紫丁香苷對大鼠肝缺血再灌注損傷保護作用的初步研究

姜月紅,王燕穎

(1. 黑龍江省醫(yī)院 檢驗科，黑龍江 哈爾濱150036;2.上海市東方醫(yī)院 消化內(nèi)科，上海200120)

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紫丁香苷對大鼠肝缺血再灌注損傷保護作用的初步研究

姜月紅1,王燕穎2*

(1. 黑龍江省醫(yī)院 檢驗科，黑龍江 哈爾濱150036;2.上海市東方醫(yī)院 消化內(nèi)科，上海200120)

摘要：目的初步研究紫丁香苷對肝缺血再灌注損傷(Hepatic ischemia repefusion injury,HIRI)的保護作用。方法Wistar雄性大鼠隨機分為假手術(shù)組(對照組)、缺血再灌注組(模型組)、紫丁香苷高、中、低劑量組，術(shù)后取血測定谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、總膽紅素(TBiL)、腫瘤壞死因子a(TNF-a)、白細(xì)胞介素10(IL-10)含量；術(shù)后制備肝勻漿測定超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、髓過氧化物酶(MPO)、誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(iNOS)含量。結(jié)果紫丁香苷高劑量組在1 h、3 h、6 h、24 h可以顯著降低HIRI大鼠血清中ALT和TBiL水平。紫丁香苷高、中劑量組可以升高血清中SOD值；高、中、低劑量組可以顯著降低血清中MDA值；中、低劑量組可以降低血清中MPO值，高劑量組可以顯著降低血清中MPO值；中、高劑量組可以抑制iNOS活性。紫丁香苷高劑量組顯著抑制血清中TNF-a含量升高，紫丁香苷高劑量組可以促進血清中IL-10含量升高。結(jié)論紫丁香苷對大鼠肝缺血再灌注損傷有保護作用，具體機制有待于進一步研究。

關(guān)鍵詞：紫丁香苷；肝缺血再灌注損傷

(ChinJLabDiagn,2016,20:0359)

紫丁香苷 ( Syringin ) 為木脂素類天然產(chǎn)物，可以從木犀科植物紫丁香葉和五加科植物刺五加中分離得到。已有的藥理試驗結(jié)果表明，紫丁香苷具有抑制肝臟脂質(zhì)過氧化的作用[1]，而氧化自由基增多，膜脂質(zhì)過氧化增強正是肝缺血再灌注損傷(Hepatic ischemia repefusion injury,HIRI)的主要原因之一[2]。為了證實紫丁香苷對HIRI的保護作用，本實驗選取大鼠HIRI模型，對其作用機制進行了探討。

1材料與方法

1.1實驗動物

健康Wistar雄性大鼠(清潔級)，體重(250±20) g，由哈爾濱醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心提供。

1.2藥品與試劑

紫丁香苷標(biāo)準(zhǔn)品( 批號11574-201201) 由中國藥品生物制品檢定所提供；ALT、TBiL試劑盒由哈爾濱世陽生物試劑有限公司提供；SOD、MDA、MPO、NO、iNOS試劑盒購自南京建成生物工程研究所；TNF-a 和IL-10 ELISA試劑盒由哈爾濱世陽生物試劑有限公司提供。

1.3實驗動物分組和給藥方法

將wistar雄性大鼠隨機分為5組，每組8只。假手術(shù)組(對照組):只做手術(shù)而不用血管夾夾閉肝蒂;缺血再灌注組(模型組);紫丁香苷小劑量注射組(25 mg/kg);紫丁香苷中劑量注射組(50 mg/kg);紫丁香苷大劑量注射組(100 mg/kg)。藥物組中每只大鼠均于給予肝素2 min后、缺血前30 min給藥，正常組與模型組按體重計算給予等量生理鹽水。

1.4大鼠HIRI模型制備

雄性wistar大鼠,體重290-350 g,于手術(shù)前12 h禁食,3 h禁飲水準(zhǔn)確稱重后,用10%的烏拉坦腹腔注射以麻醉大鼠待大鼠完全麻醉后,將其四肢固定于手術(shù)操作臺上,對大鼠右后腿內(nèi)側(cè)和腹部兩個術(shù)區(qū)進行常規(guī)備皮和碘伏消毒，鋪無菌手術(shù)單在無菌條件下行右股靜脈置管以便給藥。取腹部劍突下至恥骨聯(lián)合上正中切口,小心剝離肝胃韌帶,暴露第一肝門,在自右股靜脈給予肝素200U/只后2 min,用無創(chuàng)傷微血管夾鉗夾肝蒂(包括門靜脈、肝動脈、膽總管等)造成肝臟缺血，血流被阻斷后的肝臟可見肝葉顏色由鮮紅色變?yōu)榘导t色。將肝臟腸管復(fù)位,腹壁切口拉攏后以溫鹽水紗布覆蓋，缺血30min后小心取出血管夾，避免將血管撕裂,松動肝門處組織使肝臟血供恢復(fù)(即再灌注),然后用絲線縫合切口,關(guān)腹,即形成肝缺血再灌注模型[3]。

1.5標(biāo)本處理和指標(biāo)測定

血清ALT和TBil測定：缺血再灌1 h、3 h、6 h和24 h股動脈取血，血樣離心分離血清。血清ALT和TBil測定按照試劑盒說明書進行。

肝勻漿中MDA、SOD、MPO、iNOS測定：缺血再灌注3 h后放血并迅速取出肝臟，生理鹽水制成1∶10肝組織勻漿液，根據(jù)試劑盒說明書進行檢測。

血清TNF-a和IL-10測定：缺血再灌注后1 h、3 h、6 h和24 h股動脈取血，血樣離心分離血清，凍存于-80℃?zhèn)溆?。采用雙抗體夾心ELISA法測定，測定按照試劑盒說明書進行。

1.6統(tǒng)計學(xué)處理

2結(jié)果

2.1血清中ALT和TBil測定結(jié)果

如圖1和圖2所示，HIRI大鼠血清中ALT和TBiL水平隨再灌注后的時間延長而升高，在3h和6h時達(dá)到高峰，24h時恢復(fù)至接近對照組水平，紫丁香苷高劑量組在1h、3h、6h、24h可以顯著降低HIRI大鼠血清中ALT和TBiL水平。

中、低劑量組在3h是可觀察到顯著降低HIRI大鼠血清中ALT和TBiL水平，6h后由于HIRI大鼠死亡而無觀測值。

##模型組與對照組比較(P<0.01)**與模型組比較(P<0.01)

##模型組與對照組比較 (P<0.01)*與模型組比較(P<0.05)**與模型組比較(P<0.01)

圖2紫丁香苷對HIRI大鼠血清TBiL的影響(n=8)

2.2肝勻漿中MDA、SOD、MPO、iNOS測定結(jié)果

如表1所示，紫丁香苷高、中劑量組在大鼠HIRI后3h時，可以升高血清中SOD值；高、中、低劑量組可以顯著降低血清中MDA值；中、低劑量組可以降低血清中MPO值，高劑量組可以顯著降低血清中MPO值；中、高劑量組可以抑制iNOS活性。

2.3血清TNF-a和IL-10測定結(jié)果

如圖3和圖4所示，HIRI大鼠血清中TNF-a水平隨再灌注后的時間延長而升高，在24h時達(dá)到高峰，紫丁香苷高劑量組顯著抑制血清中TNF-a含量升高；血清中IL-10含量在HIRI后1小時達(dá)最高，隨時間延長升高放緩，24h時接近對照組水平。紫丁香苷高劑量組分別在HIRI后3h、6h促進血清中IL-10含量升高。

表1　各組血清中 SOD、MDA、MPO含量和iNOS活性

#模型組與對照組比較(P<0.05)##模型組與對照組比較(P<0.01)*與模型組比較(P<0.05)**與模型組比較(P<0.01)

##模型組與對照組比較(P<0.01)**與模型組比較(P<0.01)

##模型組與對照組比較(P<0.01)**與模型組比較(P<0.01)

3討論

HIRI是肝臟外科手術(shù)或肝移植過程中常見的病理過程。藥物預(yù)防是臨床常用的方法[4]。HIRI過程中組織缺血缺氧引起線粒體損傷，復(fù)氧后多個細(xì)胞因子的介入又進一步加重?fù)p傷，表現(xiàn)為血清中ALT、TBiL的異常升高。紫丁香苷高劑量組可以抑制ALT、TBiL的異常升高，提示其對HIRI具有保護作用。氧化應(yīng)激是HIRI的重要機制，肝細(xì)胞的缺

血缺氧造成內(nèi)源性抗氧化物質(zhì)SOD的耗竭，同時中性粒、單核、巨噬細(xì)胞缺氧刺激后大量釋放氧自由基和線粒體損傷產(chǎn)生的氧自由基，一同對細(xì)胞產(chǎn)生脂質(zhì)過氧化損傷，產(chǎn)生脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物MDA，同時MPO作為中性粒細(xì)胞嗜天青顆粒產(chǎn)生的氧化應(yīng)激相關(guān)酶，其活性增加意味著中性粒介導(dǎo)的肝損傷的加重。另外，iNOS激活可催化產(chǎn)生大量NO，NO自由基也是肝損傷的因素之一。紫丁香苷低中高劑量組能降低肝勻漿中MDA含量并呈劑量依賴，同時升高SOD含量，降低MPO和iNOS活性，提示紫丁香苷抗HIRI肝損傷源自其抗氧化應(yīng)激作用。有研究表明[5]，炎癥因子TNF-a直接導(dǎo)致肝竇內(nèi)皮腫脹并激活肝竇內(nèi)白細(xì)胞釋放氧自由基造成肝損傷而IL-10能抑制這種炎癥因子的產(chǎn)生。紫丁香苷高劑量組可以分別抑制TNF-a含量的升高和促進IL-10的產(chǎn)生，說明紫丁香苷的作用可能與恢復(fù)炎癥因子與抗炎因子之間的平衡有關(guān)。綜上所述，紫丁香苷對HIRI所造成的肝損傷具有保護作用，其具體作用機制有待于進一步研究。

參考文獻(xiàn)：

[1]汪琢,姜守剛,祖元剛,等.刺五加中紫丁香苷的提取分離及抗腫瘤作用研究[J].時珍國醫(yī)國藥,2010,21(03):752.

[2]郭慕真,劉曉玲,馮志佳,等.肝缺血再灌注損傷與NF-κB[J].胃腸病學(xué)和肝病學(xué)雜志,2012,21(06):583.

[3]張琳,買買提祖農(nóng).買蘇爾,袁一木,等.葡萄籽原花青素對大鼠肝缺血再灌注損傷的抗氧化作用研究[J].新疆醫(yī)科大學(xué)學(xué)報,2010,33(02):121.

[4]金鈴,方劍喬.中藥預(yù)處理對肝缺血再灌注損傷防護作用的研究進展[J].甘肅中醫(yī)學(xué)院學(xué)報,2010,27(01):63-65.

[5]周偉平,孫漢勇.肝缺血再灌注損傷對腫瘤增殖、轉(zhuǎn)移的影響[J].世界華人消化雜志,2010,18(09):861.

Preliminary research on the protective effects of syringin against Hepatic ischemia repefusion injury in rats

JIANGYue-hong,WANGYan-ying.

(DepartmentofLaboratory,HeilongjiangProvincialHospital,Harbin150036,China)

Abstract:ObjectiveTo study of syringin on hepatic ischemia reperfusion injury(Hepatic ischemia repefusion injury,HIRI)protective effect.MethodsWistar male rats were randomly divided into sham operation group(control group),ischemic reperfusion group(model group),syringin high and low dose group.Postoperative serum alanine aminotransferase(ALT),total bilirubin(TBiL),tumor necrosis factor A(TNF-a),interleukin 10(IL-10 the content) and superoxide dismutase(SOD),malondialdehyde(MDA),myeloperoxidase(MPO),inducible nitric oxide synthase(iNOS) content in the postoperative preparation of liver homogenate were determined.ResultsSyringin high dose group in 1 h,3 h,6 h,24 h could significantly reduce HIRI rats serum ALT and TBiL levels.syringin high,middle dose group can be elevated serum SOD value;high,medium,low dose group can significantly decrease the serum MDA value;in low dose group,can decrease the serum MPO value;high dose group can significantly decrease the serum MPO value; high dose group can inhibit the activity of iNOS.High dose of syringin group significantly inhibited the increase of the content of TNF-a in serum,syringin high dose group could promote the increase of the content of IL-10 in serum.ConclusionSyringin has protective effects on hepatic ischemia repefusion injury of rats and the protective mechanism of the effect needs to further study.

Key words:Syringin;Hepatic ischemia repefusion injury

(收稿日期：2015-09-07)

文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A

中圖分類號：R364.1+2

文章編號：1007-4287(2016)03-0359-03

*通訊作者

基金項目：黑龍江省回國留學(xué)人員科技項目