翻白草對CCl4所致慢性肝損傷大鼠肝組織中SOD、MDA、GSH水平的影響①

蔡　綱，黃　平,李紹民

(1.佳木斯大學附屬第一醫(yī)院，黑龍江 佳木斯 154003;2.都昌縣新型農(nóng)村醫(yī)療合作局，江西 都昌 332600)

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翻白草對CCl4所致慢性肝損傷大鼠肝組織中SOD、MDA、GSH水平的影響①

蔡綱1，黃平2,李紹民1

(1.佳木斯大學附屬第一醫(yī)院，黑龍江 佳木斯 154003;2.都昌縣新型農(nóng)村醫(yī)療合作局，江西 都昌 332600)

摘要：目的:觀察翻白草對CCl4慢性肝損傷大鼠肝組織SOD、MDA和GSH 的影響, 驗證其對CCl4慢性肝損傷抗氧化保護作用。方法:分別設(shè)空白對照組、模型對照組、低劑量組、高劑量組。檢測各組大鼠肝組織中SOD、MDA和GSH含量。結(jié)果:翻白草可降低模型大鼠肝組織MDA 作用，阻止GSH、SOD 的消耗, 提高GSH、SOD 活性。結(jié)論:翻白草能夠?qū)勾笫蟾谓M織內(nèi)CCl4引起過氧化反應(yīng), 提高模型大鼠肝臟抗氧化能力，對肝臟細胞和功能有一定的保護作用。

關(guān)鍵詞：翻白草;慢性肝損傷;四氯化碳

翻白草是多年生草本植物，隸屬薔薇科，其根部肥大、單數(shù)羽狀復(fù)葉，全草皆可入藥，適合生長于低丘山坡和疏林下草地，在我國有比較廣泛的分布黑龍江、遼寧、江西、廣東、陜西等省份均可生長。翻白草，作為一種常用藥材，其歷史悠久，最早可追朔于《救荒本草》?！侗静菥V目》亦有記載，稱其雞腿兒，治吐血，下血，崩中，瘧疾，癰瘡。臨床上翻白草煎劑常用來治療痢疾、出血性疾病等[1]。近代，隨著中醫(yī)藥學及其研究方法的發(fā)展，發(fā)現(xiàn)翻白草安全性好，毒性極低[2]，含有多種活性成分及作用。有研究發(fā)現(xiàn)翻白草可改善2型糖尿病患者的胰島素抵抗，能很好促進肝細胞糖類物質(zhì)的代謝，有顯著的降低血糖作用[3,4]；張遠榮等的研究結(jié)果表明翻白草中的鞣質(zhì)成分具有較好的體外抗氧化作用[5]；李永明等的研究提示翻白草可以提高高血脂大鼠血清中的抗氧化物質(zhì)活性[6]；李忠秀等研究表明翻白草油可有效抑制肝癌HepG2細胞的異常增殖[7]。綜上，筆者拋磚引玉，通過實驗評價翻白草煎劑對CCl4所致慢性肝損傷大鼠肝組織中SOD、MDA、GSH水平的影響，探討翻白草煎劑對肝臟的氧化保護作用，為翻白草用于治療肝臟疾病提供理論依據(jù)。

1材料和方法

1.1實驗動物分組、造模和處理

1.1.1實驗動物

Wistar大鼠，由佳木斯大學動物實驗中心提供，6~7周齡，標準體重，80只。

1.1.2實驗動物分組

適應(yīng)性喂養(yǎng)5d后，對實驗動物進行分組。取隨機數(shù)字將其分成空白對照組、模型對照組，低劑量組、高劑量組共四組，每組20只。

1.1.3造模和處理

對上述四組分別做如下處理：模型對照組、低劑量組和高劑量組：給予給予新鮮配制的40%四氯化碳玉米油溶液1.5mL·kg-1bw腹腔注射；給予空白對照組動物注射同等劑量的玉米油;各組均每三天注射一次。處理組每日分別給予0.6mL/100g體重翻白草水煎劑灌胃，其中低劑量組使用1.0g/mL濃度溶液(相當于生藥量6g/kg體重)、高劑量組使用2.0g/mL濃度溶液(相當于生藥量12g/kg體重)。正常對照組、模型對照組灌胃相同體積的生理鹽水。持續(xù)8周。

1.2藥材和煎劑的制備

翻白草購于佳木斯大學附屬第一醫(yī)院門診中藥局。稱取翻白草干草1kg水洗、浸泡,文火煎煮, 過濾、濃縮制成生藥含量分別為1.0g/mL、2.0g/mL的溶液備用。

1.3取材和試劑

1.3.1取材

于處理8周后，停止所有處理因素48h，禁食不禁水12h后處死大鼠，取大鼠肝臟0.4g, 經(jīng)冰生理鹽水漂洗后,用濾紙拭干, 稱重,在冰浴的平皿上剪碎, 用手動勻漿器將其在冰生理鹽水中制成含肝組織10%勻漿,低溫離心，取上清液測定。

1.3.2主要試劑

四氯化碳和市售玉米油配制的30%四氯化碳玉米油溶液。SOD活性，GSH、MDA含量測定試劑盒購于南京建成生物工程研究所，上述測定按試劑盒說明書操作進行。

1.4統(tǒng)計學方法

2結(jié)果

2.1實驗動物情況

至實驗結(jié)束，實驗大鼠共死亡18只，存活62只，分別為空白對照組死亡2只、模型對照組死亡6只、低劑量組和高劑量組各5只。對存活大鼠按上述方法采集數(shù)據(jù)，進行統(tǒng)計學處理。

2.2翻白草對大鼠肝組織SOD活性的影響

與空白對照組比較，其余三組肝組織內(nèi)SOD活性均有不同程度下降(P<0.05)。和模型對照組比較，翻白草低劑量組和高劑量組SOD活性明顯升高(P<0.05)。翻白草煎劑的低劑量組、高劑量組處理可以提高本模型中大鼠肝組織中SOD含量。

2.3翻白草對大鼠肝組織MDA含量的影響

與空白對照組比較，其余三組肝組織內(nèi)MDA含量均有不同程度增加(P<0.05)。和模型對照組比較，翻白草低劑量組和高劑量組MDA含量明顯減少(P<0.05)。翻白草煎劑的低劑量組、高劑量組處理可以減少本模型中大鼠肝組織中MDA含量。

2.4翻白草對大鼠肝組織GSH含量的影響

與空白對照組比較，其余三組肝組織內(nèi)GSH含量均有不同程度減少(P<0.05)。和模型對照組比較，不能認為翻白草低劑量組和模型對照組肝組織中GSH含量有差別(P>0.05)，可以認為翻白草高劑量組GSH含量增加(P<0.05)。翻白草煎劑的高劑量組處理可以增加本模型中大鼠肝組織中GSH含量。

4組大鼠肝組織中SOD、MDA、GSH含量有差別(P<0.05)。為明確空白對照組、模型對照組和處理組間的差別用LSD檢驗對其進行兩兩比較，見表1~2。

表1　翻白草對CCl4 慢性肝損傷大鼠肝臟SOD、

表2　翻白草對CCl4 慢性肝損傷大鼠肝臟SOD、MDA、GSH 的影響

*P<0.05和空白對照組比較；△P<0.05和模型對照組比較。

3討論

肝損傷的發(fā)生形式多樣，發(fā)生機制復(fù)雜。CCl4常用于誘導(dǎo)化學性肝損傷， 40%CCl4植物油溶液，1.5mL·kg-1bw劑量腹腔注射，可誘導(dǎo)大鼠較為穩(wěn)定的慢性肝損傷[8]。四氯化碳進入體內(nèi)后被肝臟微粒體色素P450激活，形成活潑的三氯甲基和氯自由基，與肝細胞溶酶體、微粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的脂蛋白結(jié)合，產(chǎn)生脂質(zhì)過氧化作用，從而導(dǎo)致肝臟損傷[9]。伴隨著脂質(zhì)過氧化過程的發(fā)生，相應(yīng)的脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物(如活性氧自由基、MDA等)也會增加，MDA含量測定常用于評價脂質(zhì)過氧化程度，也可作為間接評價細胞氧化損傷的指標[10]。SOD活力維持在正常水平，是保護肝臟機能所必須的，對預(yù)防、修復(fù)氧化應(yīng)激引起肝損傷中具有重要的作用,SOD活力可間接反應(yīng)機體清除活性氧自由基(ROS)的能力[11]。GSH是生物體內(nèi)一種很重要的抗氧化劑和自由基清除劑，對維持細胞膜的結(jié)構(gòu)和功能具有重大意義。張麗等的研究示，GSH有抗肝纖維化作用，且一定的劑量依賴關(guān)系，隨著GSH濃度的增加，抑制作用更明顯[12]。MDA、SOD和GSH三指標的測定常相互配合，用于評價機體氧化應(yīng)激和抗氧化應(yīng)激系統(tǒng)平衡，或這種平衡失衡造成的氧化損傷狀態(tài)。

本次實驗研究結(jié)果表明，翻白草可以提高CCl4致肝損傷大鼠肝臟勻漿中GSH和SOD活性,減少MDA的生成，從而提高本模型中大鼠肝臟抗氧化能力，其作用機制可以認為翻白草對肝臟細胞和功能有一定的保護作用。其抗氧化能力是否存在藥物劑量依賴關(guān)系，是否能對抗慢性肝損害所導(dǎo)致的肝纖維化、肝硬化病情進展，還需要進一步的研究去證實。

肝臟作為糖類代謝的主要器官，近年來，很多研究都表明肝臟損傷導(dǎo)致的肝硬化、肝纖維化和糖尿病之間有明顯聯(lián)系。翻白草還有促進肝臟糖類物質(zhì)代謝，調(diào)節(jié)血糖和胰島素抵抗等作用，那么它的這些作用與保護肝臟之間有沒有聯(lián)系？很明顯，組織器官機體功能的改善也能提高抗氧化能力。翻白草中含多種活性成分，其作用機制和途徑亦是多樣。本模型中大鼠肝內(nèi)抗氧化物質(zhì)的提高，可能既是護肝機制，也是肝臟機體功能改善的結(jié)果，這需要更多的研究去發(fā)現(xiàn)、挖掘。

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(收稿日期：2015-05-14)

中圖分類號：R285.1

文獻標識碼：A

文章編號：1008-0104(2016)01-0033-02

作者簡介：蔡綱(1982～)男，江西都昌人，在讀碩士研究生。通訊作者：李紹民(1966~)男，黑龍江佳木斯人，主任醫(yī)師，教授，碩士研究生導(dǎo)師。E-mail:1255013304@qq.com。

基金項目：佳木斯大學研究生創(chuàng)新基金項目，編號：LM2015-036。