宮頸癌組織CX43和Vimentin的表達(dá)與臨床意義研究

李美霞謝書陽(yáng)

1濱州醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院 山東省煙臺(tái)市 264003 2山東省高青縣人民醫(yī)院 山東省高青縣 256300

宮頸癌組織CX43和Vimentin的表達(dá)與臨床意義研究

李美霞1,2謝書陽(yáng)1

1濱州醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院 山東省煙臺(tái)市 264003 2山東省高青縣人民醫(yī)院 山東省高青縣 256300

目的：檢測(cè)正常宮頸組織和CIN及宮頸癌病灶中的CX43和Vimentin表達(dá)水平，分析二者與臨床病理指標(biāo)之間的關(guān)系。方法：收集2014年1月-2015年6月年高青縣人民醫(yī)院婦產(chǎn)科手術(shù)切除的33例宮頸癌、32例CIN及16例正常宮頸組織標(biāo)本作為對(duì)照組，試驗(yàn)對(duì)象術(shù)前均未進(jìn)行化療與放療，且均行HPV檢查。采用免疫熒光與Western Blot方法檢測(cè)CX43和Vimentin在3種組織中的表達(dá)水平。結(jié)果：（1）Cx43在對(duì)照組、CIN（I、II-III及宮頸癌中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為68.8%、66.7%、65%、27.3%，宮頸癌組cx43表達(dá)明顯低于對(duì)照組（p=0.006）；cx43在宮頸癌靜脈侵犯組的表達(dá)率顯著低于未侵犯組：13%VS60%，（p=0.018）；在淋巴結(jié)侵犯組的表達(dá)率顯著低于未侵犯組：9.1%和63.6%，（p=0.004）。（2）Vimentin在對(duì)照組、CIN（I、II-III及宮頸癌中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為12.5%、25%、50%、69.7%，進(jìn)行X2檢驗(yàn)顯示陽(yáng)性表達(dá)率有顯著性差異（p=0.024）；Vimentin在宮頸癌侵犯靜脈組的表達(dá)率顯著高于未侵犯靜脈組：90.9%VS27.3%，（p=0.001）；在宮頸癌淋巴結(jié)侵犯組的表達(dá)率顯著高于淋巴結(jié)未侵犯組：86.4%和36.4%，（p=0.011）。（3）spearman相關(guān)分析顯示cx43與Vimentin的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)（r=-0.485，p=0.004）。結(jié)論：CX43表達(dá)降低和Vimentin表達(dá)增多與宮頸癌惡性程度相關(guān)，Vimentin與CX43的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)聯(lián)系。

宮頸癌；CIN；免疫熒光組織化學(xué)；Western Blotting；CX43；Vimentin

宮頸癌位于乳腺癌之后為第二普遍性癌癥，隨著宮頸癌分子遺傳學(xué)的進(jìn)展已經(jīng)揭示癌癥的形成是多步驟過(guò)程，并且涉及到多種基因的改變。最近的證據(jù)已經(jīng)證明：EMT已經(jīng)被發(fā)現(xiàn)與主要的癌癥類型具有聯(lián)系并且與生性生殖系統(tǒng)癌癥之間的聯(lián)系要比其他癌癥更為普遍[1]。CX43與vimentin是目前研究比較深入的癌癥相關(guān)細(xì)胞因子，在腫瘤增殖、浸潤(rùn)與轉(zhuǎn)移過(guò)程各自發(fā)揮重要的作用，但是在宮頸癌中的兩者的研究比較少見，且與臨床病理特征之間的關(guān)系沒有統(tǒng)一結(jié)論。

1 材料和方法

1.1 臨床研究對(duì)象

收集2014年1月-2015年6月高青縣人民醫(yī)院手術(shù)切除33例宮頸癌、32例CIN及16例正常宮頸組織標(biāo)本，試驗(yàn)對(duì)象術(shù)前均未進(jìn)行化療與放療，且均行HPV檢查。患者平均年齡為（49.5±12.3）歲。歸類如下：宮頸癌33例，其中宮頸癌細(xì)胞侵犯靜脈系統(tǒng)23例，無(wú)侵犯靜脈10例，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移22例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移11例。CINⅠ12例，CINⅡ-Ⅲ20例，以16例正常宮頸組織為對(duì)照。

1.2 主要試劑與方法

Vimentin、CX43免疫熒光試劑盒與Western Blot均購(gòu)自武漢博士德生物工程有限公司。方法按照說(shuō)明書的詳細(xì)步驟進(jìn)行。

1.3 結(jié)果判定

熒光顯微鏡下可見細(xì)胞漿中出現(xiàn)藍(lán)色熒光者為陽(yáng)性細(xì)胞。每張切片陽(yáng)性細(xì)胞分布區(qū)隨機(jī)選取5個(gè)不重復(fù)視野，高倍鏡（×400）下觀察計(jì)數(shù)每個(gè)視野中陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)，并計(jì)算陽(yáng)性率。imageproplus4.10版本的專業(yè)圖像分析軟件進(jìn)行圖像分析，記錄積分光密度。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 Cx43和Vimentin表達(dá)與宮頸癌臨床病理特征的關(guān)系

（1）Cx43在正常宮頸組織、CIN I、Ⅱ-Ⅲ及宮頸癌中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為68.8%、66.7%、65%、27.3%。CIN I、CIN Ⅱ-Ⅲ組與正常宮頸組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（p>0.05）；宮頸癌組cx43表達(dá)明顯低于正常宮頸組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p=0.006）；cx43在宮頸癌侵犯靜脈組與未侵犯靜脈組的陽(yáng)性表達(dá)率分別為13%和60%，組間有顯著性差異（p=0.018）；cx43在宮頸癌侵犯淋巴結(jié)組與未侵犯淋巴結(jié)組的陽(yáng)性表達(dá)率分別為9.1%和63.6%，組間有顯著性差異（p=0.004）。

（2）Vimentin在正常宮頸組織、CIN I、Ⅱ-Ⅲ及宮頸癌中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為12.5%、25%、50%、69.7%，表達(dá)依次增強(qiáng)，對(duì)Vimentin在三種組織中的陽(yáng)性表達(dá)率進(jìn)行X2檢驗(yàn)，Vimentin在三種組織中的陽(yáng)性表達(dá)率有顯著性差異（p=0.024）；Vimentin在宮頸癌侵犯靜脈組與未侵犯靜脈組的陽(yáng)性表達(dá)率分別為90.9%和27.3%，組間有顯著性差異（p=0.001）；Vimentin在宮頸癌侵犯淋巴結(jié)組與未侵犯淋巴結(jié)組的陽(yáng)性表達(dá)率分別為86.4%和36.4%，組間有顯著性差異（p=0.011）。

（3）CX43和Vimentin表達(dá)之間的相關(guān)性分析。對(duì)Vimentin與cx43在宮頸癌中的表達(dá)情況進(jìn)行spearman相關(guān)分析顯示：Vimentin與cx43的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)（r=-0.485，p=0.004）。

2.2 免疫熒光染色及Western Blot結(jié)果顯示

結(jié)果顯示：Cx43在正常宮頸組織、CIN I、CIN Ⅱ-Ⅲ及宮頸癌中的蛋白表達(dá)逐漸降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05）；Vimentin在正常宮頸組織、CIN I、CINⅡ-Ⅲ及宮頸癌中的蛋白表達(dá)逐漸升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05）。

3 討論

宮頸癌EMT過(guò)程中涉及到的連接蛋白類可能相互矛盾。但對(duì)于CX-43而言這好像比較特殊，CX-43在本文中得到廣泛的研究。然而當(dāng)EMT被考慮分為不同階段時(shí)，有些粘附性能夠以不同的形式被發(fā)現(xiàn)并且明顯的矛盾，在侵襲過(guò)程中連接蛋白所具有的作用。確實(shí)，EMT的第一個(gè)階段可允許侵襲性細(xì)胞從最初的腫瘤中進(jìn)行分離是鈣粘著糖蛋白的依賴性細(xì)胞-細(xì)胞粘附力的丟失和特異性細(xì)胞-基質(zhì)粘附力的建立的結(jié)果[2]。在這個(gè)階段有可能出現(xiàn)在E-鈣粘著糖蛋白和N-鈣粘著糖蛋白之間的這種轉(zhuǎn)換，并且經(jīng)常伴隨著交界性斑塊的丟失，這與GJIC的丟失是相互聯(lián)系的。通過(guò)整合素與ECM連接會(huì)出現(xiàn)允許CX-43表達(dá)的維持，這與或多或少的極化的交界斑相聯(lián)系。在這一點(diǎn)上，功能性GJIC好像在腫瘤細(xì)胞與間質(zhì)細(xì)胞之間建立異型細(xì)胞性GJIC。反過(guò)來(lái)說(shuō)，激活微環(huán)境對(duì)于癌癥細(xì)胞侵襲一個(gè)決定性的步驟。這種腫瘤旁間質(zhì)的激活允許間質(zhì)蛋白水解酶的分泌和激活，間質(zhì)蛋白水解酶在ECM內(nèi)有助于腫瘤細(xì)胞侵襲，在這個(gè)時(shí)間點(diǎn)，當(dāng)侵襲過(guò)程導(dǎo)致肌動(dòng)蛋白纖維和腫瘤細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)的重新組成，支架蛋白通過(guò)CX43-ct和/或半通道所起到的功能，可能更有助于由ECM降解所介導(dǎo)的侵襲過(guò)程。這種猜想可能被在平面遷移過(guò)程ECM沒有細(xì)胞間降解，在一個(gè)平面CX-43并沒有表現(xiàn)出本質(zhì)的事實(shí)所支持。然而當(dāng)ECM在侵襲性細(xì)胞中轉(zhuǎn)變?yōu)楣潭ú粍?dòng)的細(xì)胞，CX-43好像能夠在轉(zhuǎn)錄、翻譯或翻譯后的水平進(jìn)行不同的類型的調(diào)節(jié)，允許它們?cè)谫|(zhì)膜（脂筏）的triron不溶性結(jié)構(gòu)的定位[3]。

波形蛋白被報(bào)道可以通過(guò)由PI3K/AKt和Erk1/2信號(hào)通路所介導(dǎo)的EGFR的激活進(jìn)行上調(diào)，這在卵巢癌的細(xì)胞遷移和侵襲侵潤(rùn)過(guò)程和發(fā)展過(guò)程中起到了重要的作用[4]。在宮頸癌中，波形蛋白表達(dá)水平的上調(diào)與EGFR的過(guò)度表達(dá)相聯(lián)系，作為宮頸癌細(xì)胞侵潤(rùn)的潛在的刺激因素曾經(jīng)被報(bào)道過(guò)。據(jù)報(bào)道，在VIM的啟動(dòng)子區(qū)域產(chǎn)生超甲基化可激活宮頸癌細(xì)胞的增殖和遷移。波形蛋白在子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞中也被報(bào)道呈過(guò)度表達(dá)狀態(tài)，在子宮內(nèi)膜癌中癌癥相關(guān)性或纖維細(xì)胞可通過(guò)PI3K/AKt和MAPK/ Erk通路誘導(dǎo)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞增殖[5]。

（通訊作者：謝書陽(yáng)）

[1]Jongen W,Fitzgerald D,Asamoto M,et al.Regulation of connexin 43-mediated gap junctional intercellular communication by Ca2+ in mouse epidermal cells is controlled by E-cadherin[J].Cell Biol,1991,114,545-555.

[2]Meyer R,Laird D,Revel JP.Inhibition of gap junction and adherens junction assembly by connexin and A-CAM antibodies[J]. Cell Biol,1992,119,179-189.

[3]Wang Y,Rose B.An inhibition of gap-junctional communication by cadherins[J].Cell Sci,1997,110,301-309.

[4]Hernandez-Blazquez F,Joazeiro P,Omori Y.Control of intracellular movement of connexines by E-cadherin in murine skin papilloma cells[J].Exp Cell Res,2001,270,235-247.

[5]Nambara C,Kawasaki Y,Yamasaki H.Role of the cytoplasmic loop domainof Cx43 in its intracellular localization and function: possible interaction with cadherin[J].Membr Biol,2007,217,63-69.

李美霞（1981-），女，山東省壽光市人。大學(xué)本科學(xué)歷。現(xiàn)為主治醫(yī)師。主要研究宮頸癌的治療與預(yù)防。