基層獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室樣品采集、工作中必須注意的問(wèn)題與建議

摘 要：樣品采集、包裝與運(yùn)送工作是基層獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室承擔(dān)的一項(xiàng)經(jīng)常性的重要工作。此項(xiàng)工作技術(shù)含量不高，但其過(guò)程中的好多要素和細(xì)節(jié)會(huì)直接影響檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性和檢測(cè)結(jié)論的科學(xué)性。本文主要從采集方法、部位、種類、數(shù)量、樣品質(zhì)量、包裝、運(yùn)送以及人員防護(hù)等方面分別進(jìn)行闡述和分析，對(duì)科學(xué)全面掌握系統(tǒng)化的樣品采集與運(yùn)送工作、提高檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性和檢測(cè)結(jié)論的科學(xué)性具有重要的指導(dǎo)意義。

關(guān)鍵詞：樣品采集；病料；包裝；運(yùn)送；人員防護(hù)

中圖分類號(hào)：S855.3 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：C 文章編號(hào)：1001-0769（2016）05-0093-03

樣品采集、運(yùn)送工作是基層動(dòng)物疫病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)在動(dòng)物疫病防控工作中承擔(dān)的一項(xiàng)經(jīng)常性的重要工作。該項(xiàng)工作中采樣方法、部位、種類、數(shù)量、樣品質(zhì)量、包裝和運(yùn)送等每個(gè)環(huán)節(jié)都會(huì)直接影響檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性和檢測(cè)結(jié)論的科學(xué)性。但是，由于基層動(dòng)物疫病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)對(duì)樣品采集工作認(rèn)識(shí)不到位，機(jī)構(gòu)改革致命人員頻繁流動(dòng)，加之實(shí)驗(yàn)室工作相對(duì)艱苦、人員素質(zhì)參差不齊或非專業(yè)人員等原因，使得樣品采集工作在具體實(shí)施和實(shí)際操作中存在很多問(wèn)題，不但影響了檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性和檢測(cè)結(jié)論的科學(xué)性，而且對(duì)相關(guān)人員的健康安全構(gòu)成嚴(yán)重的威脅。筆者就采樣工作的相關(guān)要求和多年從事樣品采集工作的經(jīng)驗(yàn)分析如下。

1 樣品與病料的概念

1.1 樣品（sample）

取自動(dòng)物或環(huán)境，擬通過(guò)檢測(cè)反應(yīng)動(dòng)物個(gè)體、群體或環(huán)境有關(guān)狀況的材料或物品。

1.2病料（specimen）

來(lái)自患病或可疑患病動(dòng)物的被（待）檢樣品。

2 樣品采集人員要求

必須是具備動(dòng)物傳染病感染、傳播、流行與預(yù)防的相關(guān)知識(shí)，熟練掌握采樣方法和動(dòng)物保定技術(shù)，熟悉樣品采集與采樣器具使用的獸醫(yī)專業(yè)技術(shù)人員。并熟悉《動(dòng)物疫病實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)采樣方法》（NY/T 541-2002）和《高致病性動(dòng)物病原微生物菌（毒）種或者樣本運(yùn)輸包裝規(guī)范》。

3 樣品（病料）采集的標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)

根據(jù)不同檢測(cè)目的，樣品分用于免疫抗體檢測(cè)和疫病診斷檢測(cè)（即病料）兩類；前者通常指血清，而后者通常指病料。樣品采集必須嚴(yán)格執(zhí)行《動(dòng)物疫病實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)采樣方法》（NY/T 541-2002）。

4 動(dòng)物疫病病原檢測(cè)樣品采集的種類

常見(jiàn)動(dòng)物疫病病原檢測(cè)樣品采集種類見(jiàn)表1。其他動(dòng)物疫病樣品采集種類應(yīng)參閱相關(guān)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)或資料。

5 樣品采集數(shù)量的確定

5.1免疫抗體檢測(cè)用血清

應(yīng)堅(jiān)持隨機(jī)采樣與固定采樣相結(jié)合的原則。樣品采集采用隨機(jī)抽樣的方法進(jìn)行，使所采樣品具有群體代表性。對(duì)被采集樣品的畜禽個(gè)體和樣品本身進(jìn)行編號(hào)。跟蹤檢測(cè)可實(shí)現(xiàn)對(duì)群體相應(yīng)指標(biāo)的動(dòng)態(tài)監(jiān)控，對(duì)研究動(dòng)物疫病免疫抗體水平隨時(shí)間變化的規(guī)律并以此指導(dǎo)免疫工作具有重要意義。100頭/只規(guī)模以下，至少應(yīng)采集10份；100頭/只以上規(guī)模，每群采集數(shù)量不少于20份；每份血清禽類最好不少于500 μL，畜類不少于800 μL；

5.2 疫病診斷檢測(cè)用樣品

疫病診斷檢測(cè)用樣品即病料，包括血清、全血和血涂片、組織病料、滲出液、排出物、分泌液等，具體詳見(jiàn)《動(dòng)物疫病實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)采樣方法》（NY/T 541-2002）。每群畜類不少于2～3頭/只，禽類不少于5羽的相應(yīng)樣品。組織樣品禽類每份不應(yīng)少于2 g，雛禽脾臟、胰臟等病料建議完整取樣；畜類每份不少于5 g，厚度最好不要小于1 cm，液體病料不應(yīng)少于5 mL，用于保存棉拭子的PBS液以淹過(guò)棉拭子為準(zhǔn)，最少不應(yīng)少于1 mL；流行病學(xué)監(jiān)測(cè)樣品群采集數(shù)量詳見(jiàn)農(nóng)業(yè)部印發(fā)的年度《國(guó)家動(dòng)物疫病監(jiān)測(cè)與流行病學(xué)調(diào)查計(jì)劃的通知》。

6 樣品采集、保存與運(yùn)送過(guò)程應(yīng)注意的問(wèn)題

6.1 血清樣品注意事項(xiàng)

6.1.1 采血器械

使用有效期內(nèi)的一次性注射器、真空采血管（器）、1.5 mL、5 mL和10 m L的塑料離心管；

6.1.2 扎針

采樣人員應(yīng)熟練掌握采血技術(shù)，選準(zhǔn)采血進(jìn)針點(diǎn)，掌握好進(jìn)針?lè)较颉⒔嵌群蜕疃?；針尖進(jìn)入血管后順著血管方向向前推進(jìn)，否則易刺穿血管引起血腫。特別是采集雛雞等小型畜禽個(gè)體翅血液時(shí)要格外小心，由于其血管細(xì)、管壁薄容易刺穿，刺穿后立即停止采血并按壓止血1 min～3 min，更換采血部位或個(gè)體重新采。但應(yīng)注意同一個(gè)體多次采樣不成功會(huì)引起養(yǎng)殖戶反感，后續(xù)采樣工作將可能受到影響或無(wú)法以完成；

6.1.3 采集血液的轉(zhuǎn)移

用注射器采集的血液盡快轉(zhuǎn)移到離心管中，轉(zhuǎn)移時(shí)血液時(shí)沿管壁緩慢注入，不要用力擠壓、震蕩，否則易造成細(xì)胞破裂發(fā)生溶血進(jìn)而影響檢測(cè)結(jié)果；傾斜靜置離心管讓血清自然析出。需離心分析血清速度不應(yīng)超過(guò)3 000 rpm，樣品禁止置于陽(yáng)光下曝曬或戶外受凍造成溶血；用真空采血管采集血液樣品時(shí)選用不含抗凝劑或含促凝劑或分離膠的真空采血管。

6.2 全血樣品采集注意事項(xiàng)

用一次性注射器（采血器）采集抗凝血時(shí)，可事先在注射器內(nèi)吸入少量抗凝劑。血液采出后來(lái)回顛倒注射器，以讓血液與抗凝劑混勻，然后轉(zhuǎn)移到加抗凝劑的離心管再次顛倒混勻。用真空采血管采血應(yīng)選用含枸櫞酸鈉或EDTA抗凝劑的真空采血管。

6.3 用于血涂片檢查的血液采集注意事項(xiàng)

采血部位采用酒精消毒，等酒精完全揮發(fā)后，或直接用干棉簽擦凈后方可采集，血液量以綠豆大小為宜，玻片應(yīng)經(jīng)2 %～3 %鹽酸處理。

6.4 病料樣品采集注意事項(xiàng)

（1）選擇正在發(fā)病具有明顯臨床癥狀的畜禽個(gè)體，采集病變組織和健康組織交界處組織；流行病學(xué)監(jiān)測(cè)用樣品采用隨機(jī)抽樣的方法進(jìn)行樣品采集，使所采樣品具有群體代表性；

（2）一般情況下用于病原檢測(cè)的樣品每份不要多于50 g，多于50 g不便于包裝、運(yùn)輸及檢測(cè)取樣，所用采樣器械和盛裝容器應(yīng)經(jīng)過(guò)消毒；

（3）采樣前對(duì)采樣環(huán)境噴灑消毒液降塵，吹風(fēng)時(shí)進(jìn)行順風(fēng)向采樣，盡量保持采樣全過(guò)程無(wú)菌；

（4）每種病料樣品先獨(dú)立包裝后，同一個(gè)體的樣品一同包裝，同群樣品一起包裝。

6.5 樣品的保存與運(yùn)送

6.5.1 保存

（1）樣品編號(hào)選用油性記號(hào)筆。水性記號(hào)筆編寫(xiě)的號(hào)碼常因樣品保存和運(yùn)輸過(guò)程中溫度變化形成的冷凝水汽使號(hào)碼消失；

（2）編號(hào)應(yīng)盡量做到唯一，避免檢測(cè)時(shí)，不同包裝袋里同一個(gè)編號(hào)的樣品放在一起發(fā)生無(wú)法辨認(rèn)的現(xiàn)象；

（3）計(jì)劃24 h內(nèi)開(kāi)展檢測(cè)或送檢的樣品應(yīng)作冷藏保存；24 h以上檢測(cè)或送檢的血清樣品應(yīng)作冷凍保存。用于病原檢測(cè)的組織或液體樣品冷藏保存，并要求于24 h內(nèi)送到檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室；

（4）填寫(xiě)樣品采集和送檢信息單，樣品送檢信息單一式三份，一份隨樣品送實(shí)驗(yàn)室，一份寄去，另一份備案。樣品信息內(nèi)容記錄應(yīng)包括以下內(nèi)容：抗體檢測(cè)樣品包括畜主姓名、畜禽場(chǎng)地址、動(dòng)物品種及其飼養(yǎng)量、樣品數(shù)量、免疫情況、疫苗種類、免疫時(shí)間、送檢者姓名、地址、郵編、電話及送檢日期；病料樣品除前述信息外，還包括樣品種類、首發(fā)病例日期、發(fā)病與死亡數(shù)量、臨床癥狀、發(fā)病年齡、治療情況、檢測(cè)項(xiàng)目等。

6.5.2 運(yùn)送

樣品運(yùn)送前的包裝嚴(yán)格執(zhí)行《動(dòng)物疫病實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)采樣方法》（NY/T 541-2002）。運(yùn)送過(guò)程中，應(yīng)盡量避免樣品包裝箱劇烈震動(dòng)，防止液體樣品灑出，并保持溫度在要求的范圍內(nèi)。用于進(jìn)行高致病性病原微生物診斷檢測(cè)的樣品，包裝和運(yùn)輸應(yīng)符合《高致病性動(dòng)物病原微生物菌（毒）種或者樣本運(yùn)輸包裝規(guī)范》的要求。

7 樣品采集過(guò)程中需要注意的生物安全問(wèn)題

樣品采集工作在保證樣品質(zhì)量的同時(shí)，必須要做好消毒和采樣廢棄物的無(wú)害化處理工作，防止因處置不當(dāng)而導(dǎo)致病原擴(kuò)散。特別是在采集用于或者疑似布魯氏菌病、結(jié)核病、棘球蚴病、炭疽、狂犬病等人獸共患病檢測(cè)樣品時(shí)，必須做好人員防護(hù)工作，保證采樣人員的健康安全。

7.1 提高人員的自我保護(hù)意識(shí)

（1）做好被采樣畜禽個(gè)體的保定，即能提高采樣速度和質(zhì)量，又能防止對(duì)采樣人員造成傷害，防止被采樣畜禽血管被針頭刺穿而使采樣無(wú)法完成；

（2）采樣操作時(shí)小心使用刀片、注射器、剪刀等尖銳器械，防止被刺傷、割傷。因傷口更易被布魯氏菌病、狂犬病等人獸共患病感染；采集、轉(zhuǎn)移組織液等液體樣品時(shí)，動(dòng)作要輕要慢，防止形成含有病原的氣溶膠，造成病原擴(kuò)散和人員感染。

7.2 人員的生物安全防護(hù)措施

事先應(yīng)根據(jù)擬檢測(cè)項(xiàng)目、疫病傳染性、是否為人獸共患病以及傳播途徑等因素，綜合分析，做好相應(yīng)的生物安全防護(hù)工作。特別是在采集疑似患有人獸共患病畜禽的樣品時(shí)，主要應(yīng)注意以下幾點(diǎn)：

（1）選戴N95級(jí)（含）以上的口罩做好呼吸道防護(hù)。戴好后用口吹氣和吸氣來(lái)檢查口罩是否佩戴正確：即吸氣呼氣時(shí)口罩邊緣均沒(méi)有空氣流動(dòng)，而口罩中央部位吸氣時(shí)凹陷，呼氣時(shí)凸起。否則需要調(diào)整口罩邊緣的密封效果。禁止佩戴普通一次性口罩，該口罩僅用于阻擋吸入灰塵和防止佩戴者口鼻中調(diào)出的物質(zhì)落到操作部位，不能過(guò)濾樣品采集過(guò)程中產(chǎn)生的含病原氣溶膠。

（2）必要時(shí)佩戴護(hù)目鏡，防止樣品濺出物和采樣過(guò)程中產(chǎn)生的氣溶膠進(jìn)入眼中造成感染。

（3）采集患人獸共患病畜禽樣品時(shí)，建議戴雙層手套，先戴丁腈手套后戴乳膠手套。戴前應(yīng)檢查口罩是否完好，操作過(guò)程中發(fā)現(xiàn)手套破裂立即更換。

（4）穿正規(guī)的防護(hù)服，長(zhǎng)筒雨鞋或戴鞋套。避免被畜禽濺出的血液、排出的糞便和噴出的唾液等分泌物污染皮膚、衣服而感染疫病。

7.3 廢棄物處理和采樣環(huán)境消毒

7.3.1 一次性器械、物品的處理

針頭、刀片使用完畢后，放入銳器盒帶回處理；一次性針管、防護(hù)用品應(yīng)裝入事先準(zhǔn)備好的密封袋中做焚燒或?qū)嶒?yàn)室高壓消毒處理。

7.3.2 尸體與環(huán)境處理

采樣后的畜禽尸體，噴灑消毒藥后進(jìn)行焚燒或深埋等無(wú)害化處理。采樣結(jié)束，采樣人員進(jìn)行更衣消毒，對(duì)被污染環(huán)境嚴(yán)格進(jìn)行清潔消毒。