石榴枝對猴頭菌總酚含量及抗氧化活性的影響

安義鋒，魯　　慧，陶金明，李云菊，羅　　冰

（紅河學(xué)院生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，云南蒙自 661199）

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石榴枝對猴頭菌總酚含量及抗氧化活性的影響

安義鋒，魯慧，陶金明，李云菊，羅冰

（紅河學(xué)院生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，云南蒙自 661199）

摘 要：以不同比例石榴枝搭配木屑栽培的猴頭菌子實體為研究對象，測定其中多酚含量及其抗氧化活性（羥基自由基消除率、超氧陰離子自由基消除率、脂質(zhì)過氧化抑制率）的變化。研究結(jié)果表明，不同培養(yǎng)基栽培猴頭菌的總酚含量存在顯著差異，其中配方7（28%石榴枝、50%木屑、18%麩皮、2%石膏、1%蔗糖、1%過磷酸鈣）組成的培養(yǎng)基猴頭菌子實體總酚含量最高達(dá)到3.642mg/g；并且羥基自由基消除、脂質(zhì)過氧化抑制與多酚含量一定程度內(nèi)呈正相關(guān)。

關(guān)鍵詞：猴頭菌：石榴枝；羥基自由基；脂質(zhì)過氧化抑制

猴頭菌（Hericium erinaceus）是我國著名的食用菌，其肉嫩味美，營養(yǎng)豐富，同時也含有生物活性物質(zhì)如多糖、多酚等，具有抗?jié)?、抗炎癥等藥用價值.[1-4]為了提高產(chǎn)量，近年來對培養(yǎng)基選擇、菌種選育、栽培等方面開展了相關(guān)研究，研究表明改變培養(yǎng)基的組成對增加猴頭菌產(chǎn)量有重要作用.[5-7]同時關(guān)于猴頭菌營養(yǎng)成分、抗氧化活性等方面也有相關(guān)報道，但培養(yǎng)基組成對猴頭菌營養(yǎng)成分及多酚含量和抗氧化活性影響卻少有研究.[8-9]試驗以不同劑量的石榴枝搭配雜木屑栽培的猴頭菌為研究對象，比較研究石榴枝的添加對猴頭菌多酚含量和抗氧化活性的影響，以期為生產(chǎn)出具有高抗氧化活性的猴頭菌栽培配方提供理想的培養(yǎng)基實驗基礎(chǔ)，從而提高猴頭菌多酚含量和抗氧化活性，為猴頭菌進(jìn)一步開發(fā)利用打下堅實的基礎(chǔ).

2　材料與方法

2.1.菌種

刺長猴頭菌種：引自于湖北省武漢市華中食用菌栽培研究所.

2.2實驗方法

2.2.1菌種活化與栽培出菇

菌種活化麩皮培養(yǎng)基.[10]猴頭菌栽培培養(yǎng)基見表1：

表1　猴頭菌栽培培養(yǎng)基配方

2.2.2抗氧化活性試驗

采收的猴頭菌40℃烘干至衡重后粉碎，過60目篩后密封儲存于陰涼干燥處備用.

30例患者共有22例半月板損傷,8例沒有半月板損傷,半月板損傷合并脛骨平臺骨折的比例是73.3%。有19例半月板損傷是在紅區(qū)和紅白交界處,有2例使半月板后角損傷,因器械操作困難無法修復(fù),其余均是一期修復(fù)?；颊呓邮?2至18個月隨訪,有1例皮膚壞死,出現(xiàn)瘢痕愈合,其余均愈合良好。

2.2.2.1猴頭菇總酚提取[11-12]

準(zhǔn)確稱取猴頭菌粉1.250g于100mL 錐形瓶中，加入50%乙醇12.50mL，于微波爐中以160W功率加熱提取60s，將提取液抽濾，濾液置于15mL離心管中，用同樣方法將濾渣重復(fù)處理一次，乙醇提取液5000r/min離心15min，合并上清液，并用定容25mL，即得猴頭菌總酚提取液，低溫避光保存待用；

2.2.2.2猴頭菇總酚含量的測定

猴頭菌多酚提取液中多酚含量按照參考文獻(xiàn)[13]方法測定.

2.2.2.3對羥基自由基消除率的測定

猴頭菌多酚提取液對羥基自由基消除能力按照參考文獻(xiàn)[14]方法測定.

2.2.2.4 對脂質(zhì)過氧化抑制的測定

猴頭菌多酚提取液對脂質(zhì)過氧化抑制能力按照參考文獻(xiàn)[15]方法.

猴頭菌多酚提取液對脂質(zhì)過氧化抑制能力按照參考文獻(xiàn)[16]方法.

2.3 數(shù)據(jù)分析

數(shù)據(jù)處理后表示成平均值±標(biāo)準(zhǔn)差（n=3），應(yīng)用統(tǒng)計學(xué)軟件SPSS13.0的ANOVA進(jìn)行分析多樣本差異性顯著實驗，用S-N-K多重比較數(shù)據(jù)兩兩之間的差異顯著性.

3　結(jié)果與分析

3.1培養(yǎng)基組成對猴頭菇總酚含量及抗氧化活性的影響

由表2可知，不同培養(yǎng)基組成對猴頭菌總酚含量存在顯著差異，培養(yǎng)基配方2、3、4、6、7隨著石榴枝添加量的減少，猴頭菌子實體總酚含量呈上升趨勢.配方4、5、6、7、8的總酚含量顯著高于對照（P<0.05），其中配方7（28%石榴枝、50%木屑）的猴頭菇子實體多酚含量最高，總酚含量達(dá)到3.642mg/g，是對照組總酚含量的1.52倍.說明，不同的培養(yǎng)基組成會影響猴頭菌子實體中的總酚含量，但其變化并非簡單的線性關(guān)系.

表2　不同培養(yǎng)基對猴頭菌多酚含量及抗氧化活性的影響

由表2可知，配方4、5、6、7、8的總酚提取液對羥基自由基消除能力顯著高于對照組，其中配方6 （33%石榴枝、55%木屑）的總酚提取液對羥基自由基消除率最高，已達(dá)到76.1%.

猴頭菌總酚提取液對超氧陰離子自由基均有一定的消除作用.由表2可知，配方3與配方7總酚提取液對超氧陰離子自由基有較大消除效果，其中配方3總酚提取液對超氧陰離子自由基消除率高達(dá)75%，較對照組提升63.64%.

本實驗采用雞蛋黃作為反應(yīng)的脂質(zhì)來源，分析猴頭菌總酚的脂質(zhì)抗氧化能力.由表2可知，配方4、5、6、7、8的總酚提取液對脂質(zhì)過氧化抑制能力顯著高于對照組，其中配方4的總酚提取液對脂質(zhì)過氧化抑制率最高，可達(dá)到65.56%.

3.2 多酚含量與抗氧化的回歸關(guān)系

通過對多酚含量與抗氧化指標(biāo)的曲線擬合及相關(guān)性的檢驗得出，多酚含量對羥基自由基消除率的決定系數(shù)最好的是二次曲線方程（y=b0+b1x+b2x2），對超氧陰離子自由基消除率決定系數(shù)最好的是三次曲線方程（y=b0+b1x+b2x2+b3x

3），對脂質(zhì)過氧化抑制決定系數(shù)最好的是S曲線方程y=e(b0+b1)/x.

表3　多酚含量與抗氧化指標(biāo)的曲線擬合優(yōu)度檢驗結(jié)果

由表3可知，總酚含量與羥基自由基消除率在二次曲線方程中存在顯著回歸（Sig<0.05）.在實驗濃度范圍內(nèi)，在Fenton反應(yīng)體系中加入多酚有較好的羥基自由基消除效果；且消除能力隨多酚含量的增加而增強.多酚含量為3.322mg/g時羥基自由基的消除率最高，可達(dá)76.1%.當(dāng)加入的多酚含量超過3.322mg/ g時，多酚對羥基自由基消除率呈下降趨勢.

呂禹澤[17]等、朱丹[18]等、張赟彬[19]等分別研究了不同植物總酚對羥基自由基的消除效果，發(fā)現(xiàn)了植物總酚在低濃度時具有較好的消除效果，當(dāng)濃度增至一定程度后消除率反而下降.[20]本研究表明不同培養(yǎng)基處理猴頭菌子實體的總酚也具有相應(yīng)效應(yīng),猴頭菌子實體總酚在一定條件下表現(xiàn)出促進(jìn)氧化作用.

由表3可知，多酚含量與超氧陰離子自由基消除率間存在極顯著的回歸（y=140.789－36.487x2+8.415x3，R2=0.276,Sig＜0.05），多酚含量較高的配方7對超氧陰離子自由基消除率不是最高的，反而是多酚含量較少的配方3對超氧陰離子自由基消除率最高，可能的原因是：猴頭菌中的多酚類物質(zhì)存在多樣性，并不是所有的多酚類化合物都具有相同的抗氧化功效，其抗氧化活性與化合物的結(jié)構(gòu)有關(guān)[23].由于猴頭菌總酚提取物是由多種酚類物質(zhì)組成的復(fù)雜混合物，因此必須考慮到其中的單一酚類物質(zhì)之間的相互作用，而對猴頭菌總酚提取物中不同酚類物質(zhì)之間的拮抗作用或相互協(xié)調(diào)作用的了解不徹底,還需對其中的單一酚類物質(zhì)作進(jìn)一步研究.

多酚含量與脂質(zhì)過氧化抑制率在S曲線方程中存在極顯著回歸（R2=0.706，y=e5.745/x）.由表3可知，在實驗濃度范圍內(nèi)，向反應(yīng)體系中加入多酚對脂質(zhì)過氧化抑制有較好的效果；當(dāng)加入的多酚含量為3.146mg/g時脂質(zhì)過氧化率最高，可達(dá)65.56%.當(dāng)加入多酚含量超過3.146mg/g時，多酚對脂質(zhì)過氧化抑制率呈下降趨勢.

4　結(jié)論

通過研究表明，培養(yǎng)基成分對猴頭菌總酚含量及抗氧化活性影響較大.不同培養(yǎng)基栽培的猴頭菌總酚與抗氧化能力（羥基自由基消除率、脂質(zhì)過氧化抑制率）間存在極顯著的回歸關(guān)系，在一定濃度范圍內(nèi)，多酚含量越高，對羥基自由基、脂質(zhì)過氧化的抑制作用越強.雖然培養(yǎng)基組成對猴頭菌多酚含量及其抗氧化活性具有一定的影響，但并未對其具體成分進(jìn)行測試,因此有待進(jìn)一步進(jìn)行研究探討.

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[責(zé)任編輯 魯海菊]

Effects of Pomegranate Branch on Total Phenolic Content and Antioxidant Activity of Hericium erinaceus

AN Yi-feng,LU Hui,TAO Jin-ming,LI Yun-ju,LUO Bing
(College of Life Science and Technology,Honghe University,Mengzi 661199,China)

Abstract:Hericium erinaceus was the research object in this study,which cultivated in different proportion of pomegranate branch tie-in sawdust; To determine its polyphenol content and the changes of antioxidant activity (hydroxyl free radical elimination rate,superoxide anion free radical elimination rate,inhibition of lipid peroxidation) changes.The results showed that there were significant differences in the total phenol content between strains cultivated by different culture mediums of Hericium erinaceus.Of which,in the formula 7 cultures (pomegranate branch 28%,sawdust 50%,wheat bran 18%,gypsum 2%,scrose 1%,calcium superphosphate 1%),the highest total phenolic content of Hericium erinaceus fruitbody was up to 3.642mg/g.Hydroxyl free radical elimination and lipid peroxidation inhibition’s abilities were certain degree of positive correlation in polyphenol content.

Key words:Hericium erinaceus; Pomegranate branch; Hydroxyl radical; Lipid peroxidation

通訊作者：羅冰(1981-)，女，云南蒙自人，講師，研究方向：食用菌栽培。

基金項目：2013年國家級大學(xué)生科技創(chuàng)新訓(xùn)練項目：猴頭菇優(yōu)質(zhì)、高產(chǎn)栽培方法的研究

收稿日期：2015-05-13

DOI:10.13963/j.cnki.hhuxb.2016.02.008

中圖分類號：Q591

文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A

文章編號：1008-9128（2016）02-0027-03

第一作者：安義鋒(1991-)，男，紅河學(xué)院生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院2011級生物技術(shù)專業(yè)學(xué)生。