應(yīng)用自繁病毒復(fù)合性誘劑防治夜蛾的新技術(shù)

盧會(huì)祥吳中波鄒繼生俞 懿楊銀娟黃釗貞李惠明*

（1上海星輝蔬菜有限公司，上海 201419；2上海市農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣服務(wù)中心，上海 201103；3上海市奉賢區(qū)蔬菜技術(shù)推廣站，上海 201400）

應(yīng)用自繁病毒復(fù)合性誘劑防治夜蛾的新技術(shù)

盧會(huì)祥1吳中波1鄒繼生1俞 懿2楊銀娟3黃釗貞2李惠明2*

（1上海星輝蔬菜有限公司，上海 201419；2上海市農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣服務(wù)中心，上海 201103；3上海市奉賢區(qū)蔬菜技術(shù)推廣站，上海 201400）

在人工飼養(yǎng)甜菜夜蛾、斜紋夜蛾3、4齡期的幼蟲食料上，噴施致病力強(qiáng)的核型多角體病毒商品制劑稀釋液，其幼蟲染毒后制備出F2的新鮮活體病毒液，再?gòu)?fù)合高效性誘劑在田間應(yīng)用，能達(dá)到降低田間害蟲密度的作用，防治大蔥、甘藍(lán)田兩種夜蛾的效果分別穩(wěn)定在70%、78%以上，可成為優(yōu)質(zhì)綠色蔬菜的安全配套技術(shù)。

光明食品集團(tuán)下屬的上海星輝蔬菜有限公司是上海市主要出口蔬菜生產(chǎn)基地之一，常年種植十字花科蔬菜和大蔥的面積有1 300 hm2（1.95萬畝）。甜菜夜蛾（Spodoptera exigua）和斜紋夜蛾（Spodoptera litura）是這兩類蔬菜的重要害蟲，常年發(fā)生量大、危害重，長(zhǎng)期化學(xué)防治導(dǎo)致其抗藥性強(qiáng)，是造成農(nóng)藥使用過量的主要害蟲種群（李惠明和潘月華，1995；李惠明 等，2011）。而且兩種夜蛾在大蔥上是鉆蛀性為害，從卵孵化到幼蟲蛀入蔥葉只需1 d（天）左右，一旦蛀入蔥葉（管）內(nèi)，就會(huì)導(dǎo)致化學(xué)防治失效，在發(fā)生嚴(yán)重時(shí)即使多次用藥，還經(jīng)常造成蔥田一片枯白。因此解決兩種夜蛾的危害是出口蔬菜主要的植保防治工作。

兩種夜蛾的生物防治常用核型多角體病毒或白僵菌，只對(duì)初齡幼蟲效果好，并常受到紫外線等環(huán)境影響而失去活性，防治效果不夠理想。近10 a（年）來也開始引用性誘技術(shù)，探索高效性誘劑，通過誘殺更多雄成蟲，減少田間雌蟲的交配率控制幼蟲量。但由于雄蟲具有多次交配習(xí)性，通常誘殺田間雄成蟲數(shù)量達(dá)到95%以上才有一定的控制效果，誘引效果低于85%不僅近于無效，可能還會(huì)吸引周邊的蟲源增加危害；還需要每2 d（天）清理一次誘捕器內(nèi)被誘殺的死蟲（陳志貴 等，2010；李惠明 等，2010a，2010b）。2005～2007年引進(jìn)了“夜蛾桿狀病毒流行機(jī)理研究”成果，即夜蛾的核型多角體病毒可以通過上代害蟲（成蟲）感染的病毒傳到子代而致死，降低子代蟲口密度（蔣杰賢 等，2011）。結(jié)合應(yīng)用性誘劑與核型多角體病毒的新技術(shù)，治理兩種夜蛾效果較好（李惠明 等，2010c）。最近2 a（年）在先前采用商品病毒制劑的基礎(chǔ)上再次開發(fā)出應(yīng)用活蟲飼養(yǎng)、獲取活體強(qiáng)致病的病毒與配制病毒液配方的更新，讓誘捕和傳毒的能力得到加強(qiáng)，取得了防治應(yīng)用上新的突破。

1 核型多角體病毒源的制備

收集斜紋夜蛾、甜菜夜蛾卵塊，帶回室內(nèi)用甘藍(lán)葉盆飼養(yǎng)數(shù)批次，當(dāng)幼蟲生長(zhǎng)發(fā)育至3～4齡期時(shí)，將200億PIB·g-1斜紋夜蛾、甜菜夜蛾核型多角體病毒水分散粒劑（NPV制劑，中國(guó)科學(xué)院動(dòng)物研究所河南濟(jì)源基地產(chǎn)品）3 000倍液，或10億PIB·mL-1苜蓿銀紋夜蛾核型多角體病毒懸浮劑（奧綠1號(hào)商品制劑，安徽績(jī)溪縣慶豐天鷹生化有限公司產(chǎn)品）400倍液，噴灑在飼養(yǎng)幼蟲的葉片上，晾干后再喂養(yǎng)幼蟲，使其感染病毒，至5齡挑選蟲體發(fā)黑的幼蟲作為活體多角體病毒源。視蟲體大小、黑色深淺程度調(diào)節(jié)，選用病毒蟲體質(zhì)量10～12 g，將蟲體粉碎后稀釋成1 kg高濃度病毒液（為一組標(biāo)準(zhǔn)配液，一次使用，根據(jù)需要常配制多組，如飼養(yǎng)還有多余的病毒蟲體保存在冰箱中冷藏備用）。在病毒液中加5%的蜂蜜、芥子油1 g（或用油菜籽10 g研磨，代替芥子油，利于引誘成蟲補(bǔ)充營(yíng)養(yǎng)）、100 mg的VE 1粒、苯甲酸鈉（防腐）2 g。每5～6 d（天）在誘殺盆中噴（更換）1次，補(bǔ)充新病毒液。

2 病毒引誘盆的制作與病毒液的添加

提前備好甜菜夜蛾、斜紋夜蛾高效性誘劑，為PVC毛細(xì)管誘芯，以及可懸掛式專用性誘的綠色誘集盆（浙江寧波紐康生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品）。在誘集盆底中央倒扣放，1只小的塑料（網(wǎng)格型）圓盤型洗菜籃（市售），在儲(chǔ)水盆內(nèi)墊高，防止盆內(nèi)加水保濕時(shí)病毒液被水稀釋，減少加水的次數(shù)與用工。上面放1層直徑15～18 cm 、厚0.5 cm的吸水泡沫海綿（市購(gòu)），再取2層直徑18～20 cm的圓形脫脂棉紗布蓋在泡沫海綿上，棉紗布能沿塑料圓盤型洗菜籃掛到盆底，引水保濕；在誘集盆內(nèi)注水至1.5～2.5 cm高，一般比塑料籃的高度略低0.5 cm，用手持小噴霧器往脫脂棉紗布上噴病毒液10～15 mL。在誘捕器放置誘芯部位，分別插入甜菜夜蛾誘芯、斜紋夜蛾誘芯各1根，2種誘芯不可同時(shí)放在一個(gè)誘捕器內(nèi)，再將引誘盆分別掛在田間誘集位置。誘盆上面有蓋，以防雨、防曬，保持病毒液的濃度與活性（圖1）。當(dāng)天氣干燥、高溫蒸發(fā)量大時(shí)，需要防止誘盆內(nèi)缺水，可視盆內(nèi)水量每隔2～3 d（天）補(bǔ)充1次清水。保持吸毒棉紗布有一定的濕潤(rùn)度，一般每5～6 d（天）補(bǔ)充噴1次病毒液，直到誘引防治結(jié)束。

圖1 病毒引誘盆

3 病毒引誘盆密度與高度的設(shè)置

每1 300～2 000 m2菜田設(shè)甜菜夜蛾、斜紋夜蛾誘芯各1只的成蟲誘集盆，每30～40 d（天）更換1次誘芯。掛在試驗(yàn)示范田內(nèi)，引誘夜蛾雄蟲取食并感染病毒，再飛到田間擴(kuò)大傳播。誘盆要固定好，比蔬菜作物略高20～30 cm，同種誘芯的誘盆間隔距離為35～45 m，不同種類的誘芯之間相隔距離不得少于10 m，以防止性誘劑間的干擾。在試驗(yàn)范圍內(nèi)，外圍區(qū)域放置引誘盆的密度要略高一些，中心區(qū)域可略稀一點(diǎn)。

4 核型多角體病毒與性誘劑復(fù)合生物治理的控害效果

田間試驗(yàn)設(shè)在上海星輝蔬菜有限公司的種植基地，連片面積600 hm2（9 000畝），常年以種植日本大蔥和春秋季結(jié)球甘藍(lán)為主。于8～10月兩種夜蛾害蟲盛發(fā)期內(nèi)進(jìn)行，從甜菜夜蛾、斜紋夜蛾3代發(fā)生初期或蔬菜移栽時(shí)開始，至一茬蔬菜采收基本結(jié)束或蟲情發(fā)生末期為止。設(shè)置不同調(diào)查日期以減輕調(diào)查日的工作量，便于保質(zhì)保量地按時(shí)完成精準(zhǔn)的調(diào)查。各示范區(qū)與化學(xué)防治區(qū)均進(jìn)行使用農(nóng)藥次數(shù)與防治成本的記錄與成本核算。

4.1 對(duì)甘藍(lán)和大蔥田甜菜夜蛾、斜紋夜蛾的殺卵效果 不區(qū)分甜菜夜蛾和斜紋夜蛾，從放盤后20、25、30 d（天）共取樣3次，分設(shè)甘藍(lán)、大蔥兩種作物，設(shè)試驗(yàn)區(qū)、對(duì)照區(qū)（對(duì)照區(qū)選遠(yuǎn)離示范區(qū)1 000 m以上的同類田塊，不用藥劑防治）。每5 d（天）1次，同期隨機(jī)采集示范區(qū)3塊田、對(duì)照區(qū)1塊田的兩種夜蛾卵塊各15～30塊，連續(xù)3次。將每次調(diào)查取樣的卵塊在室內(nèi)分別用130 mm見方的塑料培養(yǎng)皿飼養(yǎng)，每個(gè)卵塊單獨(dú)保濕飼養(yǎng)至孵化后第5天（為孵化后方便觀察，用無毒甘藍(lán)葉飼養(yǎng)），記錄示范區(qū)的卵塊孵化，單個(gè)卵塊幼蟲殘存數(shù)少于5頭為防治有效，最后對(duì)比防治效果。

結(jié)果表明，甘藍(lán)田和大蔥田應(yīng)用核型多角體病毒與性誘劑復(fù)合治理甜菜夜蛾、斜紋夜蛾，其殺卵效果與對(duì)照相比均達(dá)到極顯著差異，平均防治效果分別為72.75%和84.21%。通常情況下，對(duì)照區(qū)內(nèi)的卵塊孵化率要高于調(diào)查數(shù)據(jù)，因其臨近防治區(qū)，兩種夜蛾的飛翔能力強(qiáng)，染毒蟲源可能擴(kuò)散到了對(duì)照區(qū)，因此實(shí)際對(duì)卵的防效應(yīng)該還略高；而在大蔥上的滅卵效果優(yōu)于甘藍(lán)，與甜菜夜蛾更嗜好在大蔥上產(chǎn)卵有關(guān)。

4.2 對(duì)甘藍(lán)和大蔥田甜菜夜蛾、斜紋夜蛾幼蟲的防治效果

4.2.1 對(duì)甘藍(lán)田兩種夜蛾幼蟲防治效果 甘藍(lán)田間蟲口密度調(diào)查不區(qū)分甜菜夜蛾、斜紋夜蛾，設(shè)示范區(qū)、化學(xué)防治區(qū)、對(duì)照區(qū)?；瘜W(xué)防治區(qū)、對(duì)照區(qū)選遠(yuǎn)離示范區(qū)1 000 m以上的同類田塊，以不用藥防治的作為對(duì)照區(qū)，其余的作為化學(xué)防治區(qū)調(diào)查。從放盤后22、27、32 d（天）共調(diào)查3次，同期隨機(jī)調(diào)查示范區(qū)3塊田、化學(xué)防治區(qū)1塊田、對(duì)照區(qū)1塊田的兩種夜蛾發(fā)生量，每塊田采用五點(diǎn)取樣法，每點(diǎn)10株，共50株，調(diào)查有蟲株率、總蟲口數(shù)，最后統(tǒng)計(jì)分析試驗(yàn)全期的蟲口，對(duì)比防治效果。

試驗(yàn)結(jié)果顯示，應(yīng)用核型多角體病毒與性誘劑復(fù)合治理甜菜夜蛾、斜紋夜蛾幼蟲，示范區(qū)防治效果為77.15%～80.00%，極顯著高于化學(xué)防治區(qū)（62.66%）。

4.2.2 對(duì)大蔥田2種夜蛾幼蟲防治效果 大蔥田間蟲口密度調(diào)查不區(qū)分甜菜夜蛾、斜紋夜蛾，設(shè)示范區(qū)、化學(xué)防治區(qū)、對(duì)照區(qū)調(diào)查（化學(xué)防治同甘藍(lán)田）。從放盤后24、29、34 d（天）共調(diào)查3次，同期隨機(jī)調(diào)查染毒區(qū)3塊田、化學(xué)防治區(qū)1塊田、對(duì)照區(qū)1塊田的兩種夜蛾發(fā)生量，每塊田用五點(diǎn)取樣法，每點(diǎn)查20根蔥管，共100根蔥管，調(diào)查有蟲蔥管率、總蟲口數(shù)，最后統(tǒng)計(jì)分析試驗(yàn)全期的蟲口，對(duì)比防治效果。試驗(yàn)結(jié)果表明，對(duì)照區(qū)幼蟲蟲口密度最高，化學(xué)防治區(qū)次之，示范區(qū)最低。應(yīng)用核型多角體病毒與性誘劑復(fù)合治理甜菜夜蛾、斜紋夜蛾幼蟲的平均防治效果為71.88%，明顯高于化學(xué)防治區(qū)（38.12%）；應(yīng)用核型多角體病毒與性誘劑復(fù)合治理，在大蔥田的后期防治效果低于甘藍(lán)，可能與幼蟲蛀入蔥管內(nèi)危害后，殘存的幼蟲避開了當(dāng)?shù)夭妒承院ｘB等天敵的控害作用有關(guān)。

4.3 生物治蟲新技術(shù)與化學(xué)防治對(duì)大蔥上2種害蟲防效差別的原因 甜菜夜蛾、斜紋夜蛾在大蔥上具鉆蛀危害習(xí)性，初孵幼蟲經(jīng)1～2 d（天）取食發(fā)育后即可蛀入蔥管內(nèi)取食葉肉、排泄糞便污染寄主?；瘜W(xué)農(nóng)藥防治必須在幼蟲孵化后、蛀入蔥管前才有效，因此化學(xué)防治效果通常較差，且必須保持7～10 d（天）用藥1次。而應(yīng)用核型多角體病毒與性誘劑復(fù)合治理的生物治蟲新技術(shù)，初孵幼蟲感染病毒后死亡率高，即使有的幼蟲蛀入蔥管，但體內(nèi)的病毒增殖，仍可使幼蟲感病而死在蔥管內(nèi)，因此生物治蟲新技術(shù)防治效果優(yōu)于化學(xué)防治。

5 應(yīng)用生物治蟲新技術(shù)與常規(guī)性誘防治法的比較與控害優(yōu)勢(shì)

常規(guī)應(yīng)用性誘劑防治害蟲，是將成蟲誘集到誘捕器內(nèi)淹死或悶死。由于這2種夜蛾都具有很強(qiáng)的飛翔能力和多次交配的習(xí)性，最多1頭雄蟲可與6～7頭雌蟲交配，因此只有將田間的雄蟲誘殺95%以上才可起到控制蟲口密度的作用。而應(yīng)用生物治蟲新技術(shù)，是將田間的大量雄成蟲誘集到含高濃度病毒液的水盆內(nèi)使其感染病毒，在病毒液中添加蜂蜜有利于成蟲補(bǔ)充營(yíng)養(yǎng)、延長(zhǎng)壽命和提高生活力，與田間的健康雄蛾?duì)帄Z與雌蟲的交配權(quán)，提高傳毒效率，同時(shí)也會(huì)吸引雌成蟲到誘盆內(nèi)補(bǔ)充營(yíng)養(yǎng)而染毒，并讓帶毒雌成蟲尋找最適寄主以傳播病毒、產(chǎn)卵，雌成蟲產(chǎn)下的卵、卵殼、復(fù)蓋卵塊的絨毛上都感染病毒，使初孵幼蟲咬食卵殼時(shí)即可受到病毒侵染而死亡（圖2、3）。

圖2 病毒復(fù)合性誘致初孵幼蟲全部死亡

圖3 病毒復(fù)合性誘試驗(yàn)中無效卵塊

6 生物治蟲新技術(shù)對(duì)應(yīng)用面積的限制縮小，增效顯著

多年來在應(yīng)用性誘劑防治甜菜夜蛾、斜紋夜蛾的過程中發(fā)現(xiàn)，性誘控制區(qū)域面積越大，效果越好；而面積越小則受周邊補(bǔ)充蟲源的影響，防治效果遞減直至無效，甚至出現(xiàn)蟲口密度增加的現(xiàn)象。應(yīng)用生物治蟲新技術(shù)后，會(huì)使較小區(qū)域內(nèi)感染病毒的雄成蟲比例增大，提高了與雌成蟲的交配幾率，使卵塊的帶毒率增加，從而減少田間蟲口密度。在上海市奉賢區(qū)甘藍(lán)上設(shè)的小面積應(yīng)用示范2 600 m2中，只設(shè)4個(gè)誘殺盆（甜菜夜蛾、斜紋夜蛾各2個(gè)），調(diào)查結(jié)果表明，生物治蟲新技術(shù)對(duì)幼蟲的防治效果達(dá)80%以上，卵塊下降率達(dá)到90%。

7 生物治蟲新技術(shù)防治成本低

根據(jù)斜紋夜蛾和甜菜夜蛾在上海郊區(qū)的發(fā)生危害規(guī)律，按秋茬主要蔬菜作物2個(gè)月的防治期計(jì)算，生物治蟲新技術(shù)中每667 m2所用性誘劑的成本為15元，飼養(yǎng)獲取活體多角體病毒的成本為2元，蜂蜜與紗布、誘捕器〔按3 a（年）折舊計(jì)算〕6.5元，合計(jì)24.5元。在降低田間蟲口密度基礎(chǔ)上，再使用1～2次化學(xué)農(nóng)藥防治其他害蟲，兼治殘留的甜菜夜蛾、斜紋夜蛾，即可有效控制其危害。同比常規(guī)化學(xué)防治區(qū)，大蔥可減少農(nóng)藥使用6次，甘藍(lán)可減少4次，化學(xué)農(nóng)藥用藥量下降60%～75%。以每667 m2每次防治成本減少20元計(jì)，平均減少5次，每667 m2減少防治成本約100元，同時(shí)節(jié)省人工費(fèi)30元，合計(jì)每667 m2節(jié)約成本130元。光明食品集團(tuán)上海星輝蔬菜有限公司每年生產(chǎn)大蔥、秋甘藍(lán)面積達(dá)1 333.3 hm2（2萬畝），通過該項(xiàng)生物治蟲新技術(shù)投入，每年減少成本約260萬元。

8 小結(jié)

核型多角體病毒復(fù)合性誘劑治理兩種夜蛾的新技術(shù)，將兩項(xiàng)生物防治技術(shù)揚(yáng)長(zhǎng)避短、有機(jī)結(jié)合在一起，可以對(duì)整個(gè)害蟲種群起到良好的控制和致弱作用，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)害蟲的可持續(xù)控制。

① 改變了性誘技術(shù)的殺蟲機(jī)理，更具可操作性。常規(guī)應(yīng)用性誘劑單一誘殺雄蟲，使田間的雌雄性比嚴(yán)重失調(diào)；而應(yīng)用生物治蟲新技術(shù)是將性誘劑變?yōu)閭鞫镜恼T集媒介，不再是誘殺，保證了田間雌雄比例的生態(tài)平衡，并通過讓帶毒雄成蟲與殘存的無毒雄成蟲爭(zhēng)奪與雌成蟲交配的幾率，提高感染病毒的無效卵數(shù)量，從而達(dá)到降低田間有效卵量和幼蟲密度的防治效果。此外，單用性誘劑防治2種夜蛾，每2 d（天）要進(jìn)行清理誘捕的蟲殘?bào)w、換袋等操作，如大面積應(yīng)用則用工量大，比較繁瑣。應(yīng)用本項(xiàng)生物防治新技術(shù)，無需收蟲，只需一個(gè)清水桶和手持噴霧器、病毒液即可。

② 改變了核型多角體病毒的施用方法，保證自繁純正病毒的新鮮和質(zhì)量。應(yīng)用單一的核型多角體病毒制劑防治害蟲，通常采用噴霧法，需要掌握防治適期、施藥時(shí)間及保證均勻施藥質(zhì)量等。而本項(xiàng)生物防治新技術(shù)是利用害蟲的生活習(xí)性，使核型多角體病毒在靶標(biāo)害蟲種群內(nèi)流行傳播，將害蟲種群控制在經(jīng)濟(jì)允許水平之下。應(yīng)用該技術(shù)可配制高濃度病毒液，提高殺蟲活性，避免了商品制劑中的添加劑對(duì)帶毒成蟲壽命的影響；病毒液中添加了芥子油、蜂蜜和VE后，不僅增加了對(duì)雄成蟲誘引效果，還能吸引部分雌成蟲補(bǔ)充營(yíng)養(yǎng)而染毒，誘殺效果較前幾年的單一應(yīng)用性誘劑的防治效果有明顯提高，同時(shí)田間還因有大量的帶病毒蟲源，可引起田間幼蟲的二次感染，延長(zhǎng)有效防治期。

③ 改進(jìn)了誘盆設(shè)置和病毒液的添加方式，利于核型多角體病毒控害技術(shù)的推廣。該生物治蟲新技術(shù)還進(jìn)行了一些改變，例如用網(wǎng)格籃墊高，添加病毒液是用手動(dòng)小噴霧機(jī)噴在脫脂紗布上，保濕只添加清水，不僅避免了以往更新?lián)Q配好的病毒制劑藥液時(shí)，多次添加藥液量大，費(fèi)工、費(fèi)時(shí)的缺點(diǎn)，而且配制的病毒藥液量減少90%，提高了藥液濃度，增加了復(fù)合性誘劑的生物治理效果的可靠性。該技術(shù)同時(shí)還可以改善單用核型多角體病毒不抗紫外線、持效期短、易被雨水沖刷等缺點(diǎn)，2種夜蛾的卵塊均在較隱蔽的地方，應(yīng)用多角體病毒噴藥時(shí)需要很周到，而用手動(dòng)噴霧機(jī)每天的防治面積只有1 300～2 000 m2，很難保證噴霧質(zhì)量和防治效果。例如，甘藍(lán)蓮座期前多數(shù)葉片基本上貼地生長(zhǎng)，較難將藥劑噴到產(chǎn)卵部位，達(dá)不到最好的防治效果。應(yīng)用生物治蟲新技術(shù)后，一個(gè)勞力1 d（天）的防治面積達(dá)7 hm2（105畝），可提高工效30倍以上，還可減少應(yīng)用多角體病毒的防治用量8～10倍，成本降低近20倍。

當(dāng)然，該項(xiàng)新技術(shù)還需要進(jìn)一步改進(jìn)與提高，有待深入研究的課題很多，如自繁的核型多角體病毒和田間應(yīng)用的病毒液，病毒的有效劑量應(yīng)該量化；靶標(biāo)害蟲染毒、傳播和對(duì)害蟲的致死作用和亞致死作用，應(yīng)進(jìn)一步闡明。

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盧會(huì)祥，高級(jí)農(nóng)藝師，主要從事蔬菜病蟲測(cè)報(bào)與綠色蔬菜安全生產(chǎn)與新技術(shù)示范推廣工作，電話：021-57501595，E-mail：luhx108@163.com *通訊作者：李惠明，推廣研究員，主要從事蔬菜病蟲害的測(cè)報(bào)與綜合治理技術(shù)的研究與開發(fā)工作，E-mail：shzblhm@qq.com

2016-06-07，接受日期：2016-08-05

國(guó)家公益性行業(yè)科研專項(xiàng)中的子專項(xiàng)（9312010Y1125），上海市科委項(xiàng)目（9312014Y0053）

致謝：本文得到中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蔬菜花卉研究所朱國(guó)仁研究員的指導(dǎo)，深表感謝！