高效液相色譜梯度洗脫法測定十味蒂達膠囊中的松果菊苷和木香烴內(nèi)酯的含量

顧 玉吳春園

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高效液相色譜梯度洗脫法測定十味蒂達膠囊中的松果菊苷和木香烴內(nèi)酯的含量

顧 玉1吳春園2

【摘要】目的 采用高效液相色譜（HPLC）梯度洗脫法建立同時測定十味蒂達膠囊中松果菊苷和木香烴內(nèi)酯含量的方法。方法 采用C(18)色譜柱（200 mm×4.6 mm，5 μm）；流速：1.2 ml/min；以乙腈-甲醇（2:3）作為流動相A，以1%冰醋酸溶液作為流動相B，按規(guī)定程序進行梯度洗脫；檢測波長：松果菊苷為334 nm，木香烴內(nèi)酯為225 nm，柱溫為25 ℃。結(jié)果 松果菊苷和木香烴內(nèi)酯質(zhì)量濃度分別在23.24～464.80 μg/ml（r=0.9994）、19.47～389.40 μg/ml（r=0.9998）時與其峰面積呈良好的線性關系；松果菊苷和木香烴內(nèi)酯的平均加樣回收率分別為99.27%、96.85%，RSD（n=6）分別為1.08%、0.59%。結(jié)論 該方法快速、靈敏、準確，可作為十味蒂達膠囊的含量測定控制方法。

【關鍵詞】高效液相色譜；梯度洗脫法；十味蒂達膠囊；松果菊苷；木香烴內(nèi)酯；洪連；木香

1無錫市精神衛(wèi)生中心，江蘇無錫 214151

2常州市新北區(qū)三井人民醫(yī)院，江蘇常州 213022

十味蒂達膠囊是由洪連、木香、蒂達、榜嘎、波棱瓜子、角茴香、苦賣菜、金腰草、小檗皮和熊膽粉等10味藥物加工而成的中藥復方制劑，具有疏肝理氣、清熱解毒、利膽溶石的作用，是治療肝膽濕熱所致肋痛，癥見右上腹鈍痛或絞痛，口苦，惡心，噯氣，泛酸，腹脹，慢性膽囊炎或膽石癥見上述癥候的首選藥物[1]。本研究采用高效液相色譜（HPLC）梯度洗脫法對十味蒂達膠囊中洪連[2]中松果菊苷和木香[2]所含木香烴內(nèi)酯進行定量檢測，為進一步控制十味蒂達膠囊的質(zhì)量提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料 安捷倫Agilent 1200型高效液相色譜儀，Chemstation色譜工作站；依利特C18柱（200 mm× 4.6 mm，5 μm）；松果菊苷對照品（111670-201304，含量以97.1%計）、木香烴內(nèi)酯（111524-201208，含量以99.5%計）均購于中國食品藥品檢定研究院；十味蒂達膠囊（每粒裝0.45g；批號為140503、141203、150202）購于西藏諾迪康藥業(yè)股份有限公司；甲醇、乙腈為色譜純，冰醋酸為分析純。

1.2 色譜條件 試驗過程中以乙腈-甲醇（2:3）作為流動相A，以1%冰醋酸溶液作為流動相B[2-3]，按照規(guī)定程序進行梯度洗脫（0～8 min，20.0%A；9～20 min，20.0%升至35.0%A；21～35 min，35.0%A升至50.0%A；36～40 min，50.0%A降至20.0%A）；所測組分檢測波長為：0～20 min，λ1=334 nm[3-4]；21～40 min，λ2=225 nm[5-7]；流速為1.2 ml/min；柱溫25 ℃；進樣量為20 μl。此系統(tǒng)條件下松果菊苷、木香烴內(nèi)酯與其他組分分離效果較好，理論塔板數(shù)按照松果菊苷、木香烴內(nèi)酯計均應不得低于2500，分離度均應大于1.5。

1.3 混合對照品溶液的配制 分別精密稱取松果菊苷對照品和木香烴內(nèi)酯對照品適量，加80%甲醇制成質(zhì)量濃度分別為2.324、1.947 mg/ml的對照品儲備液。再精密吸取配制成的對照品儲備液，加80%甲醇制成松果菊苷和木香烴內(nèi)酯質(zhì)量濃度分別為0.1162、0.1947 mg/ml的混合對照品溶液。

1.4 供試品溶液的制備 取十味蒂達膠囊適量，取出其內(nèi)容物，研磨成細粉，取約1.0 g，對其精密稱定，置50 ml量瓶中，加80%甲醇稀釋至刻度，超聲處理30 min，放冷，采用80%甲醇補充至刻度，振搖均勻，過濾，即得續(xù)濾液作為供試品溶液。

1.5 陰性樣品溶液的制備 按照十味蒂達膠囊的處方要求，分別稱取除洪連的其余藥味和除木香的其余藥味各1份，參照十味蒂達膠囊的制備工藝方法，分別制成洪連空白樣品和木香空白樣品，按照1.4項下所描述的供試品溶液制備方法制成洪連空白溶液和木香空白溶液。

2 結(jié)果

2.1 專屬性實驗 分別精密吸取供試品溶液、混合對照品溶液、洪連空白溶液及木香空白溶液，進樣量為20 μl，依法測定，結(jié)果顯示：在與所測組分對照品色譜圖相應的保留時間，樣品色譜圖中有對應吸收峰；而洪連空白溶液圖譜上未顯示松果菊苷的吸收峰；木香空白溶液圖譜上未顯示木香烴內(nèi)酯的吸收峰，見圖1。實驗結(jié)果表明，處方中其他藥味對檢測結(jié)果無影響。

圖1 松果菊苷和木香烴內(nèi)酯的HPLC圖注：1松果菊苷;2木香烴內(nèi)酯;A對照品;B樣品;C陰性對照品

2.2 線性關系考察 精密量取松果菊苷儲備液、木香烴內(nèi)酯儲備液0.1、0.2、0.5、1.0、2.0 ml，分別置于5個10 ml的容量瓶中，加80%甲醇制成系列濃度的混合對照品溶液，依法測定，以峰面積A與對照品質(zhì)量濃度C，得松果菊苷回歸方程為：A= 3.1057×106C+315.8，r=0.9994，線性范圍為23.24～464.80 μg/ml；木香烴內(nèi)酯A=5.9516×106C+265.8，r=0.9998，線性范圍為19.47～389.40 μg/ml。結(jié)果表明：松果菊苷和木香烴內(nèi)酯在各自的線性范圍內(nèi)，呈良好線性關系。

2.3 精密度實驗 精密吸取松果菊苷0.1162 mg/ml、木香烴內(nèi)酯0.1947 mg/ml的混合對照品溶液20 μl，連續(xù)6次注入高效液相色譜儀中，測得松果菊苷和木香烴內(nèi)酯峰面積的相對標準偏差分別為1.29%、0.87%。

2.4 重復性實驗 取同一批號的十味蒂達膠囊，按1.4項下方法制成6份供試品溶液，在上述條件依法進樣測定，計算各成分含量和相對標準偏差，松果菊苷和木香烴內(nèi)酯的RSD分別為0.96%、1.05%。

表1 松果菊苷和木香烴內(nèi)酯回收率試驗

2.5 穩(wěn)定性實驗 精密吸取同一批號十味蒂達膠囊的供試品溶液，分別于即刻、2、4、8、12、24 h進樣20 μl測定，測得松果菊苷和木香烴內(nèi)酯的RSD分別為1.31%、0.75%。

2.6 加樣回收率試驗 取十味蒂達膠囊（松果菊苷為6.48 mg/g，木香烴內(nèi)酯為9.56 mg/g）適量，取出其內(nèi)容物，研磨成細粉，取約0.5 g，對其精密稱定，置50 ml量瓶中，加入混合對照品溶液25 ml，采用80%甲醇稀釋至刻度，采用超聲波超聲提取30 min，放冷，采用80%甲醇補充至刻度，振搖均勻，過濾，取續(xù)濾液作為加樣供試品試液。依法進樣測定，平均加樣回收率及RSD見表1。

2.7 樣品的含量測定 取3個批號的樣品，按供試品制備方法，在上述色譜條件下測定本品中松果菊苷和木香烴內(nèi)酯的含量，結(jié)果見表2。

表2 3個批號樣品含量測定結(jié)果(n=3)

3 討論

洪連系藏族習用藥材，為玄參科植物短筒兔耳草的干燥全草，具有清熱、解毒、利濕、平肝、行血、調(diào)經(jīng)的功效；木香為菊科植物木香的干燥根，具有行氣止痛，健脾消食的功效。松果菊苷為洪連的主要成分，木香烴內(nèi)酯為木香的主要成分。本研究采用HPLC梯度洗脫法對十味蒂達膠囊中松果菊苷和木香烴內(nèi)酯進行定量控制研究，實驗結(jié)果表明本方法快速、靈敏、準確，可作為十味蒂達膠囊中松果菊苷和木香烴內(nèi)酯的控制方法。

參考文獻

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作者簡介：顧玉（1981.11-），主管藥師。主要從事醫(yī)院藥學研究工作。Email：guyuxueshu@163.com

【中圖分類號】R927.2

【文獻標志碼】A 【DOI】10.12010/j.issn.1673-5846.2016.03.005