丹參單體IH764-3對馬兜鈴酸致人腎小管上皮細胞損害的保護機制研究

胡波　范紅偉　王燕午　馬廣駿

050081　石家莊市，中國人民解放軍白求恩醫(yī)務士官學校內科教研室(胡波),門診部(王燕午);河北省石家莊市第四醫(yī)院(范紅偉);中國人民解放軍第260醫(yī)院醫(yī)教處(馬廣駿)

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·論著·

丹參單體IH764-3對馬兜鈴酸致人腎小管上皮細胞損害的保護機制研究

胡波范紅偉王燕午馬廣駿

050081石家莊市，中國人民解放軍白求恩醫(yī)務士官學校內科教研室(胡波),門診部(王燕午);河北省石家莊市第四醫(yī)院(范紅偉);中國人民解放軍第260醫(yī)院醫(yī)教處(馬廣駿)

【摘要】目的探討丹參單體IH764-3在馬兜鈴酸(aristolochic acid，AA)導致人腎小管上皮細胞系(HK-C)損害中的保護作用及機制。方法以含體積分數0.10胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液培養(yǎng)HK-C細胞72 h。實驗分為3大組(8小組)，AA組在培養(yǎng)液中加入濃度為20 mg/L的AA；觀察組在培養(yǎng)液中加入濃度為20 mg/L的AA和不同濃度丹參單體IH764-3；對照組培養(yǎng)液中不加AA。培養(yǎng)24、48、72 h后，酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)檢測各細胞培養(yǎng)液中轉化生長因子β1(TGF-β1)、纖溶酶原激活物抑制劑1(PAI-1)、基質金屬蛋白酶抑制劑1(TIMP-1)、金屬蛋白酶2(MMP-2)；采用MTT法觀察HK-C細胞活性，實時熒光定量PCR技術檢測凋亡蛋白Caspase-3mRNA的表達情況。結果AA刺激后，誘導TGF-β1、TIMP-1、PAI-1表達增加，MMP-2表達減少(P<0.05)。經丹參單體IH764-3干預后，TGF-β1、TIMP-1、PAI-1表達減少，MMP-2表達增加，其中以IH764-3 80 mg/L效果最佳(P<0.05)。AA組及觀察組較對照組HK-C細胞的活性均受到抑制，細胞的凋亡率增加，Caspase-3mRNA表達增高(P<0.05)。觀察組較AA組細胞活性明顯增高，細胞的凋亡率明顯下降，Caspase-3mRNA表達降低，觀察組中以丹參單體IH764-3 80 mg/L效果最佳(P<0.05)。結論丹參單體IH764-3可明顯提高HK-C細胞抵抗AA導致細胞損傷的能力，保護HK-C細胞，其具體途徑可能與抑制TGF-β1、TIMP-1、PAI-1、Caspase-3mRNA，升高MMP-2的表達而發(fā)揮作用。

【關鍵詞】丹參單體IH764-3；馬兜鈴酸；人腎小管上皮細胞；細胞凋亡

馬兜鈴酸腎病(aristolochic acid nephropathy，AAN)是一類由關木通等含馬兜鈴酸的相關中草藥所造成的急性或慢性腎小管間質性疾病。AAN呈現(xiàn)不可逆性腎功能損害，往往在數月或1～2年內進展到腎功能衰竭。早期研究發(fā)現(xiàn)AAN主要表現(xiàn)為損傷腎小管上皮細胞[1]，近年研究又發(fā)現(xiàn)AA還有致腫瘤、腎毒性和致基因突變等作用，從而引起國內外學者的廣泛關注[2]。腎臟病理研究結果表明，腎小管上皮細胞的細胞凋亡、轉分化、中毒性損傷以及腎間質組織缺血等均可能參與其病變的發(fā)生、發(fā)展過程[3]。馬兜鈴酸(aristolochic acid，AA)對腎小管上皮細胞的損傷可導致多種細胞因子，如轉化生長因子β1(TGF-β1)、基質金屬蛋白酶抑制劑1(TIMP-1)、纖溶酶原激活物抑制劑1(PAI-1)合成增加，導致MMP-2合成減少，這些因子的平衡失調又促進了腎間質纖維化的形成。丹參單體IH764-3可以降低體外培養(yǎng)的腎小管上皮細胞的TGF-β1、TIMP-1、PAI-1等因子表達，從而對腎小管細胞毒性具有一定的拮抗保護作用，減少細胞凋亡，其具體途徑可能是通過降低Caspase-3mRNA的表達而發(fā)揮作用。本研究通過檢測相關指標的蛋白及基因水平表達的變化，觀察丹參單體IH764-3對AA誘導的人腎小管上皮細胞系(HK-C)損傷的保護作用，進一步闡明丹參單體IH764-3在延緩腎間質纖維化中的作用機制及探索其最佳的藥物濃度，為丹參單體IH764-3的臨床應用提供理論依據。

1材料與方法

1.1材料人腎小管上皮細胞HK-C細胞購自中國醫(yī)學科學院基礎醫(yī)學研究所細胞資源中心。主要試劑AA、胰酶(Sigma公司)，丹參單體IH764-3(天津血液研究所)，MTT(Amresco公司)，總RNA提取試劑盒(Takara)，逆轉錄試劑盒和PCR試劑盒(Fermentas中國公司)，胎牛血清(Gibico公司)，DMEM-HamsF-12培養(yǎng)液(Hyclone公司)，二甲基亞砜(DMSO)。

1.2實驗方法

1.2.1細胞培養(yǎng)及分組:HK-C細胞培養(yǎng)條件為37℃、含體積分數0.05的CO2、濕度100%，DMEM-HamsF-12中(培養(yǎng)液含10%胎牛血清及10 g/L青霉素+鏈霉素)，實驗前24 h更換無血清培養(yǎng)液。實驗共分3大組(8小組)，對照組在細胞培養(yǎng)液中不加AA；AA組和觀察組均在培養(yǎng)液中加入濃度20 mg/L的AA；觀察組在培養(yǎng)液中除了加入濃度為20 mg/L的AA外，還要加入丹參單體IH764-3(終濃度分別為5 mg/L、10 mg/L、20 mg/L、40 mg/L、80 mg/L、160 mg/L)。每組設5個復孔，各組血清濃度一致。孵育24、48、72 h后分別收集培養(yǎng)液，72 h時收集所培養(yǎng)的細胞，每個實驗均反復驗證3次。

1.2.2觀察腎小管上皮細胞大體形態(tài):可見腎小管上皮細胞呈鵝卵石形狀緊密排列，細胞核位于細胞中央且深染。

1.2.3計算各組細胞因子水平：以上3大組(8小組)細胞分別于培養(yǎng)24、48、72 h后，吸取培養(yǎng)液200 μl，離心后取上清液，操作按試劑盒說明書，采用ELISA 法檢測TGF-B1、TIMP-1、PAI-1 和MMP-2等指標。按照標準曲線計算各組細胞因子水平。

1.2.4MTT法檢測細胞活性:培養(yǎng)液200 μl(含HK-C細胞3×104個)加入96孔板中，置于5%的CO2、37℃溫箱孵育，至細胞融合至80%以上時，更換無血清培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)24 h。AA組及觀察組分別加入濃度20 mg/L的AA和不同濃度的丹參單體IH764-3，每組設3個復孔。置于上述實驗條件的溫箱孵育48 h，分別置于倒置顯微鏡下觀察。于實驗終止前4 h，每孔加入5 g/L MTT 溶液20 μl，繼續(xù)培養(yǎng)4 h。終止培養(yǎng)時棄去孔內培養(yǎng)液。每孔加入DMSO 150 μl，置搖床上低速振蕩10 min，充分溶解結晶物。應用酶聯(lián)免疫檢測儀于波長485 nm處測量各孔的吸光度(A)值。

1.2.5實時熒光定量PCR技術檢測Caspase-3基因的表達:取5×106個細胞，加入Trizol提取液1 ml，按其說明書提供的操作步驟提取HK-C細胞的總RNA。取5 μl提取的總RNA，以20 g/L瓊脂糖凝膠電泳分析總RNA的完整性。用紫外線分光光度計檢測總RNA在260 nm和280 nm波長處A值，檢測其純度及濃度。根據逆轉錄試劑盒和RT-PCR試劑盒使用說明進行逆轉錄和PCR擴增反應。引物由寶生物工程大連有限公司設計合成。Caspase-3基因上游引物為5′-GCAAACCTCAGGGAAACATT-3′，下游引物為5′-ACCTGGACAACTGGACTTTT-3′，產物大小為214 bp。β-actin引物合成：上游引物為5′-GCACCGTCAAGGCTGAGAA-3′，下游引物為5′-ATGGTGGTGAAGACGCCAG-3′。PCR反應條件為：94℃預變性5 min、變性30 s，60℃退火1 min，68℃延伸30 s，40個循環(huán)。

2結果

2.1細胞的生長狀況AA組培養(yǎng)48 h后，在倒置顯微鏡下見脫落細胞數量明顯增加，大量細胞懸浮于培養(yǎng)液中，貼壁細胞結構不完整；觀察組培養(yǎng)72 h后，僅部分細胞懸浮于培養(yǎng)液中，尤以丹參單體IH764-3(80 mg/L)組明顯。見圖1。

2.2丹參單體IH764-3對TGF-β1表達的影響經過AA刺激的HK-C細胞24、48、72 h后，AA組TGF-β1水平顯著高于對照組(P<0.05)；觀察組(80 mg/L的丹參單體IH 764-3組)，培養(yǎng)24、48、72 h的TGF-β1水平均顯著低于AA 誘導組( P<0.05)。其中丹參單體IH764-3對TGF-β1的抑制作用表現(xiàn)在濃度80 mg/L 時效果最佳。見表1。

AA組對照組觀察組

圖13組細胞生長狀況(×400)

表1不同濃度丹參單體IH764-3對TGF-β1的影響

組別TGF-β124h48h72h對照組63.80±20.2680.27±38.2970.97±23.23AA組182.51±43.20*286.36±32.27*176.26±40.97*觀察組 5mg/L168.57±33.45*#△246.97±36.35*#△164.82±38.65*#△ 10mg/L154.23±37.89*#△250.56±56.35*#△136.46±33.72*#△ 20mg/L132.64±32.45*#△155.13±30.21*#△124.75±29.47*#△ 40mg/L114.75±29.54*#△105.51±27.85*#△104.72±25.32*#△ 80mg/L98.34±23.46*#96.57±28.67*#80.82±30.26*# 160mg/L116.51±33.04*#△159.23±10.04*#△104.38±15.71*#△

注：與對照組比較，*P<0.05；與AA組比較，#P<0.05；與80 mg/L比較，△P<0.05

2.3丹參單體IH764-3各濃度分對TIPM-1表達的影響AA刺激HK-C細胞24、48、72 h后，AA組TIMP-1水平均顯著高于對照組( P<0.05)，以24 h為最高。細胞培養(yǎng)24、48、72 h各劑量丹參單體IH764-3的TIMP-1水平均顯著低于AA組(P<0.05)。其中丹參單體IH764-3對TIMP-1的抑制作用表現(xiàn)在濃度80 mg/L 時效果最佳。見表2。

表2不同濃度丹參單體IH764-3對TIMP-1的影響

組別TIMP-124h48h72h對照組99.18±28.26102.27±34.09113.47±43.78AA組285.42±53.77*236.47±52.95*217.24±60.37*觀察組 5mg/L255.67±39.52*#△186.24±66.26*#△178.89±34.72*#△ 10mg/L174.32±47.12*#△157.43±47.92*#△175.47±47.86*#△ 20mg/L152.67±35.86*#△146.34±28.54*#△134.36±28.27*#△ 40mg/L135.32±35.53*#△103.56±28.89*#△109.47±42.82*#△ 80mg/L98.64±23.74*#106.43±35.78*#107.56±37.84*# 160mg/L119.67±33.76*#△155.66±32.03*#△114.46±27.85*#△

注：與對照組比較，*P<0.05；與AA組比較，#P<0.05；與80 mg/L比較，△P<0.05

2.4丹參各組分對PAI-1 表達的影響HK-C細胞經AA刺激24、48、72 h后，PAI-1表達水平在AA組顯著高于對照組(P<0.05)，72 h后PAI-1水平開始下降，但仍高于對照組(P<0.05)。各劑量丹參單體IH764-3在不同時間段時的PAI-1水平均較AA組低(P<0.05)，并在24、48、72 h顯示出劑量依賴性。其中丹參單體IH764-3對其表達的抑制作用在濃度80 mg/L 時最佳。見表3。

表3不同濃度丹參單體IH764-3對PAI-1的影響

組別PAI-124h48h72h對照組277.68±78.30298.07±54.45306.38±53.43AA組558.67±43.64*476.75±42.67*417.87±82.73*觀察組 5mg/L475.63±49.83*#△436.66±57.44*#△418.77±94.38*#△ 10mg/L374.67±37.66*#△397.32±66.32*#△405.04±67.58*#△ 20mg/L352.85±65.16*#△346.00±48.11*#△413.55±98.55*#△ 40mg/L335.66±55.78*#△364.23±87.23*#△339.76±62.42*#△ 80mg/L298.74±68.23*#306.63±65.72*#297.25±83.21*# 160mg/L339.83±63.25*#△355.64±82.54*#△348.43±68.35*#△

注：與對照組比較，*P<0.05；與AA組比較，#P<0.05；與80 mg/L比較，△P<0.05

2.5丹參單體IH764-3對MMP-2 表達的影響AA 刺激HK-C細胞24、48、72 h后，AA組MMP-2水平較對照組降低( P<0. 05)；80 mg/L的丹參單體IH764-3組，培養(yǎng)24、48、72 h的MMP-2水平均顯著高于AA 誘導組(P<0.05)。其中丹參單體IH764-3對MMP-2的促進作用表現(xiàn)在濃度80 mg/L時效果最佳。見表4。

表4不同濃度的丹參單體IH764-3對MMP-2的影響

注：與對照組比較，*P<0.05；與AA組比較，#P<0.05；與80 mg/L比較，△P<0.05

2.6Caspase-3mRNA表達AA組及觀察組與對照組比較，Caspase-3mRNA表達明顯增高，但與AA組比較，觀察組Caspase-3mRNA表達均有所降低(P<0.05)，觀察組中不同劑量間比較，以丹參單體IH764-3(80 mg/L)組降低最明顯(P<0.05)。見圖2。

M12345678

圖2Caspase-3mRNA表達

注:M代表內參,1代表對照組,2代表AA組，3～8代表觀察組的5～160 mg計量組

3討論

1993年比利時Vanherweghem“首次”發(fā)現(xiàn)并提出Chinese Herbs Nephropathy(CHN，中草藥腎病)。隨后全世界間或有此類事件報道，引起了國內外中醫(yī)藥和腎臟病學術界的廣泛關注。中草藥腎病的病理表現(xiàn)主要為長期服用中草藥引起腎間質慢性纖維化，由此導致腎小球硬化，而出現(xiàn)慢性腎功能衰竭的腎病理改變。因中藥慢性腎毒性臨床發(fā)病隱匿，腎損害時間較長，一旦出現(xiàn)臨床癥狀，病變多復雜且腎損害不易恢復。據不完全數字統(tǒng)計，截止至2011年12月，我國44%的慢性腎功能衰竭由糖尿病腎病引起，并最終導致尿毒癥[4]。目前我們針對糖尿病腎病的治療，沒有有效的根治方法，需要長期聯(lián)合服用降糖藥物或注射胰島素加中草藥物控制癥狀，這些藥物長期應用，勢必會造成一些不可避免的腎臟損傷，一旦出現(xiàn)腎臟損傷，如何及時有效的防止藥物導致的腎臟損傷就成為臨床亟待解決的問題。我們發(fā)現(xiàn)AA所致的腎臟損害病理特點非常具有代表性，大劑量、長時間使用還有AA類藥物，會導致腎小管萎縮、間質纖維化發(fā)生，由于肌體的代償機制啟動了腎小管非適應性再生修復。非適應性再生修復主要以腎間質細胞增殖和纖維化為主，最終的結果會導致腎間質、腎小管、腎小球纖維化，進而發(fā)展到腎衰竭。

腎小球基底膜和ECM主要是由膠原、纖維連接蛋白(FN)、層粘連蛋白(LN)和蛋白多糖構成，在膠原成分中，最重要的是Ⅳ型膠原[5]?；|金屬蛋白酶(MMPs)是主要的ECM降解酶。在正常情況下，MMPs和TIMPs是調節(jié)ECM的重要的調控系統(tǒng)之一，在其作用下ECM 生成和降解保持動態(tài)平衡。體外試驗表明，將鼠腎臟系膜細胞置于高糖介質中培養(yǎng)5 d即有MMPs活性的顯著降低[6]。最近，Mclennan等[7]在DM大鼠模型腎組織中也發(fā)現(xiàn)MMP-2活性降低43%。TIMPs為MMPs家族的天然抑制因子，二者的相對水平對ECM 降解有重要意義。血糖持續(xù)性升高可通過某種機制上調TIMP-1，下調MMP-2表達，破壞MMP-2和TIMP-1的平衡，從而阻礙ECM 降解，導致腎組織結構和功能改變[8]。影響MMPs/TIMPs系統(tǒng)和ECM 降解的另一重要機制是TGF-β表達上調[6]，作為多種代謝和血流動力學因素導致ECM積聚的共同中介，TGF-β被認為是MMPs最重要的調控因子。

我們研究發(fā)現(xiàn)，AA對腎小管上皮細胞的毒性作用表現(xiàn)在可使TGF-β1、TIMP-1、PAI-1等細胞因子分泌增多，使MMP-2分泌減少，上述因子表達的改變可以通過自分泌和旁分泌的方式作用于HK-C細胞和腎臟血管，促使腎小管間質出現(xiàn)纖維化病變并呈現(xiàn)不可逆性進展，最終導致腎衰竭。那么，這些因子是如何相互作用而達到損傷腎臟，導致腎臟纖維化的呢，我們通過進一步研究發(fā)現(xiàn)它們共同的通道和Caspase-3有關。TGF-β1是誘導腎小管上皮細胞、間質成纖維活性增強及轉分化的最關鍵的促纖維化因子，由單核巨噬細胞及活化的腎固有細胞分泌，可參與腎小管間質病變的各個環(huán)節(jié)[9]。TIMP-1可不可逆地抑制MMP的活性，從而抑制ECM的降解，在腎臟病變及纖維化過程中發(fā)揮重要作用。PA I-1 可通過抑制纖溶酶原的活化從而抑制纖維蛋白的降解。本研究結果顯示：與對照組比較，AA組TGF-β1、TIMP-1、PAI-1表達增高，MMP-2表達減少。與AA組比較，觀察組TGF-β1、TIMP-1、PAI-1表達下降，MMP-2表達增高，尤其以80 mg/L劑量組更加明顯(P<0.05)。本研究初步探討了丹參單體IH764-3對AA所致的腎小管上皮細胞損傷的保護作用，結果表明，一定濃度的丹參單體IH764-3(80 mg/L)可通過降低TGF-β1、TIMP-1、PAI-1的表達，增加MMP-2的表達而減少細胞外基質堆積，阻止腎小管纖維化。

Caspase-3處于細胞凋亡的共同路徑上，是細胞凋亡的關鍵執(zhí)行者之一。本實驗通過采用RT-PCR技術檢測各組細胞中Caspase-3mRNA的表達情況，結果表明：對照組和觀察組與AA組比較，Caspase-3mRNA表達及細胞凋亡率均降低，觀察組與對照組比較，Caspase-3mRNA表達及細胞凋亡率亦有明顯降低，其中尤其以80 mg/L劑量組更加明顯(P<0.05)。本研究揭示了丹參單體IH764-3對AA所致的腎小管上皮細胞損傷的影響，結果表明，一定濃度的丹參單體IH764-3(80 mg/L)可通過抑制細胞的凋亡而保護被AA損傷的腎小管上皮細胞，其具體途徑可能與通過抑制Caspase-3基因表達而發(fā)揮作用。

丹參作為傳統(tǒng)的活血化瘀最具代表性的藥物已廣泛應用于臨床多年。傳統(tǒng)醫(yī)學把丹參奉為上品，認為丹參具有“活血調經，祛瘀止痛，涼血消癰，清心除煩，養(yǎng)血安神”等功效，王巍巍等[10]研究發(fā)現(xiàn)丹參在改善AA引起的腎損傷及抗腎纖維化方面具有多重藥理作用, 如抗炎、抗脂質過氧化、抑制細胞增殖、減少膠原合成等,通過多靶點來發(fā)揮腎保護作用。孫雪峰等[11]研究亦證實丹參能增加腎血流、有利尿和抗炎作用，可降低血Bun、Scr，調節(jié)腎組織局部微循環(huán)，改善腎功能，同時具有輕度抑制凝血系統(tǒng)與增強纖溶活性作用，降低血小板粘附和纖維蛋白原，從而保護腎功能。丹參單體(IH764-3)是由中國醫(yī)學科學院血液病研究所從丹參中分離提取的一種有效單體(相對分子質量為158)，它在抑制膠原蛋白合成、沉積及抗纖維化方面有顯著的藥理活性，還能明顯抑制成纖維細胞和活化的貯脂細胞增殖[12,13]，可通過下調H2O2刺激肝星狀細胞FAK水平影響MMP213和TIMP21的表達[14]來抑制肝星狀細胞增殖并可促進其凋亡[15]。丹參單體IH 764-3在抑制纖維細胞增殖，減少膠原及纖維蛋白的合成，從而減緩肺和肝纖維化的形成方面具有顯著的活性。我們前期研究發(fā)現(xiàn)丹參對ECM的降解的有效化學成分與丹參單體IH764-3有非常顯著的相關性。丹參單體IH764-3在降解腎組織細胞外基質方面比丹參有更強的生物活性，其作用機制與調節(jié)TGF-β1、TIMP-1、PAI-1、MMP-2等因子表達，抑制Caspase-3表達而減少腎小管上皮細胞凋亡，從而進一步實現(xiàn)其抗腎小球纖維化的作用。

相關研究顯示，我國糖尿病高危人群約有1.5億，只有8.7%的普通人群清楚地知道糖尿病是腎病的危險因素，糖尿病腎病患者對于自身的疾病知曉率僅為9.4%。糖尿病腎病是糖尿病的主要并發(fā)癥之一[16，17]，約占終末期腎臟病病因的40%～50%[18]。針對上述嚴峻情況，我們認為糖尿病腎病治療的新劑型的研制有廣闊的應用前景。在今后的研究中，我們將進一步研究丹參單體IH764-3在保護腎臟、預防腎纖維化等作用的其他靶點，以闡明其在發(fā)揮腎臟保護方面的作用機制，為臨床開發(fā)治療糖尿病腎病的新劑型提供理論依據。

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The protective effect and action mechanism of Salvia miltiorrhiza monomer-IH764-3 on aristolochic acid induced renal tubular epithelial cell injury

HUBo*,FANHongwei,WANGYanwu,etal.

*DepartmentofInternalMedicine,BethuneMedicalProfessionSergeancySchoolofPLA,Shijiazhuang050081,China

【Abstract】ObjectiveTo investigate the protective effects and action mechanism of Salvia miltiorrhiza monomer-IH764-3 on aristolochic acid(AA) induced renal tubular epithelial cell injury.MethodsThe human renal tubular epithelial cell line-HK-C cells were cultured in DMEM medium with 10% fetal calf serum for 72 hours,which were divided into three large groups (eight small groups):control group,the culture solution without AA；AA group,AA was added into culture solution with final concentration of 20mg/L；observation group,AA and IH764-3 (final concentration of 20mg/L)and different concentrations of Salvia miltiorrhiza monomer-IH764-3.After cultured for 24h, 48h, 72h, the expression levels of transforming growth factor 1 (TGF- β 1),tissue inhibitor of matrix metalloproteinase 1 (TIMP-1), plasminogen activator inhibitor type 1 (PAI-1), matrix metalloproteinase 2 (MMP-2) in culture medium were detected by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) The activity of HK-C cells was measured by MTT assay,and the expression levels of Caspase-3 mRNA were detected by Real-time quantitative PCR.ResultsAfter AA stimulation, the expression levels of TGF- β 1, TIMP-1,PAI-1 were increased, however, the expression levels of MMP-2 were obviously decreased (P<0.05). After intervention by Salvia miltiorrhiza monomer-IH764-3, the expression levels of TGF-β1, TIMP-1 and PAI-1 were decreased, however,the expression levels of MMP-2 were increased, in which the group with IH764-3 80mg/L had the best effects (P<0.05). As compared with that in control group,the activity of HK-C cells in AA group and observation group was decreased, however, cell apoptosis rates were increased,moreover, the expression levels of Caspase-3 mRNA were significantly increased (P<0.05). As compared with that in AA group, the activity of HK-C cells in observation group was obviously increased,however,cell apoptosis rates were decreased, furthermore, the expression levels of Caspase-3 mRNA were significantly decreased (P<0.05),with the best effects in IH764-3 80mg/L group (P<0.05).ConclusionSalvia miltiorrhiza monomer-IH764-3 can obviously enhance the ability of HK-C cells against AA that results in cell damage,thus,which can protect HK-C cells from injury, moreover, its action mechanism may be related with decreasing the expression levels of TGF-β1,TIMP-1,PAI-1 Caspase-3 and increasing the expressions of MMP-2.

【Key words】Salvia miltiorrhiza monomer IH764-3;aristolochic acid;human renal tubular epithelial cell;cell apoptosis

(收稿日期：2015-10-25)

【中圖分類號】R 692.6

【文獻標識碼】A

【文章編號】1002-7386(2016)07-0982-05

doi:10.3969/j.issn.1002-7386.2016.07.006

項目來源：全軍青年培育項目(編號：13QNP187)