某規(guī)?；i場(chǎng)血清學(xué)檢測(cè)結(jié)果分析

徐 丹，張 迪，吳婷婷，徐秀彬

(1.江蘇省太倉(cāng)市城廂動(dòng)物防疫站，江蘇 蘇州 215414；2.江蘇省太倉(cāng)市瀏河動(dòng)物防疫站，江蘇 蘇州 215431；3.安佑生物科技集團(tuán)股份有限公司，江蘇 蘇州2154371）

某規(guī)模化豬場(chǎng)血清學(xué)檢測(cè)結(jié)果分析

徐 丹1，張 迪2，吳婷婷3，徐秀彬3

(1.江蘇省太倉(cāng)市城廂動(dòng)物防疫站，江蘇 蘇州 215414；2.江蘇省太倉(cāng)市瀏河動(dòng)物防疫站，江蘇 蘇州 215431；3.安佑生物科技集團(tuán)股份有限公司，江蘇 蘇州2154371）

血清學(xué)檢測(cè)，是豬場(chǎng)最廣泛使用的檢測(cè)方法之一。本案例中，筆者對(duì)江蘇某豬場(chǎng)送檢的193份血清樣進(jìn)行了豬瘟抗體、豬偽狂犬gB/gE抗體、豬圓環(huán)病毒抗體、豬藍(lán)耳病毒抗體的檢測(cè)和分析。結(jié)果顯示該場(chǎng)后備母豬豬瘟免疫欠佳，豬偽狂犬病免疫不合格，豬藍(lán)耳病抗體水平偏高；母豬豬偽狂犬病毒感染程度較高，豬呼吸與繁殖綜合征普遍感染且抗體偏高；公豬豬圓環(huán)病毒抗體水平偏高；商品豬豬瘟免疫效果不穩(wěn)定；豬藍(lán)耳病感染比較普遍，且部分豬群抗體水平偏高，豬圓環(huán)病毒病免疫欠佳。結(jié)合該場(chǎng)免疫程序，表明該場(chǎng)后備母豬和商品豬的豬瘟、豬偽狂犬病免疫程序需要做適當(dāng)調(diào)整；同時(shí)考慮通過(guò)測(cè)序了解本場(chǎng)的豬藍(lán)耳病流行毒株，以確定合適的防控方案。

檢測(cè)；抗體；豬瘟；豬偽狂犬；豬藍(lán)耳??；豬圓環(huán)病毒2型

隨著我國(guó)生豬養(yǎng)殖業(yè)逐漸規(guī)?；a(chǎn)業(yè)化，系統(tǒng)而有效的疫病防控方案是豬場(chǎng)維持正常生產(chǎn)的重要一環(huán)。越來(lái)越多的養(yǎng)殖戶期望通過(guò)血清學(xué)檢測(cè)了解本場(chǎng)疫病的感染程度、免疫計(jì)劃是否有效果。豬瘟、豬偽狂犬病、豬呼吸與繁殖綜合征（以下簡(jiǎn)稱豬藍(lán)耳病）和豬圓環(huán)病毒病作為當(dāng)前危害養(yǎng)豬生產(chǎn)的重大傳染病，嚴(yán)重影響著規(guī)模化豬場(chǎng)豬群健康，也是豬場(chǎng)疫病監(jiān)控的重要對(duì)象。筆者就某規(guī)?；i場(chǎng)送檢的193份血清進(jìn)行了以上4種疾病抗體的檢測(cè)，并結(jié)合豬場(chǎng)實(shí)際情況，對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行了詳實(shí)的分析與討論?，F(xiàn)整理如下：

1 材料和方法

1.1 送檢材料及免疫背景

2015年11月，江蘇某規(guī)模豬場(chǎng)（存欄2 000頭母豬）采集193份血清送檢。樣本信息如表2、表3（N值）所示，其中胎次1～8胎母豬均為懷孕50～84 d的妊娠母豬；后備母豬為配種前采樣。血樣經(jīng)冷鏈運(yùn)輸?shù)竭_(dá)實(shí)驗(yàn)室，少數(shù)嚴(yán)重溶血樣本丟棄。送檢豬場(chǎng)提供的免疫計(jì)劃如表1所示。

1.2 主要試劑和儀器

豬瘟抗體、豬偽狂犬gB抗體、豬偽狂犬gE抗體檢測(cè)試劑盒購(gòu)自美國(guó)IDEXX公司。豬圓環(huán)病毒2型抗體和豬藍(lán)耳病毒抗體檢測(cè)試劑盒購(gòu)自荷蘭BioChek公司。本檢測(cè)所用ELx800光吸收酶標(biāo)儀購(gòu)自美國(guó)BioTek公司，不同規(guī)格移液器購(gòu)自瑞士SOCOREX公司。

1.3 方法

將送檢血清按照IDEXX試劑盒說(shuō)明書要求進(jìn)行豬瘟抗體、豬偽狂犬gB抗體、豬偽狂犬gE抗體檢測(cè)。同時(shí)，按照BioChek試劑盒說(shuō)明書要求，對(duì)所有血清進(jìn)行豬圓環(huán)病毒2型（PCV2）、豬藍(lán)耳病毒抗體檢測(cè)。

1.4 數(shù)據(jù)分析

按照抗體檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行結(jié)果判定，當(dāng)樣本豬瘟抗體阻斷率≥40%時(shí)，視為豬瘟抗體陽(yáng)性；當(dāng)樣本偽狂犬gB抗體的S/N值≤0.6時(shí)視為陽(yáng)性；當(dāng)樣本偽狂犬gE抗體的S/N值≤0.6時(shí)視為野毒抗體陽(yáng)性，暗示存在野毒感染；當(dāng)樣本藍(lán)耳抗體滴度值≥1 071時(shí)視為陽(yáng)性；當(dāng)樣本PCV2抗體滴度值≥1 071時(shí)視為陽(yáng)性。

采用Xchek數(shù)據(jù)分析軟件（IDEXX公 司 ）、BioChek數(shù) 據(jù) 分 析 軟 件（BioChek公司）進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和導(dǎo)出，部分圖表采用Excel繪制。193份血清檢測(cè)結(jié)果統(tǒng)計(jì)如表2、表3所示。其中阻斷率%代表該組群豬瘟抗體阻斷率的平均值。平均值（S/N或titer）代表了該組群檢出S/N或titer的平均值。CV值代表了變異系數(shù)，可反映該群體的個(gè)體差異程度。

2 結(jié)果與分析

2.1 豬瘟病毒抗體檢測(cè)分析

表1 江蘇某規(guī)模豬場(chǎng)免疫程序

如表2所示，后備母豬的陽(yáng)性率最低（76.0%）、阻斷率最低（55.4%）、個(gè)體差異最大（CV值39.8%）。其他種豬群豬瘟抗體陽(yáng)性率在93.3%～100%之間，阻斷率在68.1%～78.3%之間，CV值在12.2～20.2%之間。商品豬陽(yáng)性率在53.3%～100%之間，阻斷率在44.4%～66.4%之間，CV值在16.5～48.8%范圍內(nèi)。2～18周抗體呈現(xiàn)似“W”型趨勢(shì)，其中6周齡、16周齡阻斷率均＜50%，是“W”型的谷值（圖1）。

2.2 豬偽狂犬病毒抗體檢測(cè)分析

后備母豬群gB抗體陽(yáng)性率最低（56.0%），其他種豬群gB抗體陽(yáng)性率在90.0%以上。后備母豬和公豬未檢出gE野毒抗體，1胎次到6～8胎次的gE野毒抗體檢出率在10.0%～46.7%之間，其中3～5胎次豬群野毒陽(yáng)性率最高（46.7%）。

商品豬2～8周的gB抗體陽(yáng)性率均在100%，16～18周陽(yáng)性率在71.4%～75.0%之間。僅有2、6、8周齡豬只檢出gE野毒抗體，陽(yáng)性率分別是14.3%、40.0%、3.2%（表3）。

表2 種豬群檢測(cè)結(jié)果統(tǒng)計(jì)表

表3 商品豬群檢測(cè)結(jié)果統(tǒng)計(jì)表

商品豬陽(yáng)性率在0～100%之間，抗體滴度在56～7 180之間，CV值在46.2%～227.0%范圍內(nèi)。2～18周抗體呈現(xiàn)先下降后升高的“V”型走勢(shì)。其中8周齡出現(xiàn)谷值，陽(yáng)性率為0%（表3、圖1）。

2.4 豬圓環(huán)病毒抗體檢測(cè)分析

如表2所示，該場(chǎng)種豬群PCV2抗體陽(yáng)性率均為100%，抗體平均值 在7 621～10 271之 間， CV值 在9.1%～22.8%之間；公豬群的抗體滴度最高。

如表3所示，商品豬陽(yáng)性率在74.2%～100%之間，抗體滴度在 3 143～ 9 077之 間，CV值 在18.0%～72.3%之間。其中8周齡豬只陽(yáng)性率和抗體滴度最低，CV值最高。6周、8周、16周的個(gè)體差異（CV值）均＞30%。

3 討論

3.1 豬瘟抗體檢測(cè)

圖1 商品豬4種疾病抗體陽(yáng)性率齡變化趨勢(shì)圖（2～18周）

2.3 豬藍(lán)耳病毒抗體檢測(cè)分析

種豬藍(lán)耳抗體陽(yáng)性率在90.0%～ 100%之 間， 抗 體 滴 度在 4 179～ 11 637之 間，CV值 在43.5%～66.7%之間。其中后備母豬和6～8胎次母豬群抗體滴度超過(guò)10 000。

該場(chǎng)公豬群、1～8胎次的母豬群均表現(xiàn)個(gè)體差異小（CV值≤21.8%），群體高陽(yáng)性率（≥93.3%），暗示疫苗免疫情況總體表現(xiàn)良好。后備母豬免疫欠佳（陽(yáng)性率76.0%）需綜合分析。1胎次（配種后50～84 d）階段數(shù)值較理想，暗示可能后備母豬尚處于抗體揚(yáng)升階段。但也不能排除該群體可能存在的免疫抑制（如感染藍(lán)耳病毒）或免疫計(jì)劃執(zhí)行不當(dāng)?shù)囊蛩亍＝ㄗh養(yǎng)殖場(chǎng)間隔一月后監(jiān)測(cè)該批次后備母豬抗體變化，以進(jìn)一步分析原因。

商品豬2～18周抗體檢測(cè)結(jié)果呈現(xiàn)波動(dòng)趨勢(shì)，似不規(guī)則“w”型，非理想免疫豬場(chǎng)的血清學(xué)表現(xiàn)。4周齡作為首免時(shí)間，其陽(yáng)性率仍保持93.33%，阻斷率平均值在65%，暗示此時(shí)仔豬尚有較理想的保護(hù)力，首免受母源抗體影響較大。16周抗體陽(yáng)性率僅68.8%，而18周陽(yáng)性率100%，2個(gè)監(jiān)測(cè)點(diǎn)僅間隔2周，且均為免疫后8周以上，但抗體差異較大，暗示該場(chǎng)批次間存在不穩(wěn)定因素。此現(xiàn)象可能與首免時(shí)間不理想有關(guān)，建議可嘗試適當(dāng)延后首免時(shí)間。此外，該場(chǎng)保育育肥豬高比例的藍(lán)耳感染（100%陽(yáng)性），也可能是導(dǎo)致免疫不佳的重要因素。

3.2 豬偽狂犬抗體檢測(cè)

后備母豬在配種前偽狂犬免疫不合格(陽(yáng)性率56.0%)，存在感染風(fēng)險(xiǎn)，建議盡速補(bǔ)免，并檢查免疫失敗的原因。1～2胎次出現(xiàn)不同比例的偽狂犬野毒感染，可能與后備母豬配種前疫苗免疫轉(zhuǎn)陽(yáng)率不理想有關(guān)。3～5胎次是該場(chǎng)種豬群野毒感染的高峰群體，建議該場(chǎng)繼續(xù)采用優(yōu)質(zhì)疫苗定期補(bǔ)免母豬，以減少排毒量和排毒時(shí)間；加速母豬的淘汰率，并選用未感染野毒并且免疫過(guò)偽狂犬的后備母豬替換，可有效降低種豬群野毒感染比例。同時(shí)落實(shí)仔豬的滴鼻，切斷傳播途徑。

以往報(bào)告指出，不免疫偽狂犬疫苗的仔豬，其母源抗體可殘留到10周齡左右[1]。因該場(chǎng)母豬群存在野毒感染，故10周齡以前的商品豬檢測(cè)出的gE抗體無(wú)法明確是野毒感染產(chǎn)生，還是母源抗體殘留。gB抗體在16～18周陽(yáng)性率僅略高于70%，但未檢出gE野毒抗體暗示野毒在商品豬的感染得到一定程度的控制。鑒于目前國(guó)內(nèi)已出現(xiàn)偽狂犬變異株[2]，豬場(chǎng)有必要將免疫后育肥豬和后備母豬的抗體轉(zhuǎn)陽(yáng)率提升至90%以上，以增強(qiáng)豬場(chǎng)的保護(hù)力?；?、8周齡gB抗體的表現(xiàn)，該場(chǎng)實(shí)行5、8周免疫時(shí)，均有較大程度的母源抗體干擾。理想的首免時(shí)間需要另行采樣檢測(cè)確定。

3.3 豬藍(lán)耳抗體檢測(cè)

對(duì)于不免疫藍(lán)耳疫苗的藍(lán)耳抗體陽(yáng)性場(chǎng)，需要豬場(chǎng)首先了解自身的感染程度，再?zèng)Q定實(shí)行何種防控方案。該場(chǎng)藍(lán)耳抗體呈現(xiàn)高陽(yáng)性率和高抗體滴度，暗示野毒在場(chǎng)內(nèi)可能表現(xiàn)活躍，并存在野毒循環(huán)感染的風(fēng)險(xiǎn)。僅通過(guò)抗體檢測(cè)無(wú)法得知該場(chǎng)的毒株類型，通過(guò)基因測(cè)序了解該場(chǎng)的流行毒株對(duì)日后的防控有積極的意義。

該場(chǎng)后備母豬和6～8胎次表現(xiàn)高抗體滴度，建議在后備母豬配種前核實(shí)是否還存在排毒的情況，以減少對(duì)母豬繁殖性能的影響。于日后引種而言，確保選擇藍(lán)耳陰性后備母豬進(jìn)行本場(chǎng)馴化，并預(yù)留充足的排毒時(shí)間（3～4月）是保障種豬群穩(wěn)定的可靠方案。2～18周豬只抗體表現(xiàn)于保育期陽(yáng)性率先下降到0.0%，再上升到育肥期的100%陽(yáng)性，暗示該場(chǎng)保育后期到育肥前期是藍(lán)耳病毒感染活躍階段。

3.4 豬圓環(huán)抗體檢測(cè)

該場(chǎng)母豬6月底曾普免疫圓環(huán)疫苗，9月之后取消了種豬群的免疫計(jì)劃。圓環(huán)疫苗的免疫期通常持續(xù)4個(gè)月左右，檢測(cè)時(shí)間為母豬群普免后5個(gè)月，陽(yáng)性率仍然100%，平均值也尚在較高滴度（7 621～8 266），暗示環(huán)境中可能存在野毒維持了種豬群的高陽(yáng)性率和高抗體滴度。但種豬群個(gè)體差異小，族群已趨于穩(wěn)定。公豬的抗體滴度值普遍偏高（＞10 000），可能存在臨床感染癥狀，需盡快改善公豬健康狀況以保障種豬精液質(zhì)量。

哺乳仔豬2周齡表現(xiàn)高陽(yáng)性率和高抗體滴度，該場(chǎng)于此時(shí)首免受母源抗體影響較大。保育到育肥，豬只陽(yáng)性率逐漸上升到100%，平均滴度3 143～7 216之間，存在一定的個(gè)體差異。該場(chǎng)需結(jié)合現(xiàn)場(chǎng)，密切關(guān)注8周齡批次豬群（個(gè)體差異大，豬群不穩(wěn)定）的臨床表現(xiàn)。

4 小結(jié)

當(dāng)前規(guī)?；i場(chǎng)所用的免疫評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)并不統(tǒng)一，給養(yǎng)殖戶進(jìn)行免疫效果評(píng)估和疫病感染情況調(diào)查帶來(lái)了困擾。《2013年國(guó)家動(dòng)物疫病強(qiáng)制免疫計(jì)劃》中僅提供了口蹄疫、豬瘟和豬藍(lán)耳病的免疫評(píng)估方案。該標(biāo)準(zhǔn)涉及2方面內(nèi)容：采樣時(shí)間點(diǎn)：（免疫后3～4周）；評(píng)估標(biāo)準(zhǔn)（存欄豬免疫抗體合格率≥70%視為合格）[3]。就采樣時(shí)間點(diǎn)而言，結(jié)合豬場(chǎng)生產(chǎn)流程，后備母豬的理想監(jiān)控時(shí)間應(yīng)為最后一次免疫4周之后，配種之前進(jìn)行。建議豬場(chǎng)對(duì)所有待配后備母豬進(jìn)行檢測(cè)，防止已感染或免疫不合格的后備母豬進(jìn)入生產(chǎn)群，保障群體穩(wěn)定[4]。對(duì)于保育豬階段因進(jìn)行了豬瘟和豬偽狂犬的2次免疫，不適于評(píng)估這兩種疫苗的免疫效果，可于該疫苗免疫完成后4～6周采樣評(píng)估，或于100 d采樣評(píng)估四種疾病的免疫狀態(tài)[4]。而8～10周齡可作為評(píng)估豬藍(lán)耳和圓環(huán)免疫/感染的參考時(shí)間[4]。

就評(píng)估標(biāo)準(zhǔn)而言，免疫抗體合格率≥70%是對(duì)所有存欄豬的評(píng)估，若以該標(biāo)準(zhǔn)評(píng)估各群組，存在一定局限性。以母豬為例，若多次加強(qiáng)免疫后的轉(zhuǎn)陽(yáng)率仍然只有70%，產(chǎn)房階段則會(huì)有30%仔豬母乳抗體不足而失去保護(hù)力。對(duì)于對(duì)疾病抵抗力弱的仔豬而言，顯然這個(gè)保護(hù)力是不能滿足生產(chǎn)需求的。故對(duì)于種豬而言，免疫后陽(yáng)性率＞90%會(huì)是更加合適的參考指標(biāo)。對(duì)于商品豬而言，因存在各種應(yīng)激（轉(zhuǎn)群、環(huán)境不良、免疫等）和免疫不利因素（母源抗體殘留、免疫抑制等），建議規(guī)?；i場(chǎng)將標(biāo)準(zhǔn)設(shè)定為免疫后陽(yáng)性率＞80%。對(duì)于種豬場(chǎng)，該標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)與種豬標(biāo)準(zhǔn)一致（＞90%），甚至更高，才能滿足市場(chǎng)對(duì)健康種豬的需求。

本次規(guī)?；i場(chǎng)的血清學(xué)檢測(cè)中，可窺見(jiàn)部分豬群的免疫計(jì)劃并未達(dá)到理想成績(jī)，將豬場(chǎng)存在的漏洞顯現(xiàn)出來(lái)，為該場(chǎng)免疫程序的完善、疫病防控體系建設(shè)提供了可靠的數(shù)據(jù)和執(zhí)行的方向。本文對(duì)檢測(cè)數(shù)據(jù)進(jìn)行的分析與探討，期望對(duì)讀者有所啟發(fā)，能夠進(jìn)一步正確地使用檢測(cè)手段，以達(dá)到了解豬場(chǎng)重大疫病感染情況和免疫效果的目的，盡快實(shí)現(xiàn)養(yǎng)殖場(chǎng)疫病整體防控體系建設(shè)。

[1] 孫華偉，趙永前， 茅愛(ài)華，等. 不同日齡豬偽狂犬抗體的檢測(cè)與分析[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)， 2015(10)：262-263.

[2] GU Z， HOU C， SUN H， et al.Emergence of highly virulent pseudorabies virus in southern China.[J]. Canadian journal of veterinary research = Revue canadienne de rechercheveterinaire，2015，79(3)：221-228.

[3] 農(nóng)業(yè)部.2013年國(guó)家動(dòng)物疫病強(qiáng)制免疫計(jì)劃[Z].農(nóng)醫(yī)發(fā)〔2013〕8號(hào).

[4] 郭林，李志堅(jiān)，劉昱.規(guī)模化豬場(chǎng)流行病學(xué)調(diào)查概述與采樣指南[J].豬業(yè)科學(xué)，2015，32(12)：130-131.

2016-06-22）

徐丹（1987-），男，江蘇省蘇州人，獸醫(yī)師，主要從事動(dòng)物疫病防疫工作。

張迪（1987-），女，貴州省貴陽(yáng)人，臨床獸醫(yī)學(xué)碩士，主要從事動(dòng)物血清學(xué)檢測(cè)服務(wù)工作。