Tp7/Treg相關(guān)細(xì)胞因子在腸白塞病發(fā)病機(jī)制中的作用

羅　丹　申　艷　鄒　峻　管劍龍

(復(fù)旦大學(xué)附屬華東醫(yī)院免疫風(fēng)濕科　上?！?00040)

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Tp7/Treg相關(guān)細(xì)胞因子在腸白塞病發(fā)病機(jī)制中的作用

羅丹申艷鄒峻管劍龍△

(復(fù)旦大學(xué)附屬華東醫(yī)院免疫風(fēng)濕科上海200040)

【摘要】目的通過檢測血清Tp7/Treg相關(guān)細(xì)胞因子水平,探討Tp7/Treg在腸白塞病(Behcet′s disease,BD)發(fā)病機(jī)制中的作用。方法參照1987年日本學(xué)者制定的BD診斷標(biāo)準(zhǔn)和2009年韓國學(xué)者提出的腸BD診斷標(biāo)準(zhǔn),共入選腸BD 32例,同時(shí)選擇21例性別、年齡匹配的健康志愿者作為對(duì)照。疾病活動(dòng)度采用2011年韓國學(xué)者制定的腸BD活動(dòng)性評(píng)分系統(tǒng)(DAIBD)。采用ELISA法檢測血清IL-17、IL-23、IL-35和IL-10。應(yīng)用SPSS 17.0軟件統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果與健康人比較,腸BD組Tp7細(xì)胞相關(guān)的IL-17[(581.77±260.37)pg/mL vs.(172.72±33.44)pg/mL,P=0.000]和IL-23[(588.31±192.14)pg/mL vs. (340.84±112.26)pg/mL,P=0.000]水平升高,Treg細(xì)胞相關(guān)的IL-35[(875.86±436.12)pg/mL vs.(183.19±60.84)pg/mL,P=0.000]和IL-10[(463.85±299.96)pg/mL vs.(84.47±51.06)pg/mL,P=0.000]水平升高。IL-17和IL-23水平與患者外周血白細(xì)胞計(jì)數(shù)及DAIBD評(píng)分呈正相關(guān)。結(jié)論Tp7/Treg細(xì)胞可能在腸BD的發(fā)生和發(fā)展過程中發(fā)揮一定作用。

【關(guān)鍵詞】腸白塞??；臨床特征；Th7/Treg細(xì)胞；細(xì)胞因子

*This work was supported by Shanghai Municipality Health System Key Joint Research Project on Important Diseases of the Second Batch (2014ZYJB0010).

白塞病(Behcet′s disease,BD)又稱絲綢之路病,以復(fù)發(fā)性口腔潰瘍、生殖器潰瘍和皮膚紅斑為常見癥狀,可累及眼睛、胃腸道、中樞神經(jīng)、心臟、全身大小血管、關(guān)節(jié)和血液等多個(gè)系統(tǒng)。腸BD是比較常見的一種重癥類型[1-2],臨床表現(xiàn)多種多樣,且缺乏特異的實(shí)驗(yàn)室指標(biāo),致病機(jī)制至今未明。既往研究發(fā)現(xiàn),腸BD常發(fā)生在東亞人群,歐美罕見[2-3],以回盲部單發(fā)、直徑>1 cm的類圓形潰瘍?yōu)橹?也可同時(shí)累及結(jié)腸或十二指腸[4-5]。腸BD早期可出現(xiàn)輕微腹部癥狀,腹痛、腹瀉常見,也可無先兆癥狀,突發(fā)腸出血、腸穿孔或類似闌尾炎急腹癥。本研究總結(jié)腸BD患者臨床資料、檢測血清中Tp7/Treg相關(guān)細(xì)胞因子表達(dá)水平的變化,同時(shí)分析Tp7/Treg相關(guān)細(xì)胞因子與疾病活動(dòng)度和實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)的相關(guān)性,初探Tp7/Treg細(xì)胞在腸BD發(fā)病機(jī)制中的作用。

資 料 和 方 法

病例來源收集復(fù)旦大學(xué)附屬華東醫(yī)院免疫風(fēng)濕科2012年10月至2014年12月住院的430例典型BD患者臨床資料、血清標(biāo)本,從中選擇腸BD 32例,另設(shè)健康志愿者21人作為對(duì)照,性別與年齡相匹配。本研究得到復(fù)旦大學(xué)附屬華東醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn),入選者均簽署知情同意書。

診斷標(biāo)準(zhǔn)BD診斷參照1987年日本學(xué)者制定的BD診斷標(biāo)準(zhǔn)[6]。腸BD病例均行消化道內(nèi)窺鏡檢查,診斷參照Cheon等[7]于2009年提出的標(biāo)準(zhǔn),回腸末端有典型的橢圓形大潰瘍或在小腸或結(jié)直腸有潰瘍或炎癥,且臨床表現(xiàn)達(dá)到BD診斷標(biāo)準(zhǔn)。疾病活動(dòng)度評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)采用2011年Cheon等[8]提出的腸BD活動(dòng)性評(píng)分系統(tǒng)(disease activity index for intestinal BD,DAIBD),評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)包括患者一般狀況、發(fā)熱、腸外癥狀(包括口腔潰瘍、生殖器潰瘍、眼炎、皮膚受損和關(guān)節(jié)炎)、腹痛、腹部包塊、腹部柔韌度、消化系統(tǒng)并發(fā)癥(包括瘺、穿孔、膿腫和梗阻)和稀便次數(shù)。

排除標(biāo)準(zhǔn)排除系統(tǒng)性紅斑狼瘡、其他系統(tǒng)性血管炎等結(jié)締組織病和以其他內(nèi)臟損害為主要表現(xiàn)的BD亞型患者。同時(shí)排除克羅恩病、潰瘍性結(jié)腸炎、腸結(jié)核、應(yīng)激性潰瘍、藥源性潰瘍(糖皮質(zhì)激素或非甾體類抗炎藥)和淋巴瘤等其他疾病。

血清收集與細(xì)胞因子檢測本研究收集腸BD臨床資料的同時(shí)留取血清2 mL,分裝于凍存管,-80 ℃保存?zhèn)溆谩L-17、IL-23、IL-35和IL-10的檢測采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA),試劑盒均購自Bio-Swamp公司,嚴(yán)格按照說明書流程操作。

結(jié)果

臨床資料本研究共納入腸BD32例,男性17例,女性15例,平均年齡(33.8±13.7)歲,平均病程(7.1±6.1)年,32例腸BD均有回盲部潰瘍,其中回盲部單發(fā)潰瘍16例(11例直徑大于1cm),回盲部多發(fā)潰瘍7例,回盲部伴橫結(jié)腸潰瘍6例,回盲部伴全結(jié)腸潰瘍3例(圖1～2)。多數(shù)腸BD患者消化道癥狀輕微,可表現(xiàn)為右下腹麥?zhǔn)宵c(diǎn)壓痛,少數(shù)患者有腹瀉或者糞便常規(guī)潛血陽性,2例以腸穿孔、腸出血為首發(fā)癥狀。

32例腸BD患者中,口腔潰瘍32例(100.0%),生殖器潰瘍26例(81.3%),食管潰瘍1例(3.1%),胃十二指腸潰瘍2例(6.3%),結(jié)節(jié)性紅斑7例(21.88%),多形性紅斑1例(3.13%),假性毛囊炎9例(28.13%),針刺反應(yīng)陽性4例(12.5%),神經(jīng)系統(tǒng)受累2例(6.3%),關(guān)節(jié)炎/關(guān)節(jié)痛10例(31.3%),靜脈血栓1例(3.1%)。所有納入腸BD患者均無葡萄膜炎、視網(wǎng)膜炎,無動(dòng)脈狹窄、動(dòng)脈瘤及心臟瓣膜累及。

實(shí)驗(yàn)室檢查示(表1)：腸BD組與健康對(duì)照組在性別、年齡上的差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。兩組間外周血WBC、Hb、ESR 和CRP的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),而PLT、免疫球蛋白和補(bǔ)體C3的差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

Tp7/Treg相關(guān)細(xì)胞因子檢測與健康人比較,腸BD組患者IL-17、IL-23、IL-35和IL-10表達(dá)均顯著升高(P<0.001,表2)。

相關(guān)性分析將患者外周血WBC、Hb、PLT、ESR和CRP水平以及DAIBD評(píng)分與IL-17、IL-23、IL-35和IL-10水平進(jìn)行相關(guān)性分析(表3)。

表1　腸BD組與健康對(duì)照組一般資料和實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)比較Tab 1　Demographic features and laboratory findings in±s)

表2　腸BD和健康對(duì)照Tp7/Treg相關(guān)細(xì)胞因子比較

表3　Tp7/Treg相關(guān)細(xì)胞因子與化驗(yàn)指標(biāo)和DAIBD評(píng)分相關(guān)性分析

(1)Pearson′s correlation analysis.

討論

腸BD是以消化道損害為主要表現(xiàn)的BD臨床亞型,常發(fā)生回盲部潰瘍,嚴(yán)重患者可出現(xiàn)橫結(jié)腸潰瘍甚至全結(jié)腸的潰瘍[4]。少數(shù)患者以腸穿孔為首發(fā)癥狀,手術(shù)治療后刀口長期不愈合甚至形成吻合口瘺。但腸BD早期臨床表現(xiàn)不典型,容易與炎癥性腸病等混淆。目前有關(guān)腸BD的研究較少,日本曾報(bào)告BD患者腸道累及可達(dá)50%[9-10]。BD發(fā)病可能與HLA-B51、感染及環(huán)境因素相關(guān)[11],但具體機(jī)制尚待進(jìn)一步研究。

Tp7/Treg細(xì)胞在多種自身免疫病中發(fā)揮調(diào)節(jié)作用[12-13],但在BD患者中研究較少[14]。Tp7細(xì)胞產(chǎn)生的IL-17可以使中性粒細(xì)胞聚集,導(dǎo)致炎性反應(yīng)和組織損傷。IL-23則在Tp7細(xì)胞的穩(wěn)定和增殖過程中發(fā)揮著重要作用[15]。Treg細(xì)胞具有免疫負(fù)向調(diào)節(jié)作用,Treg細(xì)胞分泌的IL-35、IL-10和TGF-β等可抑制其他T細(xì)胞活性,介導(dǎo)免疫耐受和免疫自穩(wěn)。Geri等[16]研究發(fā)現(xiàn),BD患者Tp7細(xì)胞明顯增加,而不是既往認(rèn)為的Tp細(xì)胞,提示Tp7/Treg細(xì)胞失衡在BD發(fā)病過程中可能發(fā)揮作用。有研究顯示,環(huán)孢素主要通過抑制IL-17表達(dá)來治療BD,臨床佐證了IL-17在BD發(fā)病過程中的作用[17-18]。Ferrante等[19]發(fā)現(xiàn),腸BD患者的腸潰瘍部位Tp7/Tp細(xì)胞比例降低,推測Tp和Tp7細(xì)胞可能與腸BD有關(guān)。本研究發(fā)現(xiàn),腸BD患者血清IL-17和IL-23水平均高于健康人,腸BD患者IL-17、IL-23水平與外周血WBC、DAIBD評(píng)分呈正相關(guān),提示腸BD患者Tp7細(xì)胞顯著活躍,處于炎性反應(yīng)激活狀態(tài)。目前生物制劑(如TNF-α拮抗劑Infliximab)已用于腸BD的治療,并體現(xiàn)出一定的臨床價(jià)值[20]。Secukinumab是IL-17的單克隆抗體,可選擇性地結(jié)合IL-17A,近期研究提示其可用于治療強(qiáng)直性脊柱炎[21]和中、重度銀屑病[22]。IL-23拮抗劑Guselkumab可抑制Tp7細(xì)胞活性,有效控制銀屑病皮損癥狀[23]。因此,Secukinumab和Guselkumab用于腸BD具有治療前景,有必要進(jìn)行下一步臨床驗(yàn)證。

本研究顯示,與健康人比較,腸BD患者血清Treg相關(guān)細(xì)胞因子IL-10和IL-35過表達(dá),與既往報(bào)道不一致[16],推測可能與該組腸BD病例腸潰瘍均處于活動(dòng)期,Tp7細(xì)胞介導(dǎo)的炎性反應(yīng)劇烈,促使Treg細(xì)胞激活,IL-10、IL-35分泌增加，參與免疫炎癥負(fù)反饋調(diào)節(jié)有關(guān)。本研究結(jié)果初步提示,Tp7/Treg相關(guān)細(xì)胞因子在BD腸道損害過程中可能發(fā)揮一定作用,具體機(jī)制尚有待進(jìn)一步研究。

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The role of Tp7/Treg in the pathogenesis in patients with intestinal Behcet′s disease

LUO Dan, SHEN Yan, ZOU Jun, GUAN Jian-long△

(DepartmentofImmunologyandRheumatology,HuadongHospital,FudanUniversity,Shanghai200040,China)

【Abstract】ObjectiveTo discuss the role of Tp7/Treg in the pathogenesis of intestinal Behcet′s disease (BD) by detecting the expressions of serum Tp7/Treg related cytokines.MethodsAccording to the diagnostic criteria of BD developed by Japaness scholars in 1987 and the diagnostic criteria of intestinal BD developed by korean scholars in 2009,32 patients with intestinal BD were recruited,and 21 healthy volunteers were selected as control.Disease activity was evaluated by DAIBD developed by Korean scholars.Serum IL-17,IL-23,IL-35 and IL-10 were detected using ELISA.SPSS 17.0 software was used to analyze the data.ResultsCompared to healthy control,serum levels of IL-17 [(581.77±260.37) pg/mL vs.(172.72±33.44) pg/mL,P=0.000] and IL-23 [(588.31±192.14) pg/mL vs.(340.84±112.26) pg/mL,P=0.000] were increased in intestinal BD group; Treg related cytokines IL-35 [(875.86±436.12) pg/mL vs.(183.19±60.84) pg/mL,P=0.000] and

IL-10[(463.85±299.96) pg/mLvs.(84.47±51.06) pg/mL,P=0.000] were also overexpressed.The levels of IL-17 and IL-23 were positively correlated with the white blood cell count and DAIBD score.ConclusionsTp7/Treg cells may play a role in the pathogenesis of intestinal BD patients.

【Key words】intestinal BD;clinical characteristics;Tp7/Treg cell;cytokines

(收稿日期:2015-08-14;編輯:段佳)

【中圖分類號(hào)】R597+.9

【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A

doi:10.3969/j.issn.1672-8467.2016.02.005

上海市衛(wèi)生系統(tǒng)第二批重要疾病聯(lián)合攻關(guān)重點(diǎn)項(xiàng)目(2014ZYJB0010)

△Corresponding authorE-mail:guanjianlong@medmail.com.cn