消銀湯對豚鼠銀屑病樣模型血清TNF—α、IFN—γ水平的影響

宋紅霞

【摘 要】目的：探討消銀湯對TNF-α、IFN-γ水平的影響。方法：建立豚鼠耳部銀屑病皮損模型，給予不同劑量的消銀湯干預，14d后，采用ELISA法檢測豚鼠血清TNF-α、IFN-γ的含量。結果：消銀湯組豚鼠血清中TNF-α、IFN-γ的含量均明顯低于模型組（P<0.01）；消銀湯高劑量組對豚鼠血清中TNF-α、IFN-γ表達的改善作用優(yōu)于甲氨蝶呤（P<0.05或P<0.01）。結論：消銀湯對銀屑病具有治療作用。

【關鍵詞】銀屑??；消銀湯；腫瘤壞死因子-α；干擾素-γ

銀屑病是一種常見的易復發(fā)的慢性炎癥和增殖性皮膚病，目前該病病因和發(fā)病機理不明，大多數(shù)學者認為銀屑病是一種多基因遺傳背景下的T細胞介導的自身免疫性疾病[1]。消銀湯是筆者的臨床經(jīng)驗方，治療尋常型銀屑病取得了滿意的療效。本實驗利用消銀湯對豚鼠銀屑病樣動物模型進行研究，檢測豚鼠血清中腫瘤壞死因子（TNF）-α和干擾素（IFN）-γ的水平，為臨床應用提供實驗依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 動物

白色豚鼠53只，普通級，體質量為300g～350g，雌雄兼用，由重慶醫(yī)科大學實驗動物中心提供，合格證號：SYXK（渝）2012-0001。

1.2 藥物

消銀湯藥物組成：黃芩10g、生地15g、牡丹皮12g、赤芍15g、半枝蓮30g、白花蛇舌草15g、槐花10g、紫草10g、玄參15g、丹參15g、雞血藤15g和甘草6g。制備方法：稱取各藥材，用水煎煮制備，共煎煮兩次，煎出液合并，濃縮到每劑藥168ml。消銀湯的人體推薦攝入量為168g·d-1生藥，相當于2.8g·kg-1·d-1生藥（成人以60kg計）。

1.3 主要試劑及設備

甲氨蝶呤片（上海信誼藥業(yè)有限公司，批號：20130403），普萘洛爾（山西云鵬制藥有限公司，批號：130801），聚乙烯吡咯烷酮，氮酮（國藥集團化學制劑有限公司，批號：20131115，20131030），豚鼠TNF-α，IFN-γELISA試劑盒（武漢博士德生物工程有限公司，批號：201311），光學顯微鏡（日本奧林巴斯公司），LP-400酶標儀（法國巴斯德公司）。

1.4 消銀湯對豚鼠銀屑病樣模型血清中TNF-α、IFN-γ含量的影響

鹽酸普萘洛爾搽劑制備方法：取鹽酸普萘洛爾5g，用50%乙醇溶解，加入氮酮5mL作為透皮吸收促進劑，加入聚乙烯吡咯烷酮（PVP-K30）5g為成膜材料，最后補加50%乙醇至100mL，攪拌均勻即得[2]。

取白色豚鼠53只，雌雄兼用，隨機抽取8只作為正常對照組，其余豚鼠用玻棒涂抹普萘洛爾搽劑于兩側耳廓皮膚，用量為0.1mL/cm2，每日兩次，連續(xù)涂抹兩周，制備耳部皮膚銀屑病樣皮損模型（至第2周末，空白組及造模組隨機處死5只豚鼠作耳組織病理學檢查，如出現(xiàn)銀屑病樣病理改變，則提示造模成功）[3]。

將成模豚鼠40只，隨機分為模型組、消銀湯高（26.0g·kg-1）、中（13.0g·kg-1，等于臨床等效劑量）、低（6.5g·kg-1）劑量組、陽性對照組（甲氨蝶呤0.77mg·kg-1，相當于臨床等效劑量），每組8只。各組灌胃給藥，每天兩次，連續(xù)14d，給藥容積為13ml·kg-1。正常組和模型組給予等量的生理鹽水。末次給藥1h后，腹腔注射20%烏拉坦麻醉豚鼠，切開腹部，暴露腹主動脈，采集全血8mL，室溫靜置30min，3000r·min-1離心15min，吸取上清，置于-80℃保存。用ELISA試劑盒檢測血清中細胞因子TNF-α、IFN-γ含量，具體操作嚴格按照說明書進行。

1.5 統(tǒng)計學分析

采用SPSS 13.0軟件進行數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計分析，計量資料以均數(shù)±標準差（■±s）表示，組間比較采用單因素方差分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 消銀湯對豚鼠銀屑病樣模型血清中TNF-α、IFN-γ含量的影響

與空白對照組相比，模型組豚鼠血清中TNF-α、IFN-γ的含量均明顯升高（P<0.01）；與模型組相比，消銀湯各劑量組及甲氨蝶呤組豚鼠血清中TNF-α、IFN-γ的含量均明顯降低（P<0.01）；消銀湯高劑量組與甲氨蝶呤組比較，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05或P<0.01），見表1：

表1 消銀湯對豚鼠銀屑病樣模型血清中TNF-α、IFN-γ含量的影響）（■±s，n=8）

注：與模型組比較aP<0.01；與甲氨蝶呤組比較bP<0.05，cP<0.01.

3 討論

銀屑病是一種以紅斑鱗屑為主的慢性炎癥性皮膚病，其病因和發(fā)病機制復雜。目前，銀屑病發(fā)病機制主要有遺傳因素、免疫因素、感染因素、內(nèi)分泌因素、神經(jīng)精神因素等[4]。近年來，大量研究表明銀屑病存在著免疫異常，而細胞因子作為免疫調(diào)節(jié)的物質基礎在銀屑病的發(fā)病中起著重要的作用[5]。TNF-α是一種重要的促炎癥性細胞因子，與銀屑病的發(fā)生密切相關，它能夠促進淋巴細胞浸潤，能夠促進朗格漢斯細胞成熟，能夠促進上皮細胞和成纖維細胞的生長[6]。INF-γ在銀屑病中既可導致角質形成細胞異常增生，又可使T細胞進入表皮增殖活化[7]。

本實驗結果顯示，模型組豚鼠血清中TNF-α、IFN-γ的含量明顯高于空白對照組，消銀湯各劑量組對豚鼠血清TNF-α、IFN-γ均有抑制作用，其中消銀湯高劑量組的作用優(yōu)于甲氨蝶呤組，結果提示消銀湯對銀屑病豚鼠模型的治療作用可能與降低血清中TNF-α、IFN-γ的表達水平有關。

【參考文獻】

[1]郝平生.豚鼠銀屑病動物模型組織中TNF-α表達及加味涼血消風散的調(diào)控實驗研究[J].成都中醫(yī)藥大學學報，2011，34（3）：29-31.

[2]李濤，李洪梅，李小芹，等.銀屑平顆粒對豚鼠銀屑病動物模型的影響[J].中國實驗方劑學雜志，2010，16（16）：137-139.

[3]王萍，聶繼紅，孫玉華.雙黃解毒乳膏對銀屑病動物模型作用的實驗研究[J].中成藥，2011，33（7）：1227-1229.

[4]趙辨.中國臨床皮膚病學[M].第1版.南京：江蘇科學技術出版社，2009：1008-1009.

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[6]郝平生.豚鼠銀屑病動物模型組織中TNF-α表達及加味涼血消風散的調(diào)控實驗研究[J].成都中醫(yī)藥大學學報，2011，34（3）：29-31.

[7]胡祥宇，楊文信.血清中腫瘤壞死因子α、干擾素γ及白介素4與尋常型銀屑病中醫(yī)辨證相關性研究[J].西南軍醫(yī)，2015，17（2）：156-158.

[責任編輯：王楠]