2012～2015年河南省部分地區(qū)規(guī)模化豬場(chǎng)PRV血清流行病學(xué)調(diào)查

摘 要：為了解河南省規(guī)模化豬場(chǎng)豬偽狂犬病毒（PRV）野毒感染情況，本研究應(yīng)用IDEXX公司的 PRV gpI抗體檢測(cè)試劑盒對(duì)2012年1月～2015年8月送檢的17個(gè)地市包括240個(gè)規(guī)?；i場(chǎng)的3 342份血清樣本進(jìn)行PRV gpI（gE）抗體的檢測(cè)。結(jié)果顯示，送檢樣本中PRV gpI （gE）抗體陽(yáng)性率在2012年、2013年、2014年和2015年8月份前分別為40.15 %、63.09 %、62.20 %和70.24 %。對(duì)不同生長(zhǎng)階段的豬群檢測(cè)結(jié)果分析表明，不同生長(zhǎng)階段豬群PRV野毒抗體陽(yáng)性率差異顯著，后備母豬、母豬和公豬的PRV gpI（gE）的陽(yáng)性率偏高；不同季度送檢的血清PRV野毒抗體陽(yáng)性率差異不大。送檢樣本的規(guī)?；B(yǎng)豬場(chǎng)使用的豬偽狂犬疫苗均是gE基因缺失的活疫苗，因此，gE抗體陽(yáng)性的豬場(chǎng)可以判定為PRV野毒感染陽(yáng)性場(chǎng)。本研究對(duì)指導(dǎo)規(guī)?；i場(chǎng)豬偽狂犬病的控制與凈化具有重要的指導(dǎo)意義。

關(guān)鍵詞：豬偽狂犬?。谎鍖W(xué)調(diào)查；ELISA

中圖分類(lèi)號(hào)：S851.31+3 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1001-0769（2016）01-0044-04

豬偽狂犬病（Pseudorabies，PR）曾經(jīng)在世界上廣泛分布，是危害養(yǎng)豬業(yè)健康發(fā)展的重要疫病之一[1]。其主要引起妊娠母豬產(chǎn)死胎、木乃伊胎和流產(chǎn)，新生仔豬神經(jīng)癥狀、嘔吐、腹瀉，病死率高達(dá)80 %～100 %；斷奶仔豬和育肥豬表現(xiàn)出呼吸道癥狀[2]。隨著PRV基因缺失疫苗及淘汰野毒感染豬的綜合凈化措施在規(guī)?；i場(chǎng)的普遍推廣，使得該病在世界范圍內(nèi)得到有效控制。但自2011年底以來(lái)，我國(guó)很多PRV免疫豬場(chǎng)再次發(fā)生疫情，病毒分離鑒定結(jié)果確診其為PRV [3-5]。為了更好地了解現(xiàn)有的防疫控制體系下河南省規(guī)模豬場(chǎng)偽狂犬感染的狀況，為有效控制和消滅豬偽狂犬病提供科學(xué)依據(jù)，我們于2012年1月～2015年8月間對(duì)河南省17地市部分規(guī)?；i場(chǎng)進(jìn)行豬偽狂犬病的流行病學(xué)調(diào)查，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試劑盒

美國(guó)愛(ài)德士公司（IDEXX）PRV gpI（gE）抗體檢測(cè)試劑盒。

1.1.2 樣本

來(lái)自2012年1月～2015年8月期間的全國(guó)16個(gè)省（直轄市）240個(gè)規(guī)?；i場(chǎng)的血樣。

1.2 方法

1.2.1 血清樣本的制備

血清樣本是經(jīng)豬前腔靜脈或耳緣靜脈采集 3 mL～5 mL非抗凝血液，室溫靜置2 h～6 h后， 3 000 r/min離心15 min，取上清置于滅菌EP管中，備用。

1.2.2 PRV gE 抗體檢測(cè)方法

按照IDEXX公司PRV gpI（gE）抗體檢測(cè)試劑盒中提供的說(shuō)明書(shū)中所述方法進(jìn)行。

1.2.3 結(jié)果判定與分析

本研究所檢測(cè)的樣本全部來(lái)自使用PRV gE基因缺失疫苗免疫的豬場(chǎng)，因此PRV gE抗體陽(yáng)性豬可判斷其為PRV野毒感染所致。PRV gE抗體檢測(cè)結(jié)果判定參照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。在進(jìn)行豬場(chǎng)結(jié)果判定和統(tǒng)計(jì)時(shí)，只要豬場(chǎng)有一個(gè)樣本判定為陽(yáng)性，則該場(chǎng)判定為偽狂犬野毒陽(yáng)性場(chǎng)。

針對(duì)樣本背景信息，按照不同年份、不同地區(qū)、不同季節(jié)、不同豬群等進(jìn)行結(jié)果統(tǒng)計(jì)與分析，根據(jù)分析結(jié)果評(píng)估PRV野毒的流行特點(diǎn)和豬偽狂犬病防控過(guò)程中存在的問(wèn)題和可能的有效措施。

2 結(jié)果

2.1 不同年份規(guī)?；i場(chǎng)PRV野毒感染情況

2012年1月～2015年8月送檢的164家規(guī)?；i場(chǎng)PRV血清PRV gpI（gE）抗體檢測(cè)結(jié)果顯示：2012年1月～2015年8月共檢測(cè)3 342份樣本，每年檢測(cè)樣本分別為797個(gè)，940個(gè)、1 111個(gè)、494個(gè)，其中陽(yáng)性樣本占比分別為40.15 %、63.09 %、62.20 %、70.24 %（表1）。

2.2 不同季節(jié)規(guī)模化豬場(chǎng)PRV野毒感染情況

由于不同季節(jié)的采集樣本不同，檢測(cè)陽(yáng)性樣本在不同季節(jié)也有差異 （圖1），第一季度至第四季度樣本PRV gE陽(yáng)性占比分別為53.54 %、55.67 %、57.83 %和57.85 %（圖2）。

2.3 不同地區(qū)規(guī)?；i場(chǎng)PRV野毒感染情況

2012年1月～2015年8月從河南省17地市164家規(guī)模豬場(chǎng)采取血清樣本進(jìn)行偽狂犬gE抗體檢測(cè)，檢測(cè)超過(guò)100個(gè)樣本的有洛陽(yáng)、三門(mén)峽、駐馬店、開(kāi)封、濟(jì)源、周口、漯河等7個(gè)地區(qū)（圖3）。其中PRV gE陽(yáng)性率超過(guò)60 %有9個(gè)地市，由于偽狂犬gE陽(yáng)性不同地區(qū)檢測(cè)樣本不一樣，結(jié)果差異化也很大（圖4）。

2.4 規(guī)?；i場(chǎng)不同階段豬群PRV gE抗體陽(yáng)性情況

為了方便流行病學(xué)調(diào)查統(tǒng)計(jì)，根據(jù)豬的生長(zhǎng)狀況，我們將豬群分為5個(gè)生長(zhǎng)階段，新生仔豬（1周齡～4周齡）、保育仔豬（4周齡～8周齡）、育肥豬（9周齡以上）、后備母豬和成年豬（包括種公豬和生產(chǎn)母豬）。取豬齡明確不同類(lèi)型的豬群 1 410份血清，依據(jù)PRV gE抗體檢測(cè)結(jié)果，分析PRV野毒陽(yáng)性率與不同生長(zhǎng)階段豬群的關(guān)系。結(jié)果表明，感染率最高為種公豬，陽(yáng)性率為76.4 %，其次是后備母豬73.8 %和母豬74.6 %，新生仔豬、保育豬、育肥豬的感染率分別為63.3 %、58.3 %和46.6 %（表2）。

3 討論與分析

3.1 河南省各地區(qū) PRV感染情況

本調(diào)查范圍包括河南省17個(gè)地市的164家豬場(chǎng)，調(diào)查結(jié)果表明河南省豬場(chǎng)豬偽狂犬野毒感染呈逐年上升趨勢(shì)，感染依然嚴(yán)重。本次共檢測(cè)了3 342份血清，結(jié)果表明豬PRV野毒感染陽(yáng)性率達(dá)58.38 %，與中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)程晶、陳艷紅等[6]于2006～2008年進(jìn)行的調(diào)查結(jié)果PRV野毒感染陽(yáng)性率達(dá)23.40 %相比，豬PRV野毒感染陽(yáng)性率呈明顯上升趨勢(shì)。從不同年份PRV野毒感染陽(yáng)性率的分析，2012年1月～2015年8月的PR流行情況呈逐年遞增趨勢(shì)，說(shuō)明近3年來(lái)在規(guī)模豬場(chǎng)疫病防控中PR呈高發(fā)態(tài)勢(shì)；從不同季度檢測(cè)結(jié)果來(lái)看，一年四季均能發(fā)生，且發(fā)生率差異不大，該結(jié)果與程晶和姜艷芬等研究報(bào)道冬春較為多發(fā)有些不一致[6，7]。從不同地域的規(guī)模豬場(chǎng)PRV野毒感染情況分析，不同地域的PRV野毒感染有差異，這可能與地域采樣的多少有一定的關(guān)系，但從結(jié)果來(lái)看豫北區(qū)域感染率高于豫南區(qū)域。從不同年齡階段的豬群PRV野毒感染的分布來(lái)看，從新生仔豬、保育仔豬、育肥豬、后備母豬和成年豬血清中均有PRV野毒抗體陽(yáng)性檢出，這說(shuō)明不同年齡、不同性別的豬群對(duì)PRV均易感。其中種公豬、后備母豬的檢測(cè)出率分別高達(dá)76.9 %、73.8 %和74.6 %，該結(jié)果也說(shuō)明種豬帶毒和引種帶毒可能是規(guī)模豬場(chǎng)發(fā)生PR轉(zhuǎn)陽(yáng)率提升的關(guān)鍵因素之一。而保育仔豬的檢測(cè)出率高達(dá)58.3 %和育肥豬檢測(cè)出率高達(dá)46.6 %，也說(shuō)明了帶毒豬的散毒可能性和仔豬的免疫制定不合理，有必要對(duì)免疫程序進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整[8]。另外，保育和育肥豬舍的消毒衛(wèi)生和生物安全工作較差，這也是育肥豬感染率居高不下的重要原因[6]。當(dāng)一部份的生長(zhǎng)育肥豬進(jìn)入后備母豬群，隱性感染PRV的豬也隨之進(jìn)入，因此在豬場(chǎng)中形成循環(huán)感染，這也是部分豬場(chǎng)偽狂犬病持續(xù)存在、難以?xún)艋耆闹匾蛑籟9]。

3.2 當(dāng)前PRV防控的難點(diǎn)

一是豬跨區(qū)域流動(dòng)限制和引種監(jiān)測(cè)難度大。對(duì)于豬場(chǎng)來(lái)說(shuō)，本次調(diào)查顯示偽狂犬感染呈逐年上升趨勢(shì)，而目前由于全國(guó)范圍內(nèi)尚未啟動(dòng)PRV凈化方案，多年來(lái)又有很多規(guī)模豬場(chǎng)跨省銷(xiāo)售和引種，對(duì)于陽(yáng)性商品豬及種豬的流動(dòng)與監(jiān)測(cè)不力也給PRV防控帶來(lái)困難。二是免疫抑制疫病對(duì)疫苗免疫的干擾，PCV2和PRRSV等單一或協(xié)同感染，造成免疫抑制而引起PRV疫苗免疫失敗或延遲，高峰等[10]證實(shí)圓環(huán)病毒感染仔豬可以導(dǎo)致PRV疫苗抗體產(chǎn)生推遲，抑制PRV疫苗誘導(dǎo)的體液免疫反應(yīng)。三是新型PRV毒株出現(xiàn)。新型PRV毒株與Bartha毒株比較毒力基因有6個(gè)堿基缺失，而免疫原gB基因比較有9個(gè)堿基缺失，毒力基因的變化導(dǎo)致PRV毒株的毒力明顯增強(qiáng)[11]，遇秀玲等[12]也證實(shí)該病毒的致病性有增強(qiáng)趨勢(shì)。四是疫苗免疫有效但不能阻止其感染轉(zhuǎn)陽(yáng)?，F(xiàn)有的商用疫苗毒株絕大部分為Bartha K61株，對(duì)經(jīng)典的偽狂犬病毒株有100 %的保護(hù)；但對(duì)于新的高致病性偽狂犬病毒，僅有50 %的保護(hù)率[11]。疫苗免疫可以有效減少病毒載量，但疫苗產(chǎn)生的保護(hù)力不足以抵抗強(qiáng)毒的入侵；另外，多數(shù)豬場(chǎng)免疫程序不合理，母豬免疫一刀切，仔豬僅在50日齡左右免疫一次，而忽略了滴鼻免疫的重要性，造成產(chǎn)房早期感染很普遍的現(xiàn)象。五是豬場(chǎng)生物安全措施和管理不到位，對(duì)于滅鼠、豬群移動(dòng)、人員和工具流動(dòng)等切斷病原傳播途徑的豬場(chǎng)生物安全措施在一條龍生產(chǎn)的規(guī)模豬場(chǎng)很難實(shí)施。

3.3 對(duì)PRV防控與凈化的建議

從近3年調(diào)查結(jié)果來(lái)看，現(xiàn)階段偽狂犬在仍呈流行性的態(tài)勢(shì)下，對(duì)于規(guī)模豬場(chǎng)PRV防控來(lái)說(shuō)，最實(shí)際也是最有效的手段是選用優(yōu)質(zhì)的偽狂犬活疫苗并采用科學(xué)的免疫方案，以保證豬群有足夠的免疫力?？茖W(xué)的免疫可以控制偽狂犬的臨床癥狀，減少陽(yáng)性動(dòng)物排毒量、縮短排毒時(shí)間、降低血清學(xué)陽(yáng)性率，即使周邊地區(qū)存在偽狂犬感染場(chǎng)，通過(guò)努力也可最終成為gE陰性場(chǎng)。對(duì)于規(guī)?；i場(chǎng)如何實(shí)施PRV凈化來(lái)說(shuō)，需要有一套科學(xué)合理的實(shí)施計(jì)劃。豬場(chǎng)除了需要加強(qiáng)管理和生物安全措施，還要在免疫前檢測(cè)gE抗體，確定陽(yáng)性感染率，制定合理免疫程序，定期監(jiān)測(cè)野毒感染陽(yáng)性率，適時(shí)淘汰陽(yáng)性種豬，最終實(shí)現(xiàn)凈化目標(biāo)。本次調(diào)查的規(guī)模豬場(chǎng)均接種了PRV gE基因缺失疫苗，但仍存在如此高的PRV野毒感染率，說(shuō)明近期對(duì)PR防疫控制工作目前在規(guī)模豬場(chǎng)仍然很重要。

參考文獻(xiàn)：（12篇，略）