試析反相高效液相色譜法分析注射用氨芐西林鈉有關(guān)物質(zhì)

高 波

哈藥集團(tuán)制藥總廠 黑龍江哈爾濱 150000

試析反相高效液相色譜法分析注射用氨芐西林鈉有關(guān)物質(zhì)

高 波

哈藥集團(tuán)制藥總廠 黑龍江哈爾濱 150000

目的：利用反相高效液相色譜法進(jìn)行注射用氨芐西林鈉有關(guān)物質(zhì)的進(jìn)行測(cè)定，并且對(duì)相關(guān)的物質(zhì)進(jìn)行分析。方法：使用的是UltimateTMXBC18(5μm，4.6mm×250mm)色譜柱，流動(dòng)相A是12%的醋酸溶液．2mol／L磷酸二氫鉀溶液一乙腈一水，比例分別是0.5：50：50：900，流動(dòng)相相B是12%的醋酸溶液-0.2mol／L磷酸二氫鉀溶液一乙腈-水，比例分別是0.5：50：400：550，穩(wěn)住必須要達(dá)到35℃，從流速上來(lái)看，需要達(dá)到1.0ml/min，色譜法檢測(cè)的波長(zhǎng)是254nm。結(jié)果：注射用氨芐西林的相關(guān)物質(zhì)能夠分離，氨芐西林閉環(huán)二聚物、氨芐西林開環(huán)二聚物和L-氨芐西林在主峰上的保留時(shí)間分別是3.5、2.8、0.7倍處出峰。結(jié)論：對(duì)注射用氨芐西林鈉的三種雜質(zhì)峰位進(jìn)行定位。

反相高效液相色譜法；注射用氨芐西林鈉；物質(zhì)測(cè)定

氨芐西林在臨床上使用的是極為廣泛的，這是一種抗生素，這種抗生素屬于 B-內(nèi)酰胺類，有著貯存不穩(wěn)定的特點(diǎn)，尤其是水溶液，非常不穩(wěn)定，在使用的過程匯總是極容易出現(xiàn)損壞和變質(zhì)的。臨床使用氨芐西林的過程中，如果產(chǎn)生了免疫，主要是由于在生產(chǎn)和貯存的過程中產(chǎn)生了高分子聚合物等引起的，因此要對(duì)聚合物雜志進(jìn)行科學(xué)的定位，除此之外，還要進(jìn)行限量的檢測(cè)。在實(shí)驗(yàn)的過程中，需要根據(jù)規(guī)定使用2.8倍主要成分在保留時(shí)間處的雜質(zhì)峰是不明顯的。在本次實(shí)驗(yàn)中，對(duì)梯度洗脫的方法進(jìn)行了不斷的完善。使用三根不同品牌的色譜柱對(duì)雜質(zhì)峰進(jìn)行確定，利用科學(xué)的實(shí)驗(yàn)方式對(duì)產(chǎn)品的質(zhì)量提供依據(jù)。

一、儀器和試劑

使用的是島津的高效液相色譜儀，具體包括Lc-solution工作站、SPD-M20ADAD檢測(cè)器和SPD-M20A工作泵,乙腈使用的是色譜純，氨芐西林的對(duì)照品在含量是86.5%和注射用氨芐西林鈉，在實(shí)驗(yàn)的過程中，按照規(guī)格進(jìn)行具體的確定。

二、方法和結(jié)果

（一）色譜條件

從色譜條件上來(lái)看，使用的填充劑是十八烷基硅烷鍵合硅膠，檢測(cè)的波長(zhǎng)是254nm，溶液的流速是1.0ml/min，使用的是進(jìn)樣量是20μ，流動(dòng)相A是為12%醋酸溶液-0.2mol／L磷酸二氫鉀溶液．乙腈．水，比例是0.5：50：50：900；流動(dòng)相B是12 %醋酸溶液-0.2mol／L磷酸二氫鉀溶液一乙腈．水，比例是0.5：50：400：550，在整個(gè)過程中使用的是梯度洗脫法，具體的情況如表1所示，tR指的是氨芐西林的出峰時(shí)間。

表1 梯度洗脫表

（二）溶液的配制

從溶液的配制上來(lái)看，相關(guān)的物質(zhì)的供試品溶液在配制的過程中如下：要取本品，使用的是流動(dòng)相A進(jìn)行溶解，還要將流動(dòng)相A進(jìn)行稀釋，這樣能夠制成3mg/ml的氨芐西林溶液。有關(guān)物質(zhì)的對(duì)照品溶液配制的要求如下：要精密的量取相應(yīng)的供試品溶液大約1ml,將這些溶液放置在量瓶中，量瓶的容積是100ml，需要使用流動(dòng)相A對(duì)有關(guān)物質(zhì)對(duì)照品溶液稀釋到相應(yīng)的刻度?？瞻纵o料溶液在配制的過程中，必須要按照處方比例使用流動(dòng)相A進(jìn)行配制，主要是用來(lái)配制主藥的空白輔料溶液，在配制的過程中，一定要注意配制比例，否則就不會(huì)起到相應(yīng)的效果。在二聚物樣品溶液配制的過程中，一定要取本品大約 0.2g，之后向里加水1.0ml，這樣就可以使樣品快速的溶解，在溶解之后，還要放入水浴中進(jìn)行加熱處理，水溫必須要保持在60攝氏度左右，加熱的時(shí)間是1h，量取0.5ml的溶液，將這些溶液放置在50ml的量瓶中，最后加流動(dòng)相A稀釋，稀釋到相應(yīng)的刻度。在進(jìn)行含量測(cè)定溶液配制的過程中，需要使用流動(dòng)相A進(jìn)行供試品溶液的配制，對(duì)含氨芐西林為1mg/ml的溶液進(jìn)行配制，對(duì)照品溶液在配置的過程中也是如此。

（三）專屬性的實(shí)驗(yàn)

在進(jìn)行專屬性實(shí)驗(yàn)的過程中，必須要分別量取溶液配置中的空白輔料溶液、含量測(cè)定溶液、有關(guān)物質(zhì)供試品溶液，之后按照色譜條件充分的進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，對(duì)色譜圖全面的記錄，結(jié)果表明，空白輔料對(duì)主藥與有關(guān)物質(zhì)檢測(cè)沒有任何干擾。具體的情況如圖1所示：

圖1：空白輔料（A）、對(duì)照品（B）和有關(guān)物質(zhì)供試品（C）的色譜圖

（四）雜質(zhì)峰的定位

分別取有關(guān)物質(zhì)供試品溶液、二聚物樣品溶液在2.1色譜條件下進(jìn)樣，采用三根不同品牌色譜柱進(jìn)行試驗(yàn)，測(cè)定結(jié)果見表2。

表2：各雜質(zhì)與主成分相對(duì)保留時(shí)間比值

（五）進(jìn)樣精密度

取氨芐西林對(duì)照品溶液(約1mSm1)，／連續(xù)進(jìn)樣6次，峰面積的RSD為0．92%。

（六）穩(wěn)定性考察取氨芐西林對(duì)照品溶液(約1mg／m1)，分別在配制后0、2、4、6、8h進(jìn)樣測(cè)定，5次測(cè)定峰面積的RSD為1．02%，表明氨芐西林溶液在8h內(nèi)穩(wěn)定。

（七）含量及有關(guān)物質(zhì)測(cè)定

取有關(guān)物質(zhì)供試品溶液、有關(guān)物質(zhì)對(duì)照品溶液及含量測(cè)定溶液分別進(jìn)樣，在色譜條件測(cè)定并計(jì)算含量及有關(guān)物質(zhì)，測(cè)定結(jié)果見表3。

表3：樣品含量及有關(guān)物質(zhì)測(cè)定結(jié)果表

三、討論

（一）雜質(zhì)峰定位

對(duì)氨芐西林中可能存在的22種雜質(zhì)分別定位，本實(shí)驗(yàn)與文獻(xiàn)在相同色譜條件下操作，測(cè)定不同廠家多批樣品，采用與文獻(xiàn)比較相對(duì)保留時(shí)間的方法，確定三種雜質(zhì)峰位：L．氨芐西林、氨芐西林開環(huán)二聚物、氨芐西林閉環(huán)二聚物分別在相對(duì)主峰保留時(shí)間0.7、2.8、3.5倍處出峰。

（二）聚合物結(jié)構(gòu)分析氨芐西林鈉聚合物(二聚物及多聚物)有兩種結(jié)構(gòu)，見圖2。一種為開環(huán)二聚物，另一種為閉環(huán)二聚物。中國(guó)藥典規(guī)定2．8倍氨芐西林保留時(shí)間處為二聚物峰]，而未注明是開環(huán)還是閉環(huán)二聚物。本實(shí)驗(yàn)測(cè)定6批樣品加熱后均在3.5倍處峰面積明顯增加，而在2.8倍處二聚物峰不明顯，表明加熱后主要形成閉環(huán)二聚物。

（三）實(shí)驗(yàn)方法

參考中國(guó)藥典及其他文獻(xiàn)基礎(chǔ)上，改進(jìn)實(shí)驗(yàn)方法，洗脫結(jié)束后設(shè)置在初始比例平衡20min，基線更平穩(wěn)，主峰保留時(shí)間漂移少。本實(shí)驗(yàn)方法能洗脫并良好分離生產(chǎn)及貯存所產(chǎn)生的有關(guān)物質(zhì)，但測(cè)定費(fèi)時(shí)較長(zhǎng)。

（四）注射用氨芐西林鈉雜質(zhì)比例分析

對(duì)本實(shí)驗(yàn)6批樣品中各單個(gè)雜質(zhì)占總雜質(zhì)比例進(jìn)行分析其中聚合物占總雜質(zhì)約75%，L-氨芐西林占總雜質(zhì)8%左右。生產(chǎn)中可針對(duì)性減少聚合物及 L-氨芐西林雜質(zhì)產(chǎn)生，能較好提高產(chǎn)品質(zhì)量。

[1]鞠朋舉,宋繼紅.高效液相色譜法測(cè)定氨芐西林膠囊的含量[J].黑龍江科技信息.2010(04)

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1672-5018（2016）10-024-02