藏藥鑒定及質(zhì)量控制研究現(xiàn)狀

范剛　賈敏如　劉悅　張藝

[摘要]藏藥的品種鑒定和質(zhì)量控制是其現(xiàn)代化研究的重要內(nèi)容，對于保證藏藥臨床應(yīng)用的安全、有效具有重要的意義。該文簡要概述了近10年來藏藥在品種鑒定、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)化及質(zhì)量評價等方面的研究進(jìn)展，并介紹了DNA條形碼、紅外光譜、¹H-NMR代謝組學(xué)等新技術(shù)、新方法的應(yīng)用實(shí)例，旨在為藏藥的現(xiàn)代化研究工作提供參考。

[關(guān)鍵詞]藏藥；品種鑒定；質(zhì)量控制；DNA條形碼；代謝組學(xué)

[Abstract]Species identification and quality control of Tibetan medicines are an important part of its modernization studies， and they have important significance for ensuring the safety and effectiveness of Tibetan medicines in clinical application. In order to provide a reference for the modernization research of Tibetan medicines， this paper summarized the research progress of species identification， quality standards and quality evaluation of Tibetan medicines in the past 10 years. It also introduces the application examples of some new technologies and methods， such as DNA barcoding， infrared spectroscopy and¹H NMR-based metabolomics.

[Key words]Tibetan medicines； species identification； quality control； DNA barcoding； metabolomics

藏醫(yī)藥是我國傳統(tǒng)醫(yī)藥的重要組成部分，為藏族人民的防病治病作出了巨大的貢獻(xiàn)。青藏高原是藏族人民成長的搖籃，該區(qū)域由于海拔高、冰雪覆蓋期長、氣候多樣，孕育了眾多獨(dú)特的藏藥資源^[1]。藏藥主要由植物藥、動物藥、礦物藥三大部分組成，其自身的特點(diǎn)和優(yōu)勢主要體現(xiàn)為使用歷史悠久，理論獨(dú)特，使用動物和礦物藥品種數(shù)量較大，加工炮制方法獨(dú)特，復(fù)方藥味較多，并在治療心腦血管、神經(jīng)系統(tǒng)、肝膽、腸胃等疾病方面具有顯著療效等^[1-2]。

1 藏藥多基原性

由于不同藏區(qū)用藥習(xí)慣差異、資源量逐漸匱乏、同名異物及同物異名等因素，藏藥在實(shí)際流通和應(yīng)用過程中常出現(xiàn)地區(qū)習(xí)用品、替代品或混淆品^[2]。目前，藏藥材“一藥多基原”現(xiàn)象十分突出。據(jù)統(tǒng)計，《部頒標(biāo)準(zhǔn)·藏藥分冊》正文及附錄收載的植物類藏藥材共計148種，而多基源藥材有52種，所占比例高達(dá)35%。藏藥基源的多樣性和復(fù)雜性導(dǎo)致其品種混亂，質(zhì)量參差不齊，嚴(yán)重影響臨床用藥的安全性和有效性。因此，藏藥的品種鑒定和質(zhì)量控制是一項(xiàng)重要而艱巨的任務(wù)，也是當(dāng)前藏藥現(xiàn)代化研究需要解決的關(guān)鍵科學(xué)問題。

2 藏藥的品種鑒定

品種鑒定是藏藥質(zhì)量控制的首要環(huán)節(jié)，常規(guī)的鑒定方法主要有基源鑒定、性狀鑒定、顯微鑒定、理化鑒定等，這些經(jīng)典方法為保證藏藥的質(zhì)量和用藥安全發(fā)揮了重要的作用。近年來，隨著分子生物學(xué)、儀器分析技術(shù)的快速發(fā)展，藏藥品種鑒定研究領(lǐng)域涌現(xiàn)了一些新技術(shù)、新方法，如DNA條形碼鑒定技術(shù)及以核磁共振、紅外光譜等為代表的化學(xué)鑒定技術(shù)。DNA條形碼是指利用基因組中一段公認(rèn)標(biāo)準(zhǔn)的、相對較短的DNA序列對物種進(jìn)行快速、準(zhǔn)確鑒定的一種新技術(shù)^[3]。2003年，Hebert首次提出將條形碼編碼技術(shù)應(yīng)用于生物物種鑒定^[4]。隨后，DNA條形碼技術(shù)得到迅速發(fā)展，在動物、植物物種鑒定中得到廣泛的應(yīng)用，如陳士林課題組在中藥DNA條形碼鑒定研究領(lǐng)域取得了突出的成績^[3]。近10年來，隨著DNA條形碼的快速發(fā)展，該方法在藏藥品種鑒定中的應(yīng)用也越來越廣泛，已有研究者對藏藥沙棘Hippophae fructus、濕生扁蕾Gentianopsis paludosa、羌活魚Batrachuperi等進(jìn)行了DNA條形碼鑒定研究^[5-7]。該技術(shù)的應(yīng)用為解決目前藏藥品種繁多、來源復(fù)雜的科技難題提供了有效的手段?；瘜W(xué)鑒定技術(shù)是指選擇少數(shù)特征的化學(xué)成分，即化學(xué)標(biāo)志物（chemical markers），或者以化學(xué)成分的整體構(gòu)成特點(diǎn)作為物種鑒定的依據(jù)。近年來，隨著儀器分析技術(shù)的快速發(fā)展，各種光譜、色譜技術(shù)為藏藥品種鑒定及質(zhì)量控制提供了更加靈敏、更加準(zhǔn)確的方法。其中，紅外光譜是應(yīng)用最為廣泛的化學(xué)鑒定技術(shù)之一，該方法可在無損檢測的基礎(chǔ)上，對物種實(shí)現(xiàn)快速鑒定。目前，紅外光譜已成功運(yùn)用于翼首草Pterocephali Herba、藏菖蒲Acori Calami Rhizoma、獨(dú)一味Lamiophlomis Herba等藏藥的品種鑒定^[8-9]。核磁共振波譜法（NMR）是近年來新興的化學(xué)鑒定技術(shù)，該方法樣品制備簡單、分析快速，并具有定性與定量相結(jié)合、初生與次生代謝產(chǎn)物同表征的方法學(xué)優(yōu)勢^[10]，因此能準(zhǔn)確地反映化學(xué)成分的數(shù)和量等特征，從而為藥材鑒定和質(zhì)量控制提供了有效的手段。目前，¹H-NMR代謝組學(xué)技術(shù)結(jié)合化學(xué)計量學(xué)方法已經(jīng)在藏茵陳、沙棘等多基源藏藥的品種鑒定中得到了應(yīng)用^[11-12]。

3 藏藥的質(zhì)量控制與評價

藏藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制定與其臨床用藥的安全性和有效性密切相關(guān)。近年來，在國家的大力支持及藏醫(yī)藥科研人員的共同努力下，藏藥的資源調(diào)查、品種整理、標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)制備、藥效物質(zhì)辨識、化學(xué)成分定量分析等基礎(chǔ)研究工作取得了較好的成績，從而推動了藏藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)化研究工作。首先，藏藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范化研究的數(shù)量日益增加。據(jù)統(tǒng)計（CNKI數(shù)據(jù)庫），2001—2005年報道了8種，2006—2010年報道了17種，而2011—2015年報道了52種藏藥材及復(fù)方制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究工作。其次，藏藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的水平得到了較大的提高。以獨(dú)一味為例，2000年版《中國藥典》沒有收載，2005年版《中國藥典》收載該品種并以水解后的黃酮苷元木犀草素為HPLC含量測定指標(biāo)，而2010年和2015年2版均建立了專屬性強(qiáng)、以有效成分山梔苷甲酯和8-O-乙酰山梔苷甲酯為指標(biāo)的HPLC含量測定方法。此外，從1995年版的《部頒標(biāo)準(zhǔn)·藏藥分冊》到2015年版《中國藥典》也能夠看出藏藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)水平有了質(zhì)的飛躍。《部頒標(biāo)準(zhǔn)·藏藥分冊》共收載藥材136種、成方制劑200種，藏藥材中有薄層色譜鑒別的僅占2.9%（4種），復(fù)方中有薄層色譜鑒別的也只占21%（42種），并且僅有1個品種（烈香杜鵑）收載了含量測定項(xiàng)?！吨袊幍洹?015年版一部共收載藏藥材8種、成方制劑19種，收載的品種雖少，但標(biāo)準(zhǔn)水平明顯更高，有薄層色譜鑒別的品種比例高達(dá)96%（26種），有含量測定項(xiàng)的也占63%（17種）。

藏藥的質(zhì)量控制與評價是其現(xiàn)代化研究的重要內(nèi)容。與中藥類似，顯微、薄層鑒別與一個或幾個指標(biāo)成分的含量測定仍然是目前藏藥質(zhì)量評控的主要模式。近年來，隨著藏藥化學(xué)成分和藥理學(xué)研究的逐漸深入，藏藥的質(zhì)量評價水平正在逐步提高，出現(xiàn)了由無指標(biāo)、單指標(biāo)向多指標(biāo)成分發(fā)展的趨勢。如有關(guān)學(xué)者對獨(dú)一味、翼首草、坐珠達(dá)西等藏藥進(jìn)行了3種成分以上的同時含量測定研究^[13-15]，而印度獐牙菜Swertia chirayita已經(jīng)有10種成分同時測定的研究報道^[16]。此外，日益成熟的化學(xué)指紋圖譜技術(shù)也在藏藥質(zhì)量控制中得到了廣泛的應(yīng)用，翼首草、沙棘膏、三果湯散等藏藥均已開展了系統(tǒng)的化學(xué)指紋圖譜研究^[17-19]。具有“色譜特征唯一性”特點(diǎn)的化學(xué)指紋圖譜可全面反映藏藥的復(fù)雜成分信息，為保障藏藥質(zhì)量的穩(wěn)定、可控提供了有效的手段。近10年來，為實(shí)現(xiàn)藏藥內(nèi)在質(zhì)量的綜合評價和整體藥效物質(zhì)的全面控制，眾多科研人員從研究思路及分析方法等方面對藏藥的質(zhì)量評控模式進(jìn)行了有益的探索，出現(xiàn)了以“一測多評”、“譜效相關(guān)分析”、“代謝組學(xué)”等為核心的質(zhì)量評價方法體系。如喬媛媛采用“一測多評”法測定了藏藥肉果草Lanceae Herba藥材中4種有效成分的含量^[20]；羅培等利用譜效相關(guān)分析思路研究了藏藥白花刺參Morina nepalensis化學(xué)成分與抗炎活性的相關(guān)性，確定7個成分與抗炎活性呈正相關(guān)，可被選為該藥材的質(zhì)量控制指標(biāo)^[21]；潘正等運(yùn)用¹H-NMR代謝組學(xué)技術(shù)，建立了藥材代謝指紋圖譜，并從整體代謝成分角度研究了獨(dú)一味不同產(chǎn)地藥材的質(zhì)量差異^[22]。這些新方法為建立反映整體觀、體現(xiàn)安全有效等特點(diǎn)的藏藥質(zhì)控模式奠定了良好的基礎(chǔ)，對提高藏藥質(zhì)量控制水平起到了積極的促進(jìn)作用。

4 討論

近10年來藏藥的品種鑒定、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)化及質(zhì)量評控研究工作取得了可喜的成績。然而，我們也必須意識到，目前藏藥仍然存在基源混亂、質(zhì)量參差不齊、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)水平較低、藥效成分不明確等諸多問題。因此，藏藥的鑒定及質(zhì)量控制研究工作任重而道遠(yuǎn)，需要不斷的完善與提高。本課題組長期從事藏藥的品種鑒定、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提高及質(zhì)量評價方面的研究工作，在此特以專題的形式介紹近年來的部分研究成果，以供讀者參考。如劉川等^[23]研究證明ITS2條形碼能夠有效、準(zhǔn)確地鑒定藏藥“蒂達(dá)”不同基源藥材。李艷等^[24]以4個有效成分木蘭花堿、藥根堿、巴馬汀、小檗堿為指標(biāo)，首次建立了藏藥小檗皮藥材的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。劉川等^[25]建立了藏藥江孜沙棘Hippophea gyantsensis的HPLC指紋圖譜，并測定了3種黃酮類成分的含量，為該藥材的質(zhì)量評控提供了科學(xué)依據(jù)。張雨欣等^[26]利用DNA條形碼和UFLC技術(shù)對藏藥翼首草進(jìn)行了品種鑒定和質(zhì)量評價研究，并運(yùn)用灰色關(guān)聯(lián)度分析揭示了遺傳與化學(xué)的相關(guān)性。劉悅等^[27]將分子與化學(xué)方法有效整合，建立了基于DNA條形碼和¹H-NMR代謝組學(xué)的多基原藏藥沙棘二維鑒定方法，為藏藥的品種鑒定和質(zhì)量評價提供了一種新的研究思路。

[參考文獻(xiàn)]

[1]賈敏如，張藝，杜娟. 藏藥特色與可持續(xù)發(fā)展[J]. 中草藥，2010，41（2）：326.

[2]鐘國躍，王昌華，周華蓉，等. 藏藥材的生藥學(xué)特點(diǎn)及品種整理研究策略[J]. 世界科學(xué)技術(shù)——中醫(yī)藥現(xiàn)代化，2008，10（2）：28.

[3]陳士林. 中藥DNA條形碼分子鑒定[M]. 北京：人民衛(wèi)生出版社，2012.

[4]Hebert P D N， Cywinska A， Ball S L， et al. Biological identifications through DNA barcodes [J]. Proc R Soc Lond B， 2003， 270：313.

[5]Liu Y， Sun W， Liu C， et al. Identification of Hippophae species （Shaji） through DNA barcodes [J]. Chin Med， 2015， 10：28.

[6]Xue C Y， Li D Z. Use of DNA barcode sensu lato to identify traditional Tibetan medicinal plant Gentianopsis paludosa （Gentianaceae） [J]. J Syst Evol， 2011， 49（3）：267.

[7]杜文杰，劉海青，徐婧，等. 藏藥羌活魚的COI分子鑒定[J]. 中國中藥雜志，2015，40（3）：395.

[8]關(guān)昕璐，閻玉凝，黃曉玲，等. 翼首草的紅外光譜鑒別[J]. 中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志， 2006， 12（4）：11.

[9]林俊英. 紅外指紋圖譜在藏藥鑒別中的應(yīng)用研究[D]. 蘭州：蘭州大學(xué)， 2013.

[10]范剛，羅尚華，李艷，等. 基于¹H-NMR代謝組學(xué)技術(shù)的中藥質(zhì)量評價[J]. 世界科學(xué)技術(shù)——中醫(yī)藥現(xiàn)代化，2013，15（9）：1862.

[11]范剛. 基于¹H-NMR代謝物組學(xué)技術(shù)的多基源中藏藥品種質(zhì)量評價研究[D]. 成都：成都中醫(yī)藥大學(xué)，2012.

[12]蘇永文，譚爾，張靜，等. 3種不同基原藏藥沙棘的¹H-NMR代謝組學(xué)研究[J]. 中國中藥雜志，2014，39（21）：4234.

[13]鐘世紅，古銳，王鈴鑫，等. HPLC 同時測定獨(dú)一味中7 種成分含量[J]. 中國中藥雜志，2014，39（22）：4373.

[14]李文婕，高燕，陳一龍，等. UFLC-PDA 同時快速測定藏藥翼首草中5種化學(xué)成分的含量[J]. 世界科學(xué)技術(shù)——中醫(yī)藥現(xiàn)代化，2014，16（1）：161.

[15]任桂友，劉海萍，王戰(zhàn)國，等. 藏藥坐珠達(dá)西中8 種成分HPLC定量測定[J]. 中草藥，2014，45（15）：2189

[16]陽勇，羅維早，劉翔，等. 藏藥“甲蒂（印度獐牙菜）”中龍膽苦苷和獐牙菜苷等10種成分的含量測定與質(zhì)量評價[J]. 中國中藥雜志，2012，37（20）：3141.

[17]高燕，李文婕，李聰穎，等. 藏藥翼首草UFLC 指紋圖譜研究[J]. 中國中藥雜志，2014，39（7）：1185.

[18]游佳莉，王毓杰，張藝，等. 藏藥沙棘膏HPLC 指紋圖譜研究[J]. 中國中藥雜志，2015，40（2）：362.

[19]德洛，姚喆，冀靜，等. 藏藥三果湯散抗氧化有效成分的薄層色譜-生物自顯影及HPLC指紋圖譜[J]. 中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2012，18（10）：99.

[20]喬媛媛. 西藏肉果草質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[D]. 成都：西南交通大學(xué)，2015.

[21]羅培，劉圓，呂露陽，等. 藏藥材“白花刺參”抑制NO 生成作用的譜效相關(guān)分析[J]. 中國中藥雜志，2013，38（17）：2882.

[22]Pan Z， Fan G， Yang R P， et al. Discriminating Lamiophlomis rotata according to geographical origin by ¹H-NMR spectroscopy and multivariate analysis [J]. Phytochem Anal， 2015， 26（4）：247.

[23]劉川，張雨欣，劉悅，等. 龍膽科藏藥“蒂達(dá)”類的DNA條形碼鑒定研究[J]. 中國中藥雜志， 2016， 41（4）：567.

[24]李艷，呂秀梅，林亞麗，等. 藏藥小檗皮的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J]. 中國中藥雜志， 2016， 41（4）：592.

[25]劉川，文檢，蘇永文，等. HPLC法測定藏藥“巴爾達(dá)爾”黃酮類成分含量及指紋圖譜的研究[J]. 中國中藥雜志， 2016， 41（4）：586.

[26]張雨欣，李聰穎，劉川，等. 基于DNA條形碼及UFLC技術(shù)的藏藥翼首草相關(guān)性的品質(zhì)評價研究[J]. 中國中藥雜志， 2016， 41（4）：572.

[27]劉悅，劉川，譚爾，等. 基于DNA條形碼和¹H-NMR代謝組學(xué)二維方法的多基原藏藥沙棘鑒定[J]. 中國中藥雜志， 2016， 41（4）：578.

[責(zé)任編輯 丁廣治]