北疆地區(qū)豬繁殖與呼吸綜合征病毒抗體的檢測與分析

劉功成　張　倩　屈勇剛楊　蓓　王欣雨　王園園　李新順

（石河子大學(xué)動物科技學(xué)院，新疆石河子832000）

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北疆地區(qū)豬繁殖與呼吸綜合征病毒抗體的檢測與分析

劉功成張倩屈勇剛*楊蓓王欣雨王園園李新順

（石河子大學(xué)動物科技學(xué)院，新疆石河子832000）

摘要：為了解2014—2015年北疆地區(qū)豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）的抗體水平。試驗(yàn)從北疆的石河子、沙灣、瑪納斯、克拉瑪依4個不同區(qū)域的16個規(guī)模豬場采集血液樣品共計(jì)828份，采用間接ELISA法檢測其抗體水平，結(jié)果發(fā)現(xiàn)PRRSV的平均抗體陽性率為75.36%，平均KQ值為58.12。16個豬場抗體陽性率達(dá)到70%以上的占81.25%，各豬場抗體水平差異極顯著（＜0.01）。通過對16個不同規(guī)模豬場的血清學(xué)檢測，表明北疆部分地區(qū)對PRRS的防控水平存在差異，防控力度仍需要繼續(xù)提高。

關(guān)鍵詞：PRRS；ELISA；抗體檢測；陽性率

豬繁殖與呼吸綜合征（Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS）是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)引起的豬的一種繁殖障礙和呼吸系統(tǒng)癥狀的傳染病。其特征為厭食、發(fā)熱，懷孕后期發(fā)生流產(chǎn)，產(chǎn)死胎和木乃伊胎；幼齡仔豬發(fā)生呼吸系統(tǒng)疾病和大量死亡[1]。該病最早于1987年在美國中西部出現(xiàn)，隨后在加拿大、德國、荷蘭、英國、西班牙、比利時(shí)、澳大利亞、日本、菲律賓等國家相繼發(fā)生[1]。近年來，北疆地區(qū)養(yǎng)豬業(yè)發(fā)展勢頭迅猛，給廣大養(yǎng)殖戶帶來巨大利潤的同時(shí)，也給疫病的防控帶來巨大挑戰(zhàn)。又恰逢2014—2015年養(yǎng)豬業(yè)的低迷期，北疆地區(qū)很多豬場相繼出現(xiàn)了一些問題。在調(diào)查中，通過剖檢筆者時(shí)常發(fā)現(xiàn)部分豬場有疑似PRRSV感染的狀況。為此，對北疆地區(qū)規(guī)模化豬場進(jìn)行了PRRSV的抗體檢測，以期了解PRRSV的抗體水平，為該地區(qū)PRRS的防控提供流行病學(xué)數(shù)據(jù)。

1材料與方法

1.1血清樣品

2014—2015年采自北疆部分地區(qū)16個不同規(guī)模豬場（能繁母豬500頭及以上的場5個，301～499頭的場4個，201～300頭的場3個，200頭以下的場4個）各個年齡段豬只的血液828份，其中仔豬、保育豬、后備母豬、經(jīng)產(chǎn)母豬以及種公豬各采集181份、108份、95份、153份和84份。前腔靜脈采血5 mL，靜置析出血清，分離至1.5 mL的EP管中，-20℃保存。

1.2檢測試劑盒和主要儀器

豬藍(lán)耳病毒ELISA抗體檢測試劑盒（購自武漢科前生物制品有限責(zé)任公司，批號：141115）、自動酶標(biāo)儀（購自美國BioTek公司）。

1.3試驗(yàn)方法

1.3.1間接ELISA方法

根據(jù)試劑盒的操作步驟，對待檢血清進(jìn)行1 :40倍稀釋(例如：195 μL樣品稀釋液中加5 μL待檢血清)，同時(shí)洗滌抗原包被板。將稀釋好的血清、陰性對照血清和陽性對照血清各取100 μL加入到洗滌好的抗原包被板中，同時(shí)設(shè)定陰陽對照組，均勻震蕩后，置于37℃溫箱溫浴30分鐘，然后棄去抗原包被板中的液體，對抗原包被板進(jìn)行洗滌。再在每孔中加入羊抗豬酶標(biāo)二抗，置于37℃溫箱溫浴30分鐘，隨后棄掉廢液，再次洗滌，將洗滌好的抗原包被板每孔加入底物A、B，混勻，室溫避光顯色10分鐘。最后，每孔加入終止液。在10分鐘內(nèi)，用酶標(biāo)儀在630 nm波長下對樣品的OD值進(jìn)行測定，根據(jù)OD值的大小，判定血清的抗體水平。

1.3.2結(jié)果判定

KQ=（樣品OD值/陽性對照平均值）×100，若KQ值≥20，判為豬繁殖和呼吸綜合征病毒抗體陽性；若KQ＜20，判為豬繁殖與呼吸綜合征病毒抗體陰性。

1.3.3統(tǒng)計(jì)分析

用Excel、SPSS軟件對試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2結(jié)果

2.1北疆地區(qū)16個規(guī)?；i場PRRSV抗體檢測結(jié)果

A～P 16個不同規(guī)模豬場的PRRSV抗體陽性率范圍在51.41%～100.00%之間；PRRSV平均抗體陽性率為75.36%，離散度均值為64%；運(yùn)用SPSS軟件進(jìn)行單樣本t檢驗(yàn)得出值為0.007，說明16個不同豬場的PRRSV抗體陽性率差異極顯著(＜0.01)，結(jié)果見表1。

表1　16個不同規(guī)模豬場PRRSV的抗體水平及分布

2.2部分豬場不同豬群的PRRSV抗體水平

為了更準(zhǔn)確比較不同豬群的PRRSV抗體水平，筆者對部分豬場的仔豬、保育豬、后備母豬、頭胎母豬、經(jīng)產(chǎn)母豬、種公豬進(jìn)行了分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)16個不同規(guī)模豬場中仔豬、保育豬、后備母豬、經(jīng)產(chǎn)母豬、種公豬的PRRSV的抗體陽性率分別為58.01%（105/181）、62.04%（67/108）、90.53%（86/95）、88.24% （135/153）、79.76%（67/84）；其中仔豬的抗體陽性率最低，后備母豬和經(jīng)產(chǎn)母豬的抗體陽性率最高，結(jié)果見表2。

表2　部分豬場豬群不同構(gòu)成成分的PRRSV抗體陽性率分布情況

3討論

3.1北疆地區(qū)16個不同規(guī)?；i場的PRRSV抗體水平差異較大

北疆地區(qū)16個不同規(guī)?；i場的PRRSV的抗體水平差異極顯著，抗體水平達(dá)到農(nóng)業(yè)部《2012年國家動物疫病強(qiáng)制免疫計(jì)劃》抗體合格率≥70%的規(guī)定[2]的豬場占81.25%，個別豬場的抗體水平較低，免疫水平較差，需要引起足夠的重視。16個豬場的抗體水平離散度均值為66%，個別豬場高達(dá)97%，結(jié)果明顯高于農(nóng)業(yè)部《2012年國家動物疫病強(qiáng)制免疫計(jì)劃》陽性抗體離散度＜40%的規(guī)定[2]，說明該地區(qū)PRRSV的抗體水平分布很不均衡。

3.2豬群不同構(gòu)成成分的PRRSV抗體水平存在差異

不同豬群構(gòu)成的PRRSV抗體水平差異較大，陽性率較低的是仔豬和保育豬，分別為58.01%和62.04%，最高的是后備母豬（90.53%），種公豬的抗體水平為79.76%，需要引起足夠重視。仔豬和保育豬抗體水平較低一方面可能是由于仔豬臨近斷奶時(shí)，母源抗體水平基本降到最低，此時(shí)，如果仔豬沒有及時(shí)接種疫苗，那么仔豬就很容易受到病毒的入侵；另一方面可能是當(dāng)仔豬斷奶后從產(chǎn)房轉(zhuǎn)入保育圈舍，環(huán)境、溫度的改變等都會對仔豬造成一定的應(yīng)激，而應(yīng)激會造成部分仔豬感染發(fā)病。有人認(rèn)為發(fā)生PRRS以后豬群就獲得了免疫，就不會再發(fā)生流產(chǎn)、死胎等危害，所以對陽性豬不再進(jìn)行免疫。因而當(dāng)PRRS暴發(fā)時(shí)，沒有引起足夠的重視，人為造成PRRS的泛濫和蔓延[3]。

總之，通過對北疆地區(qū)豬PRRS抗體水平的檢測和分析，筆者發(fā)現(xiàn)北疆地區(qū)PRRS的抗體水平不容樂觀，仍需要加大對PRRS的防控力度。鑒于我國各地豬群普遍存在PRRS的感染情況，建議相關(guān)從業(yè)人員對該病的流行高度重視，提高飼養(yǎng)管理水平，強(qiáng)化衛(wèi)生消毒意識，提高豬群機(jī)體自身免疫抗體水平，做到防患于未然[4]。而且在豬場日常管理中，要加強(qiáng)對豬場生物安全的防控，提高防疫人員的素質(zhì)，嚴(yán)格按照免疫程序使用疫苗。

參考文獻(xiàn)

[1]陳溥言.獸醫(yī)傳染病學(xué)[M].第5版.北京:中國農(nóng)業(yè)出版社,2006:221-223.

[2]劉志勇,韓慶安,劉乃強(qiáng),等.規(guī)模養(yǎng)豬場主要疫病免疫效果評估模型的建立［J］.中國獸醫(yī)雜志,2011(7):88-90.

[3]蔡雪輝.豬繁殖與呼吸綜合征的綜合防制措施[J].養(yǎng)豬,2002 (3):35-36.

[4]韓雪,蔡林,倪建強(qiáng),等.2009年我國豬群圓環(huán)病毒2型感染情況調(diào)查[J].中國獸醫(yī)學(xué)報(bào),2012,32(7):941-944.

■簡訊

*通訊作者：屈勇剛（1971-），男，陜西渭南人，副教授，主要從事動物傳染病診斷與防治工作，E-mail：quyonggang@shzu.edu.cn

作者簡介：劉功成（1990-），重慶合川人，碩士研究生，主要從事動物傳染病診斷與防治工作

基金項(xiàng)目：新疆石河子市農(nóng)業(yè)科技攻關(guān)項(xiàng)目（2013NY04）

收稿日期：2015-11-04

中圖分類號：S858.28

文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A

文章編號：1673-4645(2016)01-0041-03