, et al. Acarology: proceedings of the 10th International Congress. Melbourne: CSIRO Publishing, 2001: 306-313.

    [18]孫月華, 郅軍銳, 田甜. 二斑葉螨為害對菜豆生理指標的影響[J]. 生態(tài)學雜志, 2014, 33(4): 1010-1014.

    [19]賈貞, 宋占午, 金祖蔭, 等. 山楂葉螨危害對海棠葉片POD的影響[J]. 西北植物學報, 2004, 24(11): 2136-2139.

    [20]Kant M R, Ament K, Sabelis M W, et al. Differential timing of spider mite-induced direct and indirect defenses in tomato plants[J]. Plant Physiology, 2004, 135(1): 483-495.

    [21]Santamaria M E, Cambra I, Martinez M, et al. Gene pyramiding of peptidase inhibitors enhances plant resistance to the spider mite Tetranychus urticae[J]. PLoS One, 2012, 7(8): e43011.

    [22]Sances F V, Wyman J A, Ting I P. Morphological responses of strawberry leaves to infestations of two spotted spider mite[J]. Journal of Economic Entomology, 1979,72(5):710-713.

    [23]Sances F V, Wyman J A, Ting I P. Physiological responses to spider mite infestation on strawberries[J]. Environmental Entomology, 1979b, 8(4): 711-714.

    [24]任麗花, 黃敏敏, 江枝和, 等. 干旱脅迫對圓葉決明葉片超微結構的影響[J]. 中國草地學報, 2008, 30(1): 30-34.

    [25]孟凡娟, 龐洪影, 王建中, 等. NaCl和Na2SO4脅迫下兩種刺槐葉肉細胞葉綠體超微結構[J]. 生態(tài)學報, 2011,31(3): 734-741.

    [26]Asada K. The role of ascorbate peroxidase and monodehydroascorbate reductase in H2O2 scavenging in plant[M]//Scandalios J G. Oxidative stress and the molecular biology of antioxidant defenses. NY: Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1997:715-735.

    [27]董海麗, 井金學. 活性氧和一氧化氮在植物抗病反應中的作用[J]. 西北農林科技大學學報(自然科學版),2003, 31(1): 161-166.

    [28]夏叔芳, 于新建, 張振清. 葉片光合產物輸出的抑制與淀粉和蔗糖的積累[J]. 植物生理學報, 1981, 7(2): 135-142.

    [29]陳應武, 竇彩虹, 張新虎, 等. 梨癭螨的為害對梨葉片幾種生理生化指標的影響[J]. 蘭州大學學報(自然科學版),2004, 40(4): 68-71.

    [30]陳玉惠, 葉建仁, 魏初獎, 等. 松材線蟲侵染對馬尾松、黑松水分及其相關代謝的影響[J]. 植物病理學報, 2005, 35(3): 201-207.

    [31]湯章城. 逆境條件下植物脯氨酸的累積及其可能的意義[J]. 植物生理學通訊, 1984(1): 15-21.

    [32]Hare P D, Cress W A, Van Staden J. Proline synthesis and degradation: a model system for elucidating stress-related signal transduction[J]. Journal of Experimental Botany, 1999, 50(333): 413-434.

    亚洲欧美日韩东京热| 国产中年淑女户外野战色| 舔av片在线| 国产高清视频在线观看网站| 久久久久久久精品吃奶| 极品教师在线视频| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片 | 日本 av在线| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 午夜激情福利司机影院| 免费在线观看日本一区| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 国产成年人精品一区二区| 精品久久久久久久末码| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 小说图片视频综合网站| 欧美黑人欧美精品刺激| 成年人黄色毛片网站| 内地一区二区视频在线| 女同久久另类99精品国产91| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 天美传媒精品一区二区| 一级av片app| 91狼人影院| 窝窝影院91人妻| 又紧又爽又黄一区二区| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 最新在线观看一区二区三区| 久久精品国产亚洲av涩爱 | 亚洲一区高清亚洲精品| 天堂av国产一区二区熟女人妻| 欧美日韩黄片免| 99热只有精品国产| 亚洲人成电影免费在线| 9191精品国产免费久久| 色在线成人网| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 欧美丝袜亚洲另类 | 男人舔奶头视频| 亚洲精品粉嫩美女一区| 熟女人妻精品中文字幕| 亚洲无线观看免费| 午夜福利欧美成人| 嫩草影院入口| 亚洲最大成人手机在线| 久久精品国产亚洲av天美| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 精品久久久久久,| 中文字幕熟女人妻在线| 久久久国产成人精品二区| 搡老熟女国产l中国老女人| 精品人妻1区二区| 国产精品爽爽va在线观看网站| 日韩有码中文字幕| 国产av麻豆久久久久久久| 1000部很黄的大片| 99国产综合亚洲精品| 最新在线观看一区二区三区| 韩国av一区二区三区四区| 亚洲专区中文字幕在线| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 午夜精品久久久久久毛片777| 国产在线精品亚洲第一网站| 日韩中文字幕欧美一区二区| 久久精品久久久久久噜噜老黄 | 亚洲人成网站在线播| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 宅男免费午夜| 亚洲最大成人手机在线| 免费av观看视频| av中文乱码字幕在线| 18禁在线播放成人免费| 成年女人毛片免费观看观看9| 欧美乱色亚洲激情| 国产不卡一卡二| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 精品99又大又爽又粗少妇毛片 | 草草在线视频免费看| 久久6这里有精品| 精品日产1卡2卡| 欧美精品啪啪一区二区三区| 香蕉av资源在线| 午夜免费激情av| 赤兔流量卡办理| 一二三四社区在线视频社区8| a级毛片a级免费在线| 夜夜爽天天搞| xxxwww97欧美| 亚洲三级黄色毛片| 18禁在线播放成人免费| 亚洲精品在线观看二区| 久久精品综合一区二区三区| 成人无遮挡网站| 精品久久久久久成人av| 99久久九九国产精品国产免费| 日韩精品青青久久久久久| 午夜a级毛片| 九九热线精品视视频播放| 久9热在线精品视频| 久久久久久久亚洲中文字幕 | 免费大片18禁| 又爽又黄无遮挡网站| 午夜精品一区二区三区免费看| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 色哟哟哟哟哟哟| 亚洲片人在线观看| 久久久久久久午夜电影| 一本久久中文字幕| 偷拍熟女少妇极品色| 亚洲国产精品sss在线观看| 中文字幕熟女人妻在线| 久久午夜福利片| 一本精品99久久精品77| 欧美极品一区二区三区四区| 国产综合懂色| 中文字幕高清在线视频| 婷婷亚洲欧美| 老熟妇仑乱视频hdxx| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 深爱激情五月婷婷| 中亚洲国语对白在线视频| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 亚洲三级黄色毛片| 亚洲最大成人中文| 国产乱人视频| 黄片小视频在线播放| 性插视频无遮挡在线免费观看| 国产麻豆成人av免费视频| 婷婷六月久久综合丁香| 深夜精品福利| 一区二区三区免费毛片| 美女高潮的动态| 真实男女啪啪啪动态图| 国产精品99久久久久久久久| 麻豆久久精品国产亚洲av| 国产av在哪里看| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 国产精品美女特级片免费视频播放器| 少妇高潮的动态图| 国产高清视频在线观看网站| 国内精品久久久久久久电影| 女同久久另类99精品国产91| 欧美一区二区国产精品久久精品| 色综合欧美亚洲国产小说| 久久国产精品影院| 亚洲性夜色夜夜综合| 精品午夜福利视频在线观看一区| 一个人看的www免费观看视频| 欧美黑人欧美精品刺激| 欧美中文日本在线观看视频| 亚洲精品在线美女| 欧美日韩乱码在线| 99热这里只有是精品50| 亚洲成人精品中文字幕电影| 日本一二三区视频观看| 午夜免费男女啪啪视频观看 | 久久这里只有精品中国| 国产精品嫩草影院av在线观看 | 国产毛片a区久久久久| 久久精品国产清高在天天线| 好男人在线观看高清免费视频| 99热这里只有是精品50| 欧美在线黄色| 久久久久九九精品影院| 国产午夜精品论理片| 婷婷六月久久综合丁香| 久99久视频精品免费| 久久久久久久久久成人| 婷婷六月久久综合丁香| 久99久视频精品免费| 啦啦啦韩国在线观看视频| 国产精品久久久久久久电影| 嫩草影院新地址| 国产色爽女视频免费观看| 日韩精品青青久久久久久| 欧美在线一区亚洲| 99久久精品一区二区三区| 18禁黄网站禁片免费观看直播| 国产成人影院久久av| 少妇的逼水好多| 少妇丰满av| 国产精品嫩草影院av在线观看 | 欧美精品啪啪一区二区三区| 国产精品日韩av在线免费观看| 国产精品久久久久久久久免 | 天美传媒精品一区二区| 国产av麻豆久久久久久久| 搡老岳熟女国产| 久久性视频一级片| 日韩国内少妇激情av| 久久这里只有精品中国| 国内精品久久久久久久电影| 欧美日韩黄片免| 国产黄色小视频在线观看| 九色国产91popny在线| 男人舔奶头视频| 嫩草影院入口| 搞女人的毛片| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 男人狂女人下面高潮的视频| 1000部很黄的大片| 欧美在线一区亚洲| 久久久久免费精品人妻一区二区| 国产高清视频在线观看网站| 亚洲国产精品久久男人天堂| 国产精品影院久久| 美女cb高潮喷水在线观看| 91在线观看av| www.999成人在线观看| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 国产三级中文精品| 毛片女人毛片| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看| 国产三级黄色录像| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 久久热精品热| 嫁个100分男人电影在线观看| 日本熟妇午夜| a级毛片免费高清观看在线播放| 亚洲美女搞黄在线观看 | 亚洲电影在线观看av| 黄色视频,在线免费观看| 精品久久久久久久久久久久久| 午夜福利在线在线| 国产人妻一区二区三区在| 亚洲色图av天堂| 麻豆国产97在线/欧美| 99热这里只有精品一区| 村上凉子中文字幕在线| 亚洲人成电影免费在线| 精品国产亚洲在线| 男女视频在线观看网站免费| 久久精品国产亚洲av涩爱 | 人妻制服诱惑在线中文字幕| 午夜福利免费观看在线| 看免费av毛片| 美女黄网站色视频| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 波多野结衣高清无吗| 一边摸一边抽搐一进一小说| 日本熟妇午夜| av在线天堂中文字幕| 国产在线精品亚洲第一网站| www.色视频.com| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 日本黄色视频三级网站网址| 日本a在线网址| 日韩欧美在线二视频| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 欧美成人一区二区免费高清观看| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 久久久久免费精品人妻一区二区| 欧美日本亚洲视频在线播放| 欧美成人a在线观看| 又爽又黄a免费视频| 老熟妇仑乱视频hdxx| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 亚洲五月婷婷丁香| 日韩大尺度精品在线看网址| 91字幕亚洲| 露出奶头的视频| 国产麻豆成人av免费视频| 色综合婷婷激情| 一进一出抽搐gif免费好疼| 国产主播在线观看一区二区| 色精品久久人妻99蜜桃| 国产久久久一区二区三区| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 十八禁人妻一区二区| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 国产一区二区三区视频了| 国产一区二区激情短视频| 夜夜夜夜夜久久久久| 国产毛片a区久久久久| 久久久成人免费电影| 国产欧美日韩一区二区精品| 麻豆一二三区av精品| 亚洲精品日韩av片在线观看| 热99re8久久精品国产| 熟女电影av网| 亚洲精品影视一区二区三区av| 国产伦在线观看视频一区| www.999成人在线观看| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 成人三级黄色视频| 麻豆av噜噜一区二区三区| 欧美一区二区精品小视频在线| 97热精品久久久久久| 搞女人的毛片| 在线观看美女被高潮喷水网站 | 精品人妻偷拍中文字幕| 99精品久久久久人妻精品| 九九在线视频观看精品| 99国产精品一区二区蜜桃av| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 露出奶头的视频| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 亚洲美女视频黄频| 久久精品国产99精品国产亚洲性色| 亚洲 国产 在线| 真人一进一出gif抽搐免费| 在线免费观看的www视频| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 亚洲真实伦在线观看| 可以在线观看的亚洲视频| 欧美三级亚洲精品| 久久久久九九精品影院| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 亚洲av熟女| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看| 久久久久久大精品| 在线国产一区二区在线| 亚洲无线在线观看| 精品国内亚洲2022精品成人| 国产欧美日韩精品亚洲av| av黄色大香蕉| 我的女老师完整版在线观看| 亚洲avbb在线观看| 亚洲,欧美精品.| 日韩欧美在线二视频| 亚洲精品成人久久久久久| 夜夜夜夜夜久久久久| 国产三级中文精品| 一级黄片播放器| 午夜福利高清视频| 欧美xxxx性猛交bbbb| 999久久久精品免费观看国产| 性色avwww在线观看| 婷婷精品国产亚洲av| 99国产精品一区二区蜜桃av| 搡老熟女国产l中国老女人| 国产精品日韩av在线免费观看| 99精品在免费线老司机午夜| 精品久久久久久久久av| 国产av麻豆久久久久久久| 免费高清视频大片| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 欧美午夜高清在线| 国产综合懂色| 男女床上黄色一级片免费看| 99热精品在线国产| 床上黄色一级片| 看免费av毛片| 精品久久国产蜜桃| 波多野结衣巨乳人妻| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 高潮久久久久久久久久久不卡| 日韩欧美三级三区| 免费观看精品视频网站| 亚洲国产欧美人成| 亚洲成av人片在线播放无| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 国产高清三级在线| 国产欧美日韩精品亚洲av| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 欧美精品国产亚洲| 免费一级毛片在线播放高清视频| 少妇的逼好多水| 高潮久久久久久久久久久不卡| 国产精品一区二区三区四区久久| 成人一区二区视频在线观看| 国产亚洲欧美在线一区二区| 国产亚洲精品av在线| 中文字幕熟女人妻在线| 欧美+日韩+精品| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 99国产综合亚洲精品| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片 | 欧美丝袜亚洲另类 | 日韩欧美免费精品| 99国产精品一区二区三区| 搡老妇女老女人老熟妇| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 久久久精品欧美日韩精品| 18+在线观看网站| 90打野战视频偷拍视频| 91狼人影院| 欧美日韩乱码在线| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 最后的刺客免费高清国语| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 日韩亚洲欧美综合| 欧美+亚洲+日韩+国产| 免费在线观看成人毛片| 少妇人妻一区二区三区视频| 精品久久久久久成人av| 色吧在线观看| 高潮久久久久久久久久久不卡| АⅤ资源中文在线天堂| 中文字幕高清在线视频| 日本免费a在线| 久久久久久久久久成人| 免费搜索国产男女视频| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 麻豆国产av国片精品| 一区二区三区高清视频在线| 三级毛片av免费| 天堂动漫精品| 成人欧美大片| 18禁在线播放成人免费| 日韩精品中文字幕看吧| 中国美女看黄片| 一区二区三区激情视频| 国产美女午夜福利| 精品久久久久久,| 成熟少妇高潮喷水视频| 亚洲av.av天堂| 成人美女网站在线观看视频| 亚洲激情在线av| 久久久久精品国产欧美久久久| 久久中文看片网| 国内精品久久久久精免费| 色哟哟·www| 99久久99久久久精品蜜桃| 在线观看美女被高潮喷水网站 | 听说在线观看完整版免费高清| 国产成+人综合+亚洲专区| 搡老妇女老女人老熟妇| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 成人鲁丝片一二三区免费| av在线观看视频网站免费| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 免费av毛片视频| 男女那种视频在线观看| a级毛片免费高清观看在线播放| 久久久久免费精品人妻一区二区| 亚洲黑人精品在线| 国产极品精品免费视频能看的| 国产人妻一区二区三区在| 午夜福利在线在线| 欧美极品一区二区三区四区| 国产精品免费一区二区三区在线| 成人一区二区视频在线观看| 免费看美女性在线毛片视频| 一个人看的www免费观看视频| 亚洲五月婷婷丁香| 嫩草影视91久久| 国产单亲对白刺激| 亚洲综合色惰| 可以在线观看毛片的网站| 午夜福利免费观看在线| 又黄又爽又免费观看的视频| 男人的好看免费观看在线视频| 91久久精品电影网| 夜夜夜夜夜久久久久| 一a级毛片在线观看| 精品人妻一区二区三区麻豆 | 久久久久久九九精品二区国产| 日本一二三区视频观看| 又粗又爽又猛毛片免费看| 成人鲁丝片一二三区免费| 国产主播在线观看一区二区| 中文字幕久久专区| 中文字幕熟女人妻在线| 国产乱人伦免费视频| 亚洲最大成人手机在线| 午夜免费成人在线视频| 日本三级黄在线观看| 99热只有精品国产| netflix在线观看网站| 精品免费久久久久久久清纯| 麻豆成人av在线观看| 日韩亚洲欧美综合| 村上凉子中文字幕在线| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 亚洲国产欧美人成| 又黄又爽又免费观看的视频| 午夜精品在线福利| 无遮挡黄片免费观看| 欧美高清性xxxxhd video| 亚洲18禁久久av| 99精品在免费线老司机午夜| АⅤ资源中文在线天堂| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 免费看a级黄色片| 亚洲久久久久久中文字幕| 五月玫瑰六月丁香| 国产午夜精品论理片| 一区二区三区免费毛片| 亚洲 国产 在线| 老司机福利观看| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 搡老熟女国产l中国老女人| 毛片一级片免费看久久久久 | 日本 av在线| 国产在线精品亚洲第一网站| 美女xxoo啪啪120秒动态图 | 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 美女大奶头视频| 乱码一卡2卡4卡精品| 精品久久国产蜜桃| 国产毛片a区久久久久| 一本一本综合久久| 日韩欧美精品v在线| 国产在视频线在精品| a级毛片免费高清观看在线播放| 黄色一级大片看看| 久久久国产成人免费| 日韩成人在线观看一区二区三区| 久久国产精品人妻蜜桃| 美女xxoo啪啪120秒动态图 | aaaaa片日本免费| 草草在线视频免费看| 窝窝影院91人妻| 亚洲七黄色美女视频| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看| 很黄的视频免费| 国产伦精品一区二区三区视频9| 窝窝影院91人妻| av视频在线观看入口| 动漫黄色视频在线观看| 久久久国产成人精品二区| 亚洲,欧美精品.| 亚洲无线观看免费| 亚洲五月婷婷丁香| 久久国产乱子伦精品免费另类| 老师上课跳d突然被开到最大视频 久久午夜综合久久蜜桃 | 欧美高清性xxxxhd video| 99在线人妻在线中文字幕| 国产精品乱码一区二三区的特点| 好男人在线观看高清免费视频| 国产爱豆传媒在线观看| 国产v大片淫在线免费观看| 国产高清视频在线观看网站| 伊人久久精品亚洲午夜| 最近在线观看免费完整版| 亚洲国产精品999在线| 亚洲在线自拍视频| 观看美女的网站| 动漫黄色视频在线观看| 老司机午夜福利在线观看视频| 天堂动漫精品| 欧美激情久久久久久爽电影| 欧美日韩福利视频一区二区| 在线观看一区二区三区| 麻豆一二三区av精品| 嫩草影院入口| av天堂在线播放| 国产大屁股一区二区在线视频| 亚洲av电影在线进入| 九九在线视频观看精品| 欧美3d第一页| 长腿黑丝高跟| 成年版毛片免费区| 午夜激情福利司机影院| 国产私拍福利视频在线观看| 欧美+日韩+精品| 国产精品嫩草影院av在线观看 | 亚洲精品色激情综合| 国产免费男女视频| 最近在线观看免费完整版| 日韩中字成人| 看片在线看免费视频| 啪啪无遮挡十八禁网站| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 在线播放国产精品三级| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 精品人妻1区二区| av在线老鸭窝| 两个人视频免费观看高清| 久久久久久九九精品二区国产| 亚洲国产精品久久男人天堂| 舔av片在线| 亚洲精品在线美女| 成熟少妇高潮喷水视频| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 免费av不卡在线播放| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 国产精品一及| 日韩国内少妇激情av| 简卡轻食公司| 国产精品av视频在线免费观看| 亚洲成av人片在线播放无| 国产精华一区二区三区| 久久国产乱子免费精品| 国产伦精品一区二区三区四那| 国模一区二区三区四区视频| 精品久久久久久,| 啦啦啦韩国在线观看视频| 最近最新免费中文字幕在线| 日本与韩国留学比较| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 国产乱人视频| 久久人妻av系列| 精品免费久久久久久久清纯| 精品人妻偷拍中文字幕| 国产大屁股一区二区在线视频| 亚洲av第一区精品v没综合| 精品人妻偷拍中文字幕| 国产综合懂色| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 此物有八面人人有两片| 国产在线精品亚洲第一网站| 91久久精品国产一区二区成人| 午夜免费成人在线视频| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 男女视频在线观看网站免费| 久久人人精品亚洲av| 怎么达到女性高潮| 免费搜索国产男女视频| 免费看a级黄色片| 精品国内亚洲2022精品成人| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 亚洲精品一区av在线观看| 精品国内亚洲2022精品成人| 欧美成人一区二区免费高清观看| 美女大奶头视频| 中文字幕av在线有码专区| 午夜精品在线福利| 99久久精品热视频|