利用改進(jìn)的高效液相色譜法測(cè)定葡萄酒中山梨酸鉀含量

祁新春，楊曉雁（山西戎子酒莊有限公司，山西鄉(xiāng)寧 042100）

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利用改進(jìn)的高效液相色譜法測(cè)定葡萄酒中山梨酸鉀含量

祁新春，楊曉雁
（山西戎子酒莊有限公司，山西鄉(xiāng)寧 042100）

摘 要：通過(guò)對(duì)國(guó)標(biāo)GB/T 23495-2009食品中山梨酸鉀含量方法的改進(jìn)，建立一種簡(jiǎn)單穩(wěn)定性好的方法，用于檢測(cè)葡萄酒中山梨酸鉀含量。結(jié)果表明，山梨酸濃度與液相色譜儀出峰峰面積呈線(xiàn)性回歸，相關(guān)系數(shù)r為0.9998，回收率為91%~115.8%；檢測(cè)葡萄酒樣品時(shí)，RSD為2.08，穩(wěn)定性和重復(fù)性好。

關(guān)鍵詞：山梨酸鉀；高效液相色譜儀；葡萄酒

山梨酸，化學(xué)名為2,4-己二烯酸或2-丙烯基丙烯酸，是一種直鏈不飽和脂肪酸，結(jié)構(gòu)式如圖1所示。可參與人體內(nèi)的正常代謝，同化產(chǎn)生二氧化碳和水，但山梨酸過(guò)量，會(huì)對(duì)人體有害處[1]。由于其具有抑制微生物生長(zhǎng)特性，而且毒性低，被國(guó)際糧農(nóng)組織和衛(wèi)生組織推薦為高效安全的防腐劑。山梨酸的溶解度比較低，常制成溶解度較大的山梨酸鉀，添加到食品中[2-3]。山梨酸鉀為無(wú)色-白色鱗片狀結(jié)晶，或白色粉末，熔點(diǎn)270 ℃，溶于水而難溶于乙醇[4]。山梨酸鉀和山梨酸具有同樣的防腐功能，能夠有效地抑制霉菌、酵母菌和好養(yǎng)性細(xì)菌的活性，還能防止肉毒桿菌、葡萄球菌、沙門(mén)氏菌等有害微生物的生長(zhǎng)和繁殖，其抑制發(fā)育的作用比殺菌作用更強(qiáng)，從而能夠有效延長(zhǎng)食品的保存時(shí)間[5-7]。

我國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB 15037-2006《葡萄酒》規(guī)定葡萄酒中山梨酸及山梨酸鉀的最大使用限量為0.2 g/kg。當(dāng)山梨酸與山梨酸鉀同時(shí)使用時(shí)，以山梨酸計(jì)，不得超過(guò)最大使用量[8]。為了檢測(cè)葡萄酒中山梨酸或山梨酸鉀的含量，國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB/T 5009.29-2003《食品中山梨酸、苯甲酸的測(cè)定》規(guī)定檢測(cè)方法為氣相色譜法、薄層色譜法以及高效液相色譜法[9]，國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB/T 23495-2009《食品中苯甲酸、山梨酸和糖精鈉的測(cè)定 高效液相色譜法》提出利用高效液相色譜儀檢測(cè)不同食品中的山梨酸含量[10]。

圖1　山梨酸結(jié)構(gòu)式

上述兩個(gè)標(biāo)準(zhǔn)使用高效液相色譜法測(cè)定山梨酸的檢測(cè)方法存在不一致與不夠詳細(xì)的問(wèn)題。（1）制備山梨酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液的不同：國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB/T 5009.29-2003制備為準(zhǔn)確稱(chēng)取0.1000 山梨酸，加碳酸氫鈉（20 g/L）5 mL，加熱溶解，移入100 mL容量瓶中，加水定容至100 mL；而GB/T 23495-2009制備為準(zhǔn)確稱(chēng)取0.2680 g山梨酸鉀，加水溶解并定容至200 mL；（2）樣品處理：對(duì)葡萄酒樣品水浴加熱除醇的時(shí)間和溫度并未做詳細(xì)規(guī)定。

因此，本方法選擇了一種比較快速制備山梨酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液和一種快速準(zhǔn)確的樣品處理方法。

1 試驗(yàn)材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

高效液相色譜儀（Agilent 1260，安捷倫科技（中國(guó)）有限公司），附紫外吸收檢測(cè)器（VWD），色譜柱（HYPERSIL 150 mm×4.6 mm，5 μm）。

甲醇（色譜級(jí)，Mreda Technology inc，USA），乙酸銨（分析純，洛陽(yáng)市化學(xué)試劑廠(chǎng)），氨水（洛陽(yáng)市化學(xué)試劑廠(chǎng)），山梨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液（濃度為1 mg/mL，中國(guó)計(jì)量科學(xué)研究院），所有的溶液均由Millipore 純水機(jī)（美國(guó)）制備的超純水配制。

葡萄酒樣品為2014年戎子酒莊3款鮮酒：輕柔紅葡萄酒，酒度為9.0%，含糖量為52.0 g/L；輕柔桃紅葡萄酒酒度為10.5%，含糖量為39.2 g/L；濃甜紅葡萄酒酒度為12.5%，含糖量為106 g/L。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 山梨酸標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)制作

按照表1所示，吸取不同體積的山梨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液，并將其稀釋到10 mL的容量瓶中，對(duì)應(yīng)濃度如表所示，過(guò)濾待用。上述步驟重復(fù)三次。

1.2.2 樣品前處理

用移液槍取葡萄酒樣品10 mL于小燒杯中，100 ℃水浴加熱20 min或80 ℃水浴30 min去除乙醇，加水稀釋?zhuān)⒂孟“彼ò彼c超純水1:1混合配制）準(zhǔn)確調(diào)節(jié)pH值為7.00，最后定容到100 mL容量瓶中，用一次性濾器過(guò)濾后待用。

1.2.3 高效液相色譜條件

配制0.02 mol/L乙酸銨溶液。取1.54 g乙酸銨，溶于1 L超純水中，過(guò)濾待用。

高效液相色譜條件：流動(dòng)相，甲醇:乙酸銨=5:95；波長(zhǎng)230 nm，流速1 mL/min，柱溫30 ℃，進(jìn)樣體積10 μL。

表1　山梨酸標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)

2 結(jié)果與分析

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)制作

由圖2可以看出，山梨酸出峰時(shí)間為4.7 min左右。

山梨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液用超純水配制成濃度分別為5 mg/L，10 mg/L，15 mg/L，20 mg/L，25 mg/L，30 mg/L，按儀器工作條件進(jìn)行測(cè)定，以各自峰面積對(duì)標(biāo)準(zhǔn)溶液的質(zhì)量濃度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，檢測(cè)的化合物在5～30 mg/L呈線(xiàn)性，線(xiàn)性回歸曲線(xiàn)見(jiàn)圖3，相關(guān)系數(shù)r為0.9998。

2.2 回收試驗(yàn)

在葡萄酒樣品中加入1 mg/mL的山梨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液1 mL，檢測(cè)樣品中山梨酸含量，結(jié)果如表2所示：進(jìn)行回收試驗(yàn)，平行3次，按試驗(yàn)條件測(cè)定，加標(biāo)回收率在93.03%～107.15%之間。

圖2　山梨酸標(biāo)準(zhǔn)樣品出峰圖

圖3　山梨酸標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)

2.3 樣品中山梨酸鉀含量測(cè)定

如圖4所示為葡萄酒中山梨酸鉀含量的測(cè)定圖譜，出峰時(shí)間為4.8 min左右，干擾峰少。檢測(cè)葡萄酒中山梨酸鉀含量，樣品檢測(cè)重復(fù)3次，輕柔紅葡萄酒檢測(cè)數(shù)據(jù)依次為110.7 mg/L，109.67 mg/L，111.94 mg/L，檢測(cè)平均值為110.77 mg/L，RSD為1.86；輕柔桃紅紅葡萄酒檢測(cè)數(shù)據(jù)依次為103.10 mg/L，102.93 mg/L，101.20 mg/L，檢測(cè)平均值為102.41 mg/L，RSD為1.03；濃甜紅葡萄酒檢測(cè)數(shù)據(jù)依次為94.57 mg/L，93.21 mg/L，96.52 mg/L，檢測(cè)平均值為94.77 mg/L，RSD為1.76。說(shuō)明利用該方法檢測(cè)低醇葡萄酒中山梨酸鉀含量，準(zhǔn)確性高，重復(fù)性好。

表2　加標(biāo)回收率

3 討論

樣品前處理試驗(yàn)表明，經(jīng)過(guò)加熱去醇，稀釋并調(diào)節(jié)pH后，樣品出峰狀況穩(wěn)定，檢測(cè)結(jié)果更精準(zhǔn)[11-12]。通過(guò)pH調(diào)節(jié)后，消除不同溶液pH值對(duì)結(jié)果的影響[13]。

樣品測(cè)定結(jié)果顯示，利用高效液相色譜能夠?qū)⒌痛计咸丫浦猩嚼嫠徕浥c葡萄酒中其他物質(zhì)完美的分離[14-15]，定量分析重現(xiàn)性好，結(jié)果基本一致。因此，在實(shí)際樣品測(cè)定中，該方法更簡(jiǎn)單準(zhǔn)確。

4 結(jié)論

本文建立了葡萄酒中山梨酸鉀含量的測(cè)定方法，利用高效液相色譜儀，設(shè)置儀器條件為流動(dòng)相，甲醇:乙酸銨=5:95，波長(zhǎng)230 nm，流速1 mL/min，柱溫30 ℃，進(jìn)樣體積10 μL。樣品進(jìn)樣之前加熱去醇，稀釋以及pH調(diào)整處理，結(jié)果穩(wěn)定性更好。山梨酸濃度與液相色譜儀出峰峰面積呈線(xiàn)性回歸，相關(guān)系數(shù)r為0.9998，回收率為93.03%～107.15%；檢測(cè)葡萄酒樣品時(shí)，RSD＜2.00，方法簡(jiǎn)單而且穩(wěn)定性好，靈敏度高，可以用于實(shí)際樣品的測(cè)定。

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The determination of potassium sorbate in wine by modified HPLC

QI Xinchun,YANG Xiaoyan
(Shanxi Chateau Rongzi Limited Company,Xiangning,Shanxi,042100)

Abstract:The study established a simple method of determination potassium sorbate in wine by modifying the GB/T 23495-2009.The results showed that the concentration of potassium sorbate and peak area were conforming to linear regression,and correlation index was 0.9998,the recoveries were 91% to 115.8%.The Relative standard deviation (RSD) was 2.08 when detect wine sample and the results were stable and repeatable.

Key words:potassium sorbate,High performance liquid chromatography (HPLC),wines

作者簡(jiǎn)介：祁新春（1983-），男，學(xué)士，釀酒師，山西戎子酒莊有限公司技術(shù)中心。E-mail:qxc0814@163.com

收稿日期：2015-08-24

DOI：10.13414/j.cnki.zwpp.2016.01.006

中圖分類(lèi)號(hào)：S663.1

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A