天然冰片、冰片和艾片的鑒別Δ

李海艷，楊　全，龐玉新，胡　璇，吳麗芬1,，鄒　婧1,(1.廣東藥學(xué)院中藥學(xué)院，廣東 廣州　510006； 2.中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院熱帶作物品種資源研究所，農(nóng)業(yè)部華南作物基因資源與種質(zhì)創(chuàng)制重點(diǎn)開放實(shí)驗(yàn)室，海南 儋州　571737； 3.海南省艾納香工程技術(shù)研究中心，海南 儋州　571737)

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天然冰片、冰片和艾片的鑒別Δ

李海艷1,2,3*，楊全1 #，龐玉新2,3，胡璇2,3，吳麗芬1,2,3，鄒婧1,2,3(1.廣東藥學(xué)院中藥學(xué)院，廣東 廣州510006； 2.中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院熱帶作物品種資源研究所，農(nóng)業(yè)部華南作物基因資源與種質(zhì)創(chuàng)制重點(diǎn)開放實(shí)驗(yàn)室，海南 儋州571737； 3.海南省艾納香工程技術(shù)研究中心，海南 儋州571737)

DOI10.14009/j.issn.1672-2124.2016.02.017

摘要目的:分析天然冰片、冰片和艾片的鑒別方法，為其質(zhì)量控制及合理應(yīng)用提供參考。方法：采用性狀鑒別、薄層鑒別、旋光測定及氣相色譜法對天然冰片、冰片和艾片進(jìn)行鑒別。結(jié)果：天然冰片、冰片和艾片的藥材性狀相似度較大，但在形狀大小和色澤方面存在微小差異；天然冰片和艾片的薄層色譜及氣相色譜較接近，但冰片與二者有明顯區(qū)別；三者的旋光度有較大差異。結(jié)論：綜合性狀鑒別、薄層鑒別、旋光測定和氣相色譜鑒定分析，可以達(dá)到區(qū)分、檢測天然冰片、冰片和艾片的目的，為其質(zhì)量控制及合理應(yīng)用提供參考依據(jù)。

關(guān)鍵詞天然冰片； 冰片； 艾片； 性狀鑒定； 薄層鑒定； 旋光測定； 氣相色譜分析

Identification of Borneolum，Borneolum Syntheticum and L-BorneolumΔ

LI Haiyan1，2，3， YANG Quan1， PANG Yuxin2，3， HU Xuan2，3， WU lifen1，2，3， ZOU Jing1，2，3(1.School of Traditional Chinese Medicine，Guangdong Pharmaceutical University，Guangdong Guangzhou 510006，China； 2.Tropical Crops Genetic Resources Institute，Chinese Academy of Tropical Agricultural Sciences/Key Laboratory of Crop Gene Resources and Germplasm Enhancement in Southern China，Hainan Danzhou 571737，China； 3.Hainan Provincial Engineering Research Center for Blumea balsamifera，Hainan Danzhou 571737，China)

ABSTRACTOBJECTIVE：To analyze the identification method of borneolum，borneolum syntheticum and l-borneolum， and to provide reference for the quality control and rational application. METHODS：Method of macroscopy identification， thin-layer identification，polarimetry and gas chromatography were used to identify borneolum，borneolum syntheticum， l-borneolum. RESULTS：The medicinal properties of borneolum，borneolum syntheticum and l-borneolum were similar， but the shape，size and color had tiny differences.The thin-layer identification and gas chromatography of borneolum and l-borneolum was similar，but there was a clear difference between these two and borneolum syntheticum.And specific rotation of the three has a bigger difference. CONCLUSIONS：The method of macroscopy identification， thin-layer identification，polarimetry and gas chromatography could distinguish borneolum，borneolum syntheticum， l-borneolum，and provide reference for the quality control and rational application.

KEYWORDSBorneolum； Borneolum Syntheticum； L-Borneolum； Macroscopy identification； Thin-layer identification； Polarimetry； Gas chromatography analysis

冰片為常用芳香開竅類中藥，具開竅醒神、清熱止痛的功效，在醫(yī)藥[1-3]、日用化工[4]、美容護(hù)膚[5]和食品[6]等領(lǐng)域都有應(yīng)用。根據(jù)2010版《中國藥典》規(guī)定[7]，冰片有三種來源，包括天然冰片、冰片和艾片。其中，天然冰片為樟科植物樟的新鮮枝、葉經(jīng)提取加工制成的結(jié)晶，主要成分為右旋龍腦；艾片為菊科植物艾納香新鮮葉的提取加工制成品，主要成分為左旋龍腦；合成冰片是用分餾松節(jié)油所得的α-蒎烯酯化合成或?qū)⒄聊X與二氧化碳、鈉右苯反應(yīng)生成異龍腦[8]。三種冰片來源不一，其外觀性狀、理化性狀、旋光特性及主要化學(xué)成分都不盡相同，采用個別鑒定方法對冰片的鑒定分析研究已有一些報道[9-13]，但尚缺乏較詳細(xì)的系統(tǒng)研究。本研究擬從外觀性狀、薄層鑒定、旋光度測定及含量分析等幾方面綜合對天然冰片、冰片和艾片進(jìn)行對比鑒別，為其質(zhì)量控制及合理應(yīng)用提供參考依據(jù)。

1材料

1.1儀器

WZZ-2S 自動數(shù)顯旋光儀(上海精密儀器有限公司)；電子天平(Sartorius公司)；安捷倫7890A氣相分析儀(配有氫火焰離子化檢測器FID)。

1.2藥品與試劑

硅膠G預(yù)制板(青島海洋化工分廠)；天然冰片(吉安市林科天然冰片廠，批號140719)；冰片(四川青神康華制藥有限公司，批號140704)；艾片(湖北俊輝醫(yī)藥公司，批號2014120102)；對照品龍腦(東京化成工業(yè)株式會社,批號201307，純度≥98.0%)；異龍腦(中國食品藥品檢定研究院，批號111512-200802，純度≥97. 5%)；樟腦(Aladdin 公司，批號21506，純度≥98.0%)；內(nèi)標(biāo)物水楊酸甲酯(天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所，批號201304，純度≥99.5%)；乙酸乙酯為色譜純；其余試劑均為分析純。

2方法與結(jié)果

2.1性狀鑒定

天然冰片、冰片、艾片性狀外觀極為相似，均為半透明塊狀白色結(jié)晶，均具有香氣，但也存在一定的差異，如圖1，性狀鑒定結(jié)果見表1。

圖1　天然冰片、冰片和艾片外觀圖Fig 1　Exterior view of Borneolum, borneolum syntheticum and l-borneolum

性狀天然冰片冰片艾片形狀片狀或塊狀結(jié)晶片狀結(jié)晶塊狀或顆粒結(jié)晶大小直徑2～13mm,厚1～5mm直徑1～10mm,厚0.5～2mm直徑2～8mm,厚1～4mm色澤白色白色白色質(zhì)地稍硬而脆,手捻不易碎較疏松而脆,手捻即粉碎緊密而脆,手捻可粉碎氣味氣芳香,清涼味較弱氣芳香,清涼味濃烈氣芳香,清涼味較濃烈水試幾乎不溶幾乎不溶幾乎不溶火試有濃煙有濃煙有黑煙

2.2薄層鑒定

分別取天然冰片、冰片和艾片5 mg，加乙醇2 ml使溶解，作為天然冰片、冰片和艾片供試品溶液。另取龍腦對照品，加乙醇制成每1 ml含2 mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(附錄ⅥB)試驗(yàn)[14]，吸取上述三種供試品溶液和對照品溶液各2～5 μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-乙酸乙酯(V∶V=17∶3)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105 ℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的紫色斑點(diǎn)，如圖2所示。

1.天然冰片；2.冰片；3.艾片；4.龍腦；5.異龍腦1.borneolum；2.borneolum syntheticum；3.l-borneolum；4.borneol；5.isoborneol圖2　天然冰片、冰片、艾片薄層色譜圖Fig 2　Thin-layer identification of borneolum, borneolum syntheticum and l-borneolum

2.3旋光測定

按《中國藥典》2010版一部附錄ⅦE旋光度測定法[15]，在23 ℃的條件下，分別取天然冰片、冰片和艾片適量，精密稱定，加乙醇制成每1 ml含0.1 g的溶液，以乙醇作空白校正，置于旋光計(jì)內(nèi)檢測讀數(shù)，得旋光度，照下列公式計(jì)算，即得樣品比旋度，測定結(jié)果見表2。

式中：[α]為比旋度；D為鈉光譜的D線；t為測定時的溫度(℃)；l為測定管長度(dm)；α為測得的旋光度；c為每100 ml溶液中含有被測物質(zhì)的質(zhì)量(按干燥品或無水物計(jì)算，g)。由表2數(shù)據(jù)可知，天然冰片的主要成分為右旋龍腦，其比旋度為(+35.1°)。冰片為消旋龍腦，其比旋度為0°。艾片為左旋龍腦，其比旋度為(-37.8°)。三者成分各異，旋光不同，可以應(yīng)用旋光測定進(jìn)行天然冰片、冰片和艾片之間的鑒別。

2.4氣相色譜分析

2.4.1色譜條件:色譜柱為Agilent HP-5毛細(xì)管柱(30 m×0.32 mm，0.25 μm)；升溫程序：80 ℃保持3 min，以5 ℃/min升溫至120 ℃；再以20 ℃/min升至180 ℃；分流比9∶1；FID檢測器溫度 250 ℃；進(jìn)樣口溫度220 ℃；載氣為高純氮?dú)?，體積流量25 ml/min，空氣體積流量400 ml/min，氫氣體積流量30 ml/min；進(jìn)樣量 1.0 μl。

表2　天然冰片、冰片和艾片的比旋度結(jié)果

注： 測定管長度為20 cm

Note：measuring tube length is 20 cm

2.4.2對照品、供試品及內(nèi)標(biāo)溶液的制備:混合對照品儲備液：分別精密稱取龍腦、異龍腦、樟腦對照品適量，以乙酸乙酯溶解并定容，制成龍腦、異龍腦、樟腦質(zhì)量濃度分別為2.072、1.190、2.098 mg/ml的混合液，作為混合對照品儲備液。供試品溶液：分別取樣品天然冰片、艾片約50 mg，冰片約75 mg，精密稱定，以乙酸乙酯溶解，置10 ml量瓶定容即得。內(nèi)標(biāo)溶液：精密量取水楊酸甲酯1.00 462 g，以乙酸乙酯溶解，置100 ml量瓶定容，作為內(nèi)標(biāo)溶液。

2.4.3適應(yīng)性:選用水楊酸甲酯為內(nèi)標(biāo)，龍腦、異龍腦、樟腦和內(nèi)標(biāo)物水楊酸甲酯的分離度均>4，水楊酸甲酯與各對照品較好地分離，加內(nèi)標(biāo)對照品和加內(nèi)標(biāo)供試品的GC圖譜見圖3。各物質(zhì)的保留時間均在6 min內(nèi)，測定速度較快。以龍腦、異龍腦、樟腦和水楊酸甲酯色譜峰計(jì)算的理論塔板數(shù)分別為23 086、20 045、23 046、23 116、23 124和26 476，遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于《中國藥典》2010年版規(guī)定的理論塔板數(shù)超過3 000的要求。

1. 樟腦；2.異龍腦；3.龍腦；4.水楊酸甲酯1.camphor；2. Isoborneol；3.borneol；4. methyl salicylate圖3　混合對照品(A)；加標(biāo)天然冰片(B)；加標(biāo)冰片(C)；加標(biāo)艾片(D)GC圖Fig 3　Hybrid reference substance(A), marked borneolum(B), marked borneolum syntheticum (C) and marked l-borneolum(D)

2.4.4線性關(guān)系考察:精密量取混合對照品儲備液0.1、0.2、0.4、1.0、2.0、4.0 ml，分別置10 ml容量瓶中，再加入1.0 ml內(nèi)標(biāo)溶液，加乙酸乙酯稀釋并定容，搖勻，分別進(jìn)樣測定，每次1.0 μl。以各對照品與內(nèi)標(biāo)物的峰面積比為橫坐標(biāo)(X)，對照品與內(nèi)標(biāo)物的質(zhì)量濃度比為縱坐標(biāo)(Y)進(jìn)行線性回歸，計(jì)算回歸方程。龍腦、異龍腦、樟腦的線性關(guān)系結(jié)果見表3。

表3　3種對照品線性回歸方程相關(guān)系數(shù)、線性范圍

2.4.5精密度試驗(yàn)：對同一加內(nèi)標(biāo)對照品儲備液連續(xù)測定6次，結(jié)果龍腦、異龍腦、樟腦與內(nèi)標(biāo)物的峰面積比的RSD分別為1.11%、0.22%、0.12%。

2.4.6重復(fù)性試驗(yàn)：分別取天然冰片、冰片、艾片樣品5份，平行制備加內(nèi)標(biāo)供試品溶液，測定，結(jié)果天然冰片中龍腦、樟腦的平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)的RSD分別為2.05%、2.51%；合成冰片中異龍腦、龍腦的平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)的RSD分別為0.62%、0.71%；艾片中龍腦、樟腦的平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)的RSD分別為2.26%、2.53%。

2.4.7穩(wěn)定性試驗(yàn)：分別在0、0.5、1、2、4、8、16、24 h對加內(nèi)標(biāo)供試品溶液進(jìn)行測定，結(jié)果天然冰片中龍腦、樟腦與內(nèi)標(biāo)峰面積比的RSD分別為0.70%、1.15%；冰片中異龍腦、龍腦與內(nèi)標(biāo)峰面積比的RSD分別為0.91%、0.58%；艾片中龍腦、樟腦與內(nèi)標(biāo)峰面積比的RSD分別為0.39%、0.95%，結(jié)果說明被測溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.4.8加樣回收率試驗(yàn)：分別精密稱定樣品天然冰片、冰片、艾片約25 mg，各9份，分別置10 ml量瓶中，3份為1組作為一個水平的平行樣，每組分別精密加入對照品混合儲備液0.5、1.0、1.5 ml，每個量瓶中加入內(nèi)標(biāo)溶液1.0 ml，加乙酸乙酯稀釋并定容，搖勻，每個樣平行測定3次，測定各成分的含量，計(jì)算得天然冰片中龍腦、樟腦的平均回收率分別為99.88%、102.07%，RSD分別為1.27%、1.94%；冰片中異龍腦、龍腦的平均回收率分別為96.13%、95.43%，RSD分別為1.37%、1.77%；艾片中龍腦、樟腦的平均回收率分別為96.82%、100.99%，RSD分別為1.83%、1.37%。

2.4.9樣品測定：精密稱定樣品天然冰片、冰片、艾片50 mg，置10 ml量瓶，加乙酸乙酯稀釋并定容，搖勻，再精密量取1 ml至10 ml量瓶中，加入1 ml內(nèi)標(biāo)溶液，加乙酸乙酯稀釋并定容，搖勻，進(jìn)樣測定，進(jìn)樣量為1.0 μl，每個樣品平行測定3份，各成分測定結(jié)果見表4。

表4　天然冰片、冰片、艾片含量測定結(jié)果(n=6，RSD<3%)

注：“—”表示無相關(guān)數(shù)據(jù)

Note: “—” stands for no relevant data available

3討論

本試驗(yàn)通過對天然冰片、冰片、艾片的性狀、薄層、旋光性和氣相色譜多方面的鑒別比較，顯示出三種冰片藥材的區(qū)別特征。

在藥材性狀方面，天然冰片、冰片和艾片冰片的相似度較大，其氣味、質(zhì)地、水試、火試都難以區(qū)分，但天然冰片多為塊狀，冰片多為片狀，艾片多為顆粒狀，三者的大小和色澤也存在微小差異。單獨(dú)以性狀鑒別可以區(qū)分三種冰片，但難度較大。

天然冰片和艾片的薄層色譜較接近，均只有一個以龍腦對應(yīng)的斑點(diǎn)，但冰片與二者有明顯區(qū)別，具有兩個斑點(diǎn)，一個以龍腦對應(yīng)，一個以異龍腦對應(yīng)。通過薄層色譜法可以鑒別冰片，但難以區(qū)分天然冰片和艾片。

由于三種冰片來源不一，其主要化學(xué)成分存在一定差異，天然冰片中的龍腦為右旋，冰片中的龍腦為消旋，艾片中的龍腦為左旋，因此，三者的旋光度有較大差異，可以通過測定旋光度區(qū)分三種冰片。氣相色譜分析結(jié)果也為天然冰片、冰片和艾片的鑒定分析提供了可靠的信息。從分析結(jié)果可以看出，天然冰片和艾片僅含有龍腦和樟腦，而不含異龍腦；而冰片同時含有龍腦和異龍腦，樟腦含量低，基本檢測不到。

綜上所述，通過性狀鑒別、薄層鑒別、旋光測定和氣相色譜鑒別分析，可以達(dá)到區(qū)分、檢測天然冰片、冰片和艾片的目的，可為三種藥材的臨床應(yīng)用和進(jìn)一步開發(fā)利用奠定基礎(chǔ)。

參考文獻(xiàn)

[1]曲柏超.淺談冰片的藥理研究與臨床應(yīng)用[J].中國藥物經(jīng)濟(jì)學(xué),2012,10(2):30-31.

[2]劉磊剛.冰片的藥理研究與臨床應(yīng)用[J].中國藥物經(jīng)濟(jì)學(xué),2014,9(2):26-27.

[3]姜建昌,曹雷,姚瑜潔,等.冰片的臨床應(yīng)用研究概況[J].現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志,2013,22(2):221-223.

[4]吳茂隆,陳小蘭,廖振欣,等.龍腦樟研究利用及其發(fā)展前景[J].江西林業(yè)科技,2011,3(2):33-35.

[5]謝鳳瑛.天然冰片在美容護(hù)膚中的應(yīng)用[J].中國藥物經(jīng)濟(jì)學(xué),2011,16(2):90-96.

[6]李楠,楊明.清咽口香糖的研制[J].食品工業(yè)科技,2006,27(1):107-108.

[7]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典1部[S].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2010:56,82,136.

[8]張東峰.合成冰片過程的固體超強(qiáng)酸催化酯化新工藝研究[D].長沙：中南林業(yè)科技大學(xué),2006.

[9]張宜凡,李瑾.牛黃解毒片中冰片的化學(xué)鑒別及薄層色譜鑒別[J].中醫(yī)藥導(dǎo)報,2011,17(6):95-96.

[10]李忠忠.冰片與幾種易混淆品的鑒別[J].中藥材，2003，26(3):177-178.

[11]吳芳,樊寶娟,喬蓉霞.氣相色譜法鑒別小兒化毒膠囊中冰片、乳香和沒藥[J].安徽醫(yī)藥，2011，15(11): 1356-1357.

[12]王世清.冰片與混淆品樟腦的鑒別[J].河南中醫(yī)，2012，32(11):1537.

[13]鄧茂芝,龍玉瓊.冰片與假冰片的比較鑒別[J].中國藥事，2007，21(5):350,355.

[14]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典1部[S].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2010:附錄34.

[15]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典1部[S].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2010:附錄44.

(收稿日期：2015-10-21)

中圖分類號R927

文獻(xiàn)標(biāo)志碼A

文章編號1672-2124(2016)02-0186-04

#通信作者：教授。研究方向：中藥資源與開發(fā)研究。E-mail: yangquan7208@vip.163.com

Δ基金項(xiàng)目：國家自然科學(xué)基金：黎藥“娜龍”的品種整理及用藥規(guī)律研究(NO.81374065)；貴州省重大科技專項(xiàng)計(jì)劃項(xiàng)目：貴州地道藥材艾納香產(chǎn)業(yè)化開發(fā)關(guān)鍵技術(shù)研究與集成應(yīng)用(NO.20136011)。

*碩士研究生。研究方向：中藥制劑研究與開發(fā)。E-mail: lihaiyan1990@126.com