國產(chǎn)注射用阿莫西林鈉中主要雜質(zhì)分析

高波

哈藥集團(tuán)制藥總廠 150000

國產(chǎn)注射用阿莫西林鈉中主要雜質(zhì)分析

高波

哈藥集團(tuán)制藥總廠 150000

目的：本文主要對國產(chǎn)注射使用的阿莫西林鈉里面所含有的雜質(zhì)進(jìn)行研究。方法：使用高效液相色譜法，將WatersNova－pakC18(250mm×4.6mm，5μm)作為主要色譜柱，并且該設(shè)備所檢測的波長大概在254nm左右，采取梯度洗脫的手段對105批樣品中所含有的物質(zhì)進(jìn)行檢查。結(jié)果：在國產(chǎn)注射所使用的阿莫西林鈉里面檢查出多種雜質(zhì)，主要含有阿莫西林青霉氧酸、相應(yīng)的阿莫西林三聚體等在雜質(zhì)。而單個(gè)雜質(zhì)所含有的數(shù)量都不大于3%，總共存在的雜質(zhì)數(shù)量都不大于6%。結(jié)論：在本次實(shí)驗(yàn)中所得到的結(jié)果對進(jìn)行加以指導(dǎo)該品種生產(chǎn)有著重要的意義。

阿莫西林鈉；雜質(zhì)；分析

在臨床醫(yī)學(xué)界注射使用的阿莫西林鈉是利用無菌阿莫西林鈉的有關(guān)原料在處于無菌的狀態(tài)下制成的無菌粉針劑，當(dāng)前在我國市場中已經(jīng)實(shí)現(xiàn)大量的生產(chǎn)，能夠起到預(yù)防感染的作用。所以對該藥物里面含有的雜質(zhì)進(jìn)行分析有著重要的意義。對此，本次實(shí)驗(yàn)主要依據(jù)我國相關(guān)藥典所記載的方式，將色譜條件加以完善，并隨機(jī)在我國廠家中將105批該藥物進(jìn)行詳細(xì)的研究，采取相應(yīng)的阿莫西林系統(tǒng)所產(chǎn)生的對照品以及國外雜質(zhì)對照品進(jìn)行準(zhǔn)確的定位，對獲得的雜質(zhì)譜進(jìn)行總結(jié)，將該藥物里面所含有的雜質(zhì)種類以及含量找出來。

1、儀器與試藥

色譜儀；包括 P680泵；ASI－100自動(dòng)進(jìn)樣器；PDA－100二極管陣列檢測器；色譜工作站。阿莫西林雜質(zhì)對照品:6－氨基青霉烷酸(;阿莫西林系統(tǒng)適用性對照品；二酮哌嗪阿莫西林、阿莫西林青霉氧酸、阿莫西林青霉噻唑酸、3－(4－羥基苯基)吡嗪－2－醇、(2R)－2－［(2，2－二甲基異丙醇)氨基］－2－(4－羥基苯基)乙酸(批號(hào):0232.08)、(2R)－2－氨基－2－(4－羥基苯基)乙酸;乙腈為色譜純;磷酸二氫鉀為分析純。

2、溶液的制備

2.1 供試品溶液

（1）相關(guān)人員選擇適量的105批樣品，采取精密的手段進(jìn)行測量，在使用的前期階段需要使用流動(dòng)相A進(jìn)行溶解并稀釋城相應(yīng)等量的溶液即可。

（2）對照溶液精密量取供試品溶液1mL，置100mL量瓶中，用流動(dòng)相A稀釋至刻度，搖勻，即得。

（3）對照品混合溶液。取各阿莫西林雜質(zhì)對照品各約5mg，置5mL量瓶中，用流動(dòng)相A定容，搖勻，即得。

（4）酸破壞供試品溶液。取樣品40mg，加0.1mol·L-1鹽酸溶液0.5mL，放置20min后，加水制成2mg·mL-1的溶液，即得。

（5）堿破壞供試品溶液。取樣品40mg，加0.1mol·L-1氫氧化鈉溶液0.5mL，放置20min后，加水制成2mg·mL-1的溶液，即得。

（6）氧化破壞供試。品溶液取樣品40mg，加0.05%過氧化氫溶液0.5mL，放置30min后，加水制成2mg·mL-1的溶液，即得。

（7）光照破壞供試品溶液取樣品，置254nm光照24h后，加水制成2mg·mL-1的溶液，即得。

（8）高溫破壞供試品溶液取樣品，80℃下加熱1h，加水制成2mg·mL-1的溶液，即可得。

3、方法與結(jié)果

3.1 線性關(guān)系及檢出限、定量限的考察

稱取購得的7個(gè)雜質(zhì)對照品適量，配制成100，50，10，5，0.5μg·mL-1的溶液，依次注入液相色譜儀，以進(jìn)樣濃度(X，μg·mL－1)為橫坐標(biāo)，相應(yīng)的雜質(zhì)峰面積(Y)為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性分析。6－氨基青霉烷酸、二酮哌嗪阿莫西林、阿莫西林青霉氧酸、阿莫西林青霉噻唑酸峰1、阿莫西林青霉噻唑酸峰2、3－(4－羥基苯基)吡嗪－2－醇、(2R)－2－［(2，2－二甲基異丙醇)氨基］－2－(4－羥基苯基)乙酸、(2R)－2－氨基－2－(4－羥基苯基)乙酸回歸方程分別為:

線性范圍均為100～0.50μg·mL－1，檢出限(S/N=3)分別為0.06，0.08，0.03，0.14，0.10，0.01，0.05，0.05μg·mL-1;定量限(S/N=10)分別為0.20，0.28，0.10，0.45，0.34，0.03，0.16，0.17 μg·mL-1。

3.2 精密度

取各雜質(zhì)對照品，加流動(dòng)相A制成50μg·mL-1的溶液，注入液相色譜儀，重復(fù)6次，結(jié)果6－氨基青霉烷酸、二酮哌嗪阿莫西林、阿莫西林青霉氧酸、阿莫西林青霉噻唑酸、3－(4－羥基苯基)吡嗪－2－醇、(2R)－2－［(2，2－二甲基異丙醇)氨基］－2－(4－羥基苯基)乙酸、(2R)－2－氨基－2－(4－羥基苯基)乙酸峰面積的RSD分別為0.23%，0.31%，0.32%，0.24%，0.15%，0.39%。取供試品溶液注入液相色譜儀，重復(fù)6次，結(jié)果阿莫西林二聚體(相對于主峰的保留時(shí)間為 4.1)和阿莫西林三聚體(相對于主峰的保留時(shí)間為4.6)峰面積的RSD分別為0.18%，0.10%。可見方法精密度良好。

3.3 測定結(jié)果

取105批樣品適量，精密稱定，臨用前用流動(dòng)相A溶解并定量稀釋成每1mL中含2mg的溶液，立即進(jìn)樣，共檢出19個(gè)雜質(zhì)，歸納其雜質(zhì)譜并統(tǒng)計(jì)分析各雜質(zhì)的含量變化。6－氨基青霉烷酸、二酮哌嗪阿莫西林、阿莫西林青霉氧酸、阿莫西林青霉噻唑酸、3－(4－羥基苯基)吡嗪－2－醇、(2R)－2－［(2，2－二甲基異丙醇)氨基］－2－(4－羥基苯基)乙酸、(2R)－2－氨基－2－(4－羥基苯基)乙酸這 7個(gè)雜質(zhì)的量用雜質(zhì)對照品按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，其他雜質(zhì)均采用主成分自身對照法計(jì)算，結(jié)果見圖1，其中，柱狀圖表示105批各雜質(zhì)的平均含量;偏差線表示105批次中該雜質(zhì)的2倍標(biāo)準(zhǔn)偏差(2SD)。

圖1 供試品溶液的典型HPLC色譜圖及雜質(zhì)含量

4、討論

通常情況下，正式的雜事對照品通常要花費(fèi)大量的成本，并且在實(shí)際操作中也不容易得到。因此，普遍可以使用適當(dāng)?shù)纳V柱當(dāng)作實(shí)驗(yàn)的對象，并且在色譜條件允許的情況下進(jìn)行試驗(yàn)。這里值得注意的是，這種實(shí)驗(yàn)所得到的結(jié)果無法獲得顯著的效果，然而盡可能和真實(shí)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果相吻合。相關(guān)人員依據(jù)對實(shí)驗(yàn)所獲得的有關(guān)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析得知，注射使用的阿莫西林鈉中包含諸多的物質(zhì)，如阿莫西林、阿莫西林二聚體等，而且這些物質(zhì)可以在人的身體里面存在一定的時(shí)間，而這些時(shí)間的存在可以當(dāng)作定位雜質(zhì)的重要參照物。

對于該藥物自身的屬性而言，具備不耐熱的特點(diǎn)，倘若在實(shí)驗(yàn)室中發(fā)生高溫的現(xiàn)象，那么就會(huì)知識(shí)該藥物產(chǎn)生不穩(wěn)定的情況，對實(shí)驗(yàn)所得到的結(jié)果帶來諸多的影響。在我國相關(guān)的藥典中沒有對該藥物的控制進(jìn)行明確規(guī)定，這樣就在一定程度上致使各個(gè)地方的廠家在對藥物進(jìn)行運(yùn)輸亦或是存儲(chǔ)的過程中，沒有對環(huán)境溫度引起高度的重視，進(jìn)而促使該藥物在運(yùn)輸亦或是存儲(chǔ)時(shí)發(fā)生質(zhì)變的情況，就會(huì)倒在雜質(zhì)中所含有的種類以及相應(yīng)的含量也同樣發(fā)生轉(zhuǎn)變，這樣就致使該藥物不能發(fā)揮出最大的價(jià)值，嚴(yán)重的可能還會(huì)帶來一定的危險(xiǎn)性。在本文中主要對溫度因素引起了高度重視，所得到的實(shí)驗(yàn)結(jié)果具有一定的公正性，對各種因素所產(chǎn)生的影響加以分析，特別是全面分析溫度因素以后，對該藥物里面所含有的雜質(zhì)進(jìn)行了探索。當(dāng)相關(guān)人員將可能出現(xiàn)的因素考慮以后，采取隨機(jī)的方式抽取了105批藥物，并將這些藥物當(dāng)作主要的研究對象。

而在本次抽樣工作開展的過程中，主要包含數(shù)十個(gè)省，都是經(jīng)過0-18個(gè)月的儲(chǔ)存時(shí)間。經(jīng)過相關(guān)實(shí)驗(yàn)可以得知：由于生產(chǎn)廠家以及地區(qū)抽取的樣品不同，所產(chǎn)生雜質(zhì)的種類以及相關(guān)的含量也是不同的，出現(xiàn)這種情況的原因可能因?yàn)橹T多因素，比如生產(chǎn)工藝、存儲(chǔ)方式等。

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1672-5018（2016）11-319-02