頂空氣相色譜法測(cè)定頭孢曲松鈉中三乙胺殘留量

魏永紅，馮　翎，宋世丘(.麗珠集團(tuán)麗珠合成制藥有限公司質(zhì)量控制部，廣東 珠海　59030； .麗珠集團(tuán)麗珠合成制藥有限公司質(zhì)量保證部,廣東 珠?！?9030)

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頂空氣相色譜法測(cè)定頭孢曲松鈉中三乙胺殘留量

魏永紅1*，馮翎2，宋世丘1(1.麗珠集團(tuán)麗珠合成制藥有限公司質(zhì)量控制部，廣東 珠海519030； 2.麗珠集團(tuán)麗珠合成制藥有限公司質(zhì)量保證部,廣東 珠海519030)

DOI10.14009/j.issn.1672-2124.2016.02.020

摘要目的：建立頂空氣相色譜法測(cè)定頭孢曲松鈉原料藥中三乙胺殘留量的方法。方法：以氫氧化鈉溶液為溶劑，采用頂空毛細(xì)管氣相色譜法，用DB-624毛細(xì)管柱進(jìn)行梯度升溫方式分離，以氮?dú)鉃檩d氣，氫火焰離子化檢測(cè)器測(cè)定三乙胺殘留量。結(jié)果：在上述色譜條件下三乙胺質(zhì)量濃度在考察范圍內(nèi)與峰面積具有良好的線性關(guān)系(R2=0.999)，平均回收率為98%～105%，精密度RSD均<5%，最低檢測(cè)限為0.03 μg/ml，定量限為0.15 μg/ml。結(jié)論：本法簡(jiǎn)單、靈敏、準(zhǔn)確，適用于頭孢曲松鈉中三乙胺殘留量的測(cè)定。

關(guān)鍵詞頂空氣相色譜； 頭孢曲松鈉； 三乙胺

Determination of Residual Triethylamine in Ceftriaxone Sodium by Headspace Gas Chromatography Method

WEI Yonghong，F(xiàn)ENG Ling，SONG Shiqiu(1.Quality Control Unit，Livzon Pharmaceutical Group Inc.，Guangdong Zhuhai 519030，China； 2.Quality Assurance Unit,Livzon Pharmaceutical Group Inc.，Guangdong Zhuhai 519030，China)

ABSTRACTOBJECTIVE：To establish headspace gas chromatography method to determine residual triethylamine in ceftriaxone sodium (CTR). METHODS：Sodium hydroxide solution was set as solvent，headspace gas chromatography method was adopted，DB-624 capillary column separation was conducted with gradient heating way；and nitrogen was set as carrier gas，F(xiàn)ID detector was used to detect the residual triethylamine. RESULTS：Under chromatographic conditions， the concentration of triethylamine within the scope of the investigation and the peak area were in good linear relationship (R2=0.999)，the average recovery was 98%～105%，the precision ofRSD<5%，with the lowest detection limit of 0.03 μg/ml and quantitative limit of 0.15 μg/ml. CONCLUSIONS：The method is simple，sensitive and accurate，suitable for the determination of residual triethylamine in ceftriaxone sodium.

KEYWORDSHeadspace gas chromatography； Ceftriaxone sodium； Triethylamine

頭孢曲松鈉為目前國(guó)內(nèi)抗菌藥物中的基礎(chǔ)一線用藥，其不良反應(yīng)發(fā)生率較其他頭孢類稍高[1-2]，但價(jià)格較低，臨床廣泛使用。頭孢曲松鈉的合成工藝中主要用到乙醇、丙酮、乙酸乙酯、乙腈、二氯甲烷、三乙胺等有機(jī)溶劑，目前除三乙胺外其他溶劑均有法定的標(biāo)準(zhǔn)和檢驗(yàn)方法[3]，且也有文獻(xiàn)報(bào)道除三乙胺外的其他溶劑的檢驗(yàn)方法[4-5]。雖然三乙胺的限度標(biāo)準(zhǔn)在《美國(guó)藥典》《歐洲藥典》《中國(guó)藥典》的正文均沒(méi)有硬性規(guī)定，但均在凡例中要求凡工藝用到的溶劑需檢驗(yàn)[6-8]。由于三乙胺具有助溶和輕度的防腐作用，因此需要控制其殘留限度，且其限度(質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.32×10-3)也已收載于《EDQM關(guān)于化學(xué)純度和微生物質(zhì)量方面的文檔要求》，因此有必要對(duì)其殘留量進(jìn)行考察。因頭孢曲松鈉會(huì)和三乙胺結(jié)合，導(dǎo)致其殘留測(cè)定具有較大難度。本研究參照《中國(guó)藥典2部》(2010年版)附錄殘留溶劑檢查法[9]，并結(jié)合其他藥典的要求[10-11]，建立了一種簡(jiǎn)單、靈敏、準(zhǔn)確的三乙胺殘留量檢測(cè)方法。

1材料

1.1儀器

Agilent 7890A(美國(guó)Agilent公司)，氫火焰離子化檢測(cè)器(FID)；Agilent 1888頂空進(jìn)樣器；德國(guó)沙多利斯電子天平。

1.2藥品與試劑

頭孢曲松鈉(麗珠集團(tuán)麗珠合成制藥有限公司，批號(hào)：91203006～009)；三乙胺(天津富宇精細(xì)化工有限公司 ，AR，批號(hào)110415910)；氫氧化鈉(國(guó)藥集團(tuán)藥業(yè)股份有限公司，AR，批號(hào)1110627901)；二甲基甲酰胺(DMF)(天津富宇精細(xì)化工有限公司 ，AR，批號(hào)100420)；水為純化水。

1.3色譜條件

頂空瓶平衡溫度100 ℃；熱平衡時(shí)間30 min；定量環(huán)溫度105 ℃；進(jìn)樣時(shí)間1 min；進(jìn)樣體積1.0 ml；色譜柱DB-624 30 m×0.32 mm×1.8 um；柱溫起始溫度為60 ℃，后以20 ℃/min升溫至150 ℃，保持3 min，再以60 ℃/min,升溫至220 ℃，保持2 min；進(jìn)樣口溫度200 ℃；柱流量1.0 ml/min；分流比30∶1；載氣為氮?dú)釴2；FID檢測(cè)器；檢測(cè)器溫度250 ℃。

1.4試驗(yàn)溶液的配制

取三乙胺適量用DMF制成約0.06 mg/ml的對(duì)照品貯備液，再精密量取其1 ml置于頂空瓶中，加DMF 1 ml、水0.5 ml、1 mol/L的氫氧化鈉(NaOH)溶液0.5 ml，混勻，軋蓋密封為對(duì)照品溶液；取供試品適量制成0.2 g/ml的供試品貯備液，再取其0.5 ml置于頂空瓶中，同對(duì)照品溶液的制備方法操作制成供試品溶液；另同法制備空白對(duì)照溶液。

2結(jié)果

2.1系統(tǒng)適用性試驗(yàn)及專屬性試驗(yàn)

取對(duì)照品溶液和空白對(duì)照溶液分別置頂空儀中，依法進(jìn)樣，記錄色譜圖(空白對(duì)照溶液圖譜見(jiàn)圖1～2，對(duì)照品溶液圖譜見(jiàn)圖3)。其中，三乙胺峰理論塔板數(shù)為142 120，其與相鄰雜質(zhì)峰分離度為30.4，表明本法系統(tǒng)適用性試驗(yàn)及專屬性試驗(yàn)均符合要求。

圖1　空白對(duì)照溶液(DMF+水+NaOH)圖Fig 1　Blank reference solution(DMF+water+NaOH)

圖2　空白對(duì)照溶液(DMF+水)圖Fig 2　Blank reference solution(DMF+water)

圖3　系統(tǒng)適用性試驗(yàn)(DMF+水+NaOH+三乙胺)典型圖Fig 3　System suitability test(DMF+water+NaOH+triethylamine)

2.2精密度試驗(yàn)

取對(duì)照品溶液6份，依法重復(fù)進(jìn)樣，測(cè)定三乙胺的峰面積，結(jié)果RSD值為0.6%，表明方法精密度很好。

2.3準(zhǔn)確度試驗(yàn)

取一批待測(cè)樣品，制成供試品溶液，依法進(jìn)樣記錄色譜圖，按外標(biāo)法計(jì)算供試品溶液中三乙胺濃度。

另取供試品貯備液3份，依法加三乙胺制成約含三乙胺80%、100%、120%的濃度。每個(gè)濃度配制3份，依法檢測(cè)并記錄色譜圖，按標(biāo)準(zhǔn)加入法計(jì)算供試品溶液中加入的三乙胺組份的濃度，并計(jì)算其回收率。結(jié)果80%組平均回收率為98.0%，RSD為3.0%；100%組平均回收率為103.7%，RSD為4.1%； 120%組平均回收率為104.9%，RSD為2.9%；3組平均回收率均在95%～105%之內(nèi)，符合殘留溶劑準(zhǔn)確度的要求。

2.4線性范圍試驗(yàn)

分別取對(duì)照品貯備液適量，依法分別配制成相當(dāng)于對(duì)照品溶液濃度的5%、10%、30%、50%、80%、100%、120%和150%的溶液，依法檢測(cè)記錄色譜圖，按峰面積歸一化法計(jì)算供試品溶液中增加的三乙胺峰面積為縱坐標(biāo)，以三乙胺的濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果顯示，三乙胺濃度在1～30 μg/ml濃度范圍內(nèi)呈線性關(guān)系，線性回歸方程為Y=4.350 0X-4.315 0，相關(guān)系數(shù)為R2=0.999 0，三乙胺的濃度與峰面積的線性關(guān)系良好。

2.5檢出限與定量限測(cè)定

取三乙胺適量，依法逐級(jí)稀釋成不同濃度的測(cè)試溶液測(cè)定，記錄色譜圖。按信噪比S/N=10.0±1.0時(shí)的定量限濃度為0.15 μg/ml；S/N=3.0±1.0時(shí)的檢出限濃度為0.03 μg/ml。

3討論

3.1進(jìn)樣方式選擇

頭孢曲松鈉在水中易溶，在三氯甲烷(CHCl3)或乙醚中幾乎不溶；而三乙胺微溶于水，曾考慮用CHCl3等有機(jī)溶劑萃取頭孢曲松鈉中三乙胺[12-13]，但萃取操作較復(fù)雜，且萃取劑毒性較大；考慮到三乙胺的沸點(diǎn)不高可采用頂空進(jìn)樣法測(cè)定[14]，且頂空進(jìn)樣法測(cè)定殘留溶劑操作簡(jiǎn)單，基質(zhì)對(duì)測(cè)定無(wú)干擾，對(duì)儀器、系統(tǒng)污染小。

3.2溶解介質(zhì)選擇

三乙胺是有機(jī)堿，其沸點(diǎn)約90 ℃，如果全用水為溶解介質(zhì)，其不易從供試品中揮發(fā)?？紤]到三乙胺和DMF可以混溶，因此，加入DMF作為溶劑，以使樣品溶液混合更均勻[15]。

另外，通過(guò)試驗(yàn)和分析頭孢曲松鈉及三乙胺的化學(xué)結(jié)構(gòu)發(fā)現(xiàn)：由于頭孢曲松鈉和三乙胺會(huì)結(jié)合，導(dǎo)致只用水和DMF做溶劑時(shí)樣品的加標(biāo)回收率均為0，因此必須用堿破壞頭孢曲松鈉的結(jié)構(gòu)后進(jìn)樣方可出三乙胺峰。通過(guò)測(cè)試不同濃度下不同體積的NaOH(0.1、0.5、1 mol/L)出峰情況發(fā)現(xiàn)：NaOH雖會(huì)改變DMF的峰型，但是對(duì)三乙胺的定量影響微小，低濃度的NaOH不能使加了三乙胺的頭孢曲松鈉溶液完全釋放出三乙胺，而高濃度的NaOH的量太多又對(duì)儀器和色譜柱的損害加大，故選擇1.0 mol/L NaOH溶液0.5 ml為溶解介質(zhì)，用以增大三乙胺的檢測(cè)靈敏度。

3.3色譜柱選擇

三乙胺為含氮堿性化合物[16]，因此采用弱極性的色譜柱DB-624進(jìn)行分析，三乙胺峰與相鄰峰之間的分離度均能符合要求，且方法重現(xiàn)性好，檢測(cè)靈敏度高，非常適合三乙胺殘留量測(cè)定，因此選用DB-624石英毛細(xì)管柱。

3.4頂空平衡溫度和時(shí)間選擇

選擇了80、90、100、110、120 ℃的5個(gè)頂空平衡溫度分別進(jìn)行平衡20 min和30 min的試驗(yàn)測(cè)定表明：平衡時(shí)間30 min比20 min的重現(xiàn)性更好；平衡溫度80 ℃和90 ℃的三乙胺的峰面積較小，而高溫度的峰面積相應(yīng)較大，鑒于110 ℃和120 ℃的峰面積相較于100 ℃無(wú)太明顯優(yōu)勢(shì)，且考慮樣品溶液中有0.25倍體積的水，不適用太高溫度的頂空條件，因此，選擇100 ℃頂空平衡30 min的條件。

3.5柱溫選擇

因DMF沸點(diǎn)約150 ℃且較難洗脫，而三乙胺沸點(diǎn)約90 ℃，因此采用程序升溫的方法操作，一方面可以保證三乙胺的分離效果，另一方面也較容易去除DMF的殘留。

4結(jié)論

本研究建立的頭孢曲松鈉中三乙胺殘留測(cè)定方法操作簡(jiǎn)單，避免了三乙胺與頭孢曲松鈉的結(jié)合而導(dǎo)致的不出峰情況，同時(shí)，檢測(cè)的線性范圍廣，靈敏度很高，檢測(cè)的準(zhǔn)確度和精密度良好，非常適用于頭孢曲松鈉中三乙胺的殘留檢測(cè)。

參考文獻(xiàn)

[1]萬(wàn)春燕，劉秀娟，鄧劍雄，等.2181例頭孢曲松鈉不良反應(yīng)報(bào)告分析[J].廣東藥學(xué)院學(xué)報(bào)，2010，26(4)：404-408.

[2]卞蓉蓉，孫駿. 6916例頭孢曲松鈉不良反應(yīng)報(bào)告分析[J].醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報(bào)，2012,25(6)：628-630.

[3]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典2部[S].2010年版.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010:181-183.

[4]游飛明.頂空氣相色譜法測(cè)定頭孢曲松鈉中多種溶劑殘留量[J].福建分析測(cè)試，2007,16(1)：15-17.

[5]陳飛，陳華嬌.頂空氣相色譜法測(cè)定頭孢曲松鈉中有機(jī)溶劑的殘留[J].福建分析測(cè)試，2010,19(3)：49-52.

[6]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典2部[S]：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2010:凡例 XIV.

[7]U.S.Pharmacopeia National Formulary. USP-37 NF 33. United Book Press,Inc.,Baltimore,MD. General Notices and Requirements 5.60.Impurities and Foreign Substances:6.

[8]European Directorate for the Quality of Medicines & HealthCare. European Pharmacopoeia 8.2. Druckerei C.H.Beck,N?rdlingen(Germany).1.General notices:3897-3904.

[9]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典2部[S]:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2010:附錄ⅧP.

[10]U.S.Pharmacopeia National Formulary. USP-37 NF 33. United Book Press,Inc.,Baltimore,MD. <467 >RESIDUAL SOLVENTS:309-325.

[11]European Directorate for the Quality of Medicines & HealthCare. European Pharmacopoeia 8.0 Druckerei C.H.Beck,N?rdlingen(Germany). 5.4. Residual solvents:639-646.

[12]李紅影，孫穎麗.氣相色譜法測(cè)定頭孢唑林鈉中三乙胺的殘留量[J].黑龍江科技信息，2009，3(7)：182.

[13]姜小林，傅志慧，應(yīng)志洪，等.氣相色譜法測(cè)定奧美拉唑中三乙胺殘留[J].化工生產(chǎn)與技術(shù)，2014，21(3)：27-28.

[14]郭瑞,王惠群,楊春巧,等.頂空氣相色譜法測(cè)定鹽酸頭孢替安中三乙胺殘留量[J].河北化工,2011(5): 34-57.

[15]劉珊，陳貴斌，洪利婭.頂空進(jìn)樣氣相色譜法測(cè)定克林霉素磷酸酯中三乙胺殘留量[J].中國(guó)抗生素雜志，2014，39(3)：217-219.

[16]中國(guó)藥品生物制品檢定所，中國(guó)藥品檢驗(yàn)總所.中國(guó)藥品檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)范.氣相色譜法[M].2010年版.中國(guó)醫(yī)藥科技出版社, 2010：94-104.

(收稿日期：2015-08-26)

中圖分類號(hào)R978.1

文獻(xiàn)標(biāo)志碼A

文章編號(hào)1672-2124(2016)02-0196-03

*助理工程師。研究方向：藥物分析。E-mail:weihong57@qq.com