γ-干擾素釋放試驗在肺外結(jié)核診斷中的應(yīng)用與評價

魯　曦　李王平　謝永宏

710038 西安，第四軍醫(yī)大學(xué)唐都醫(yī)院呼吸與危重癥醫(yī)學(xué)科

孫瑞琳　劉　偉　金發(fā)光

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·論著·

γ-干擾素釋放試驗在肺外結(jié)核診斷中的應(yīng)用與評價

魯曦李王平謝永宏

710038 西安，第四軍醫(yī)大學(xué)唐都醫(yī)院呼吸與危重癥醫(yī)學(xué)科

孫瑞琳劉偉金發(fā)光

【摘要】目的探討γ-干擾素釋放試驗(T細(xì)胞斑點試驗)在肺外結(jié)核診斷中的使用效能。方法通過對265例入組的肺外結(jié)核疑似患者進(jìn)行T細(xì)胞斑點試驗檢測，分析該技術(shù)在肺外結(jié)核中的診斷效能和影響該檢測結(jié)果的風(fēng)險因素。結(jié)果265例患者中，確診肺外結(jié)核147例、可疑肺外結(jié)核32例、排除結(jié)核感染86例。在去除可疑樣本之后，T細(xì)胞斑點試驗靈敏度和特異性分別為81%和53%。其中，T細(xì)胞斑點試驗對淋巴結(jié)核與結(jié)核性腹膜炎檢測靈敏度最高，均為88%；結(jié)核性胸膜炎檢測的靈敏度最低，為75%；T細(xì)胞斑點試驗對淋巴結(jié)核檢測的特異性最高，為67%；而腸結(jié)核檢測的特異性最低，僅為44%。在免疫功能低下人群中，其靈敏度較免疫功能正常人群顯著降低(P<0.05)。此外，年齡(≥65歲)對T細(xì)胞斑點試驗靈敏度及對陽性預(yù)測值和陰性預(yù)測值的影響具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論T細(xì)胞斑點試驗?zāi)軌蜃鳛橐伤品瓮饨Y(jié)核鑒別的輔助診斷工具，具有較高的靈敏度，但在不同感染部位的檢測效能不同。T細(xì)胞斑點試驗檢測結(jié)果受到患者免疫功能狀態(tài)與年齡的影響，因此在進(jìn)行該項檢測之前有必要對患者免疫狀態(tài)等相關(guān)因素進(jìn)行評估。

【關(guān)鍵詞】肺外結(jié)核；γ-干擾素釋放試驗；T細(xì)胞斑點試驗

肺外結(jié)核在發(fā)展中國家的年發(fā)病率呈升高的趨勢[1]，這與免疫抑制患者(例如艾滋病患者和接受腫瘤壞死因子-α拮抗劑治療的患者)數(shù)量增多具有一定相關(guān)性[2-4]。然而，肺外結(jié)核患者的樣本不易獲得，而且檢測方法靈敏度較低，這大大增加了診斷難度[5]。隨著免疫抑制劑治療方案的推廣，對于結(jié)核病的早期診斷與及時干預(yù)顯得比以往更加重要[3，6]。

目前，結(jié)核菌素試驗在檢測結(jié)核分支桿菌感染和指導(dǎo)治療方面應(yīng)用廣泛，但是該方法在免疫力受到抑制的肺外結(jié)核患者中反應(yīng)性較低，而且受到卡介苗接種的影響[7]。其他傳統(tǒng)方法例如抗酸染色、結(jié)核菌培養(yǎng)和病理活檢等技術(shù)雖然對結(jié)核病的診斷提供了很大幫助，但是獲得合適樣本的難度較大，而且樣本的獲取對患者也存在一定風(fēng)險，即使獲得了合適的樣本，由于抗酸染色和結(jié)核培養(yǎng)陽性率低、病理缺乏診斷依據(jù)，因此陰性結(jié)果也難以排除結(jié)核感染。

γ-干擾素釋放試驗T細(xì)胞斑點試驗(T cell spot test, T-SPOT)技術(shù)基于2種結(jié)核分枝桿菌特異性抗原(早期分泌抗原靶蛋白ESAT-6和培養(yǎng)濾過蛋白10，CFP-10)，通過檢測T細(xì)胞釋放的γ干擾素，間接診斷機(jī)體的結(jié)核菌感染狀態(tài)。編碼以上2種特異性抗原的基因均位于結(jié)核分枝桿菌基因組上的RD1區(qū)，絕大多數(shù)非結(jié)核分枝桿菌和卡介苗的基因組中均不存在該區(qū)域[8-9]。該技術(shù)無需受累器官的組織樣本，僅需要患者外周血即可，并在結(jié)核病診斷中的應(yīng)用得到了許多學(xué)者和臨床工作者的認(rèn)同[9-10]。

本研究分析了T細(xì)胞斑點試驗在肺外結(jié)核診斷中的作用，及影響該檢測的2個風(fēng)險因素，旨在為該技術(shù)在肺外結(jié)核的診斷中提供參考。

對象與方法

一、研究對象

選取唐都醫(yī)院自2012年6月至2014年6月住院疑似肺外結(jié)核患者265例。入組標(biāo)準(zhǔn)為出現(xiàn)任何肺外結(jié)核癥狀、體征或影像學(xué)證據(jù)的肺外結(jié)核疑似患者。其診斷標(biāo)準(zhǔn)參見文獻(xiàn)[11]，其中確診肺外結(jié)核感染定義為：肺外臨床樣本結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)陽性或PCR陽性。疑似肺外結(jié)核患者定義為：臨床癥狀或各項檢查化驗結(jié)果與活動性結(jié)核類似；活檢標(biāo)本提示干酪樣壞死或肉芽腫性炎，胸腔積液、腹腔積液臨床病變與結(jié)核性胸膜炎、結(jié)核性腹膜炎類似。排除結(jié)核感染定義為：使用抗結(jié)核以外的治療方式使其臨床癥狀得以緩解，或最終臨床確診為其他疾病?？梢煞瓮饨Y(jié)核患者定義為：不滿足上述標(biāo)準(zhǔn)，但也無法排除肺外結(jié)核感染的患者。免疫功能低下患者的標(biāo)準(zhǔn)為：HIV感染者、肝硬化、慢性腎功能衰竭和接受免疫抑制劑治療的患者[12]，見表1。

表1　233例肺外結(jié)核疑似患者基本信息a[n(%)]

注：a本表統(tǒng)計了肺外結(jié)核感染確診病例和排除結(jié)核感染病例的人數(shù)(百分比)，或檢測陽性人數(shù)/進(jìn)行檢測人數(shù)(百分比)；b已排除可以肺外結(jié)核病例;c其他病癥包括糖尿病、呼吸道感染、肝硬化和結(jié)締組織病

二、試劑與儀器

1. 主要試劑：美德斯坦姆細(xì)胞培養(yǎng)液(1640培養(yǎng)液)、AIM-V細(xì)胞培養(yǎng)液和人淋巴細(xì)胞分離液(醫(yī)用級)，以上試劑由天津美德太平洋科技有限公司生產(chǎn)；結(jié)核感染T細(xì)胞檢測試劑盒(免疫斑點法)由英國Oxford Immunotec Ltd.生產(chǎn)；PBS緩沖液 pH7.4(10×)由上海雙螺旋生物科技有限公司生產(chǎn)。

2. 主要儀器：Heal Force二氧化碳培養(yǎng)箱(HF151UV)、湘儀CENCE低速離心機(jī)(L550)、海爾二級生物安全柜(HR40-IIa2)。

三、T-SPOT試驗

1. 樣本采集：靜脈血樣本用肝素鋰或肝素鈉抗凝管采集3～5 ml外周血，立即顛倒2～3次充分混勻，以免血液凝固。在常溫下(18～25 ℃)保存，并在3 h以內(nèi)將樣本送至實驗室，對于不符合采樣要求，或沒能及時送達(dá)實驗室的樣本則需重復(fù)采樣。

2. 單個核細(xì)胞分離：使用人淋巴細(xì)胞分離液分離外周血單個核細(xì)胞，首先將4 ml外周血和3 ml的1 640培養(yǎng)液混勻，隨后緩慢加入到3 ml人淋巴細(xì)胞分離液中，使血液浮于分離液上層，隨后1 000×g離心22 min。取分離后的細(xì)胞層5 ml，用1 640培養(yǎng)液洗滌2次，350×g離心7 min棄上清。將沉淀加入500 μl的AIM-V培養(yǎng)液并混勻。對每份樣本并用細(xì)胞計數(shù)板在顯微鏡下進(jìn)行細(xì)胞計數(shù)。并將細(xì)胞濃度調(diào)整至2.5×106/ml。

3. γ-干擾素釋放試驗：具體操作步驟和結(jié)果判斷方法，嚴(yán)格按照結(jié)核感染T細(xì)胞檢測試劑盒使用說明進(jìn)行操作和判斷。

四、質(zhì)量控制

1. 樣本質(zhì)控：對于保存溫度低<4 ℃或>28 ℃的樣本，和保存時間>5 h的樣本以及未按要求使用肝素抗凝的樣本需要重新采樣。對于原始細(xì)胞濃度<2.5×106/ml的樣本不進(jìn)行T-SPOT檢測。

2. 試驗過程質(zhì)控：在實驗過程中按照試劑盒使用說明，每個樣本均設(shè)立陽性對照和陰性對照。陰性對照用于對環(huán)境污染狀況和樣本中的背景γ-干擾素進(jìn)行質(zhì)控，確定進(jìn)行試驗的樣本無環(huán)境污染和γ-干擾素污染。陽性對照用于對試劑的有效性以及單個核細(xì)胞釋放γ-干擾素的能力進(jìn)行質(zhì)控。對于陰性對照>10個斑點首先需要對操作環(huán)境進(jìn)行清潔，重新采樣再次送檢。對于陽性對照<20個斑點的樣本需要間隔2周之后重新采樣送檢。

3. 注意事項：實驗操作應(yīng)在生物安全柜中進(jìn)行，使用前后使用紫外、酒精消毒，二氧化碳培養(yǎng)箱每周進(jìn)行1次消毒；實驗所需耗材需要高壓滅菌，對于自行滅菌的物品放置時間>1周或使用前包裝破損的需要重新滅菌或丟棄；試驗中使用到的AIM-V和1 640培養(yǎng)液用50 ml離心管分裝，剩余量需丟棄。

五、統(tǒng)計分析

采用SPSS18.0版本軟件，計數(shù)資料采用χ2檢驗。以P<0.05作為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。對T-SPOT技術(shù)在肺外結(jié)核診斷中的性能，包括靈敏度、特異性、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值、陽性似然比，利用Youden指數(shù)(PI=靈敏度+特異度-1)和陰性似然比進(jìn)行評價。

結(jié)果

一、患者診斷結(jié)果

總計有265例肺外結(jié)核疑似患者入組，根據(jù)臨床癥狀、細(xì)菌學(xué)、組織病理學(xué)和放射學(xué)等相關(guān)技術(shù)對肺外結(jié)核進(jìn)行診斷，共確診肺外結(jié)核147例(55%)、排除結(jié)核感染86例(32%)、其余32例(12%)為無法排除結(jié)核感染的可疑病例。共有88例患者進(jìn)行了組織病例活檢，其中58例為肉芽腫性炎(81%)；97例進(jìn)行了抗酸染色，4例為陽性(5%)；80例進(jìn)行了結(jié)核PCR檢測，其中有49例陽性(75%)。在265名疑似病例中，共有181例(68%)為T-SPOT陽性，84(32%)為T-SPOT陰性。本研究將確診的147例肺外結(jié)核病例作為肺外結(jié)核陽性參照病例，86例排除結(jié)核感染病例作為肺外結(jié)核陰性參照病例，因為其余32例無法確診，所以不列在統(tǒng)計范圍之內(nèi)，見表1。

二、T-SPOT試驗在肺外結(jié)核輔助診斷的臨床表現(xiàn)

對265例肺外結(jié)核疑似患者的血液進(jìn)行T-SPOT試驗，試驗的全部過程根據(jù)質(zhì)量控制方案嚴(yán)格進(jìn)行。T-SPOT針對不同感染部位，其靈敏度、特異性、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值、陽性似然比和陰性似然比，見表2。其中質(zhì)控結(jié)果均未出現(xiàn)異常。在排除32例無法確診結(jié)核的病例后，T-SPOT對肺外結(jié)核檢測的靈敏度和特異性分別為81%和53%，陽性預(yù)測值和陰性預(yù)測值分別為75%和62%，陽性似然比和陰性似然比分別為1.74和0.36，見表2。根據(jù)不同感染部位，靈敏度從88%(淋巴結(jié)核和腸結(jié)核)到75%(結(jié)核性胸膜炎)，特異性從44%(腸結(jié)核)到67%(淋巴結(jié)核)，陽性預(yù)測值從36%(骨結(jié)核)到93%(淋巴結(jié)核)，陰性預(yù)測值從45%(結(jié)核性胸膜炎)到90%(骨結(jié)核)不等，見表2。為對比幾種不同部位肺外結(jié)核的診斷效果，本研究利用了Youden指數(shù)對結(jié)果進(jìn)行評價，發(fā)現(xiàn)淋巴結(jié)核最高(0.55)，其次是結(jié)核性腹膜炎(0.40)、骨結(jié)核(0.33)、腸結(jié)核(0.32)、結(jié)核性胸膜炎分別為(0.29)。

表2　T-SPOT試驗在233例疑似肺外結(jié)核患者診斷中的效果分析

注：aT-SPOT檢測結(jié)果陽性患者數(shù)/參與檢測并且肺外結(jié)核確診患者人數(shù)；bT-SPOT檢測結(jié)果陰性患者數(shù)/參與檢測并且排除肺外結(jié)核患者人數(shù)；cT-SPOT陽性樣本中真陽性患者數(shù)/T-SPOT陽性樣本數(shù)；dT-SPOT陰性樣本中真陰性患者數(shù)/T-SPOT陰性樣本數(shù)

三、影響T-SPOT試驗的風(fēng)險因素

本研究分析了免疫功能狀態(tài)對T-SPOT肺外結(jié)核檢測的影響，發(fā)現(xiàn)T-SPOT對免疫力正?；颊吆兔庖吡Φ拖禄颊叩撵`敏度分別為85%和57%，經(jīng)過χ2檢驗，P<0.05，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。此外，本研究還分析了年齡對該檢測的影響，見表2，選擇65歲做為分界點。其中有129名年齡≥65歲的患者，有63名被診斷為肺外結(jié)核感染(患病率為49%)，其中有56例為T-SPOT陽性(靈敏度為89%)；在104例年齡<65歲年齡的患者中有84例為肺外結(jié)核患者(患病率為81%)，其中有63例為T-SPOT陽性(靈敏度為75%)。其靈敏度在不同年齡組中差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。這提示患者年齡因素對T-SPOT在肺外結(jié)核診斷中的靈敏度具有顯著影響。在≥65歲年齡組中，有40例得到T-SPOT陰性結(jié)果，其中有33例排除結(jié)核感染，其陰性預(yù)測值為83%，較<65歲年齡組高(90%)，差異具有顯著性(P<0.05)；在89例得到T-SPOT陽性結(jié)果的患者中僅有63例確診為肺外結(jié)核，陽性預(yù)測值僅為63%，而在<65歲年齡組中陽性預(yù)測值為90%，其差異具有顯著性(P<0.05)，此外在年齡<65歲組和≥65歲組患者T-SPOT靈敏度分別為75%和89%。

討論

根據(jù)國外文獻(xiàn)報道，25%～30%的結(jié)核病屬于肺外結(jié)核，而在中國，這一比例占到9.7%～11.8%[12]。由于肺外結(jié)核臨床癥狀和指征缺乏特異性，而且傳統(tǒng)方法給肺外結(jié)核的診斷帶來了很大難度。之前，大量研究已經(jīng)證實T-SPOT檢測對于結(jié)核病的診斷具有較高的靈敏度，且不受卡介苗接種的影響[9]。而針對國內(nèi)T-SPOT對肺外結(jié)核檢測的研究數(shù)據(jù)較少文獻(xiàn)[12]，因此本研究著重分析了T-SPOT在肺外結(jié)核中診斷的實際效果，對肺外結(jié)核中不同感染部位的靈敏度、特異性等進(jìn)行分析。本次共有265例肺外結(jié)核疑似患者入組，其中233例確診明確。根據(jù)本次研究數(shù)據(jù)，T-SPOT在肺外結(jié)核診斷中的靈敏度和特異性分別為81%和53%，陽性預(yù)測值和陰性預(yù)測值分別為75%和62%。其中在淋巴結(jié)核與腸結(jié)核的診斷中靈敏度最高，均為88%。淋巴結(jié)核檢測的特異性最高，為67%。Youden指數(shù)也表明淋巴結(jié)核最高，為0.55。以上數(shù)據(jù)說明，T-SPOT在肺外結(jié)核不同感染部位的檢測效能不同，其中淋巴結(jié)核較其他部位的準(zhǔn)確度高，這與文獻(xiàn)的研究結(jié)果基本一致[10]。此外，骨結(jié)核的靈敏度和特異性分別為83%與50%，與國外研究結(jié)果(100%和55%)存在差異，或許是因為與此次入組的骨結(jié)核患者人數(shù)較少有關(guān)(僅有6例確診)[10]。

同時本研究還分析了患者免疫功能狀態(tài)和年齡對T-SPOT檢測的影響。發(fā)現(xiàn)免疫功能正?；颊逿-SPOT的靈敏度高于免疫功能低下患者，分別為85%和57%，P<0.05差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。以往的相關(guān)數(shù)據(jù)表明[13]，T-SPOT技術(shù)不受患者免疫功能狀態(tài)的影響，但是本研究的數(shù)據(jù)提示患者免疫功能狀態(tài)會影響到T-SPOT檢測的靈敏度。推測這可能是由于免疫細(xì)胞的生物活性對檢測結(jié)果產(chǎn)生的影響；另外，本研究入組患者年齡中位數(shù)>65歲，考慮年齡因素和免疫功能因素的疊加也可能是影響T-SPOT靈敏度的原因。為了保證T-SPOT試驗數(shù)據(jù)的可靠性，對年齡≥65歲而且免疫功能下降的人群應(yīng)當(dāng)謹(jǐn)慎使用T-SPOT進(jìn)行輔助診斷。但是這一結(jié)論仍有待大樣本量的研究數(shù)據(jù)支持。此外，本研究還單獨分析了年齡(≥65歲)對T-SPOT檢測的影響，除靈敏度以外，特異性、靈敏度、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值均與年齡<65歲組具有顯著差異。其中，≥65歲組患者T-SPOT特異性(50%)、陽性預(yù)測值(63%)與<65歲組患者的T-SPOT特異性(65%)、陽性預(yù)測值(90%)相比均發(fā)生降低，但陰性預(yù)測值有所提高，<65歲組陰性預(yù)測值為38%，≥65歲組為83%，以上數(shù)據(jù)說明，<65歲的T-SPOT陽性患者，提示肺外結(jié)核感染的可能性較≥65歲年齡組的患者大；而對于≥65歲的T-SPOT陰性患者，提示排除肺外結(jié)核感染的可能性較<65歲組大。綜上所述，除了患者免疫功能狀態(tài)之外，年齡也是影響T-SPOT診斷效能的重要風(fēng)險因素。造成≥65歲年齡組陽性預(yù)測值顯著降低的主要原因，推測是由于老年患者潛伏性結(jié)核發(fā)生率較<65歲年齡組的患者高[17]。以上結(jié)果說明，T-SPOT在不同年齡組中肺外結(jié)核診斷效能不同：對于<65歲的T-SPOT陽性患者，提示肺外結(jié)核感染的可能性較≥65歲年齡組的患者大；而對于≥65歲的T-SPOT陰性患者，提示排除肺外結(jié)核感染的可能性較<65歲組大。

本研究發(fā)現(xiàn)，T-SPOT對肺外結(jié)核的靈敏度和特異性分別為81%和53%，與以往報道的存在一定差異[11，14]。造成這種差異可能原因之一是T-SPOT無法區(qū)分活動性結(jié)核和潛伏性結(jié)核[15]。由于我國屬于結(jié)核感染高負(fù)擔(dān)國，潛伏性結(jié)核感染者比例較高，有10%～20%的潛伏性結(jié)核患者[16-17]。而且缺乏潛伏性結(jié)核診斷的金標(biāo)準(zhǔn)，這大大增加了排除結(jié)核感染的難度。本研究發(fā)現(xiàn)在排除結(jié)核感染的86例患者中，僅46例呈T-SPOT陰性結(jié)果，其余40例陽性患者中有16例有過結(jié)核病接觸史。由于T-SPOT無法對活動性和潛伏性結(jié)核進(jìn)行區(qū)分[15]，對于T-SPOT陽性，但最終其他臨床卻排除結(jié)核感染的患者有可能屬于潛伏性結(jié)核，而這一部分?jǐn)?shù)據(jù)影響了試驗的特異性。因此結(jié)核的診斷仍需結(jié)合患者臨床表現(xiàn)、接觸史和其他檢測技術(shù)進(jìn)行綜合判斷。

T-SPOT技術(shù)在肺外結(jié)核診斷中具有以下優(yōu)勢：首先，T-SPOT試驗僅需要血液或體液樣本，使得樣品容易獲得。其次，由于該試驗使用的兩種刺激抗原(ESAT-6和CFP10)，其編碼基因位于結(jié)核分枝桿菌基因組RD1區(qū)域，該區(qū)域在卡介苗中不存在，這就避免了卡介苗接種對該試驗的影響；同樣，該區(qū)域在絕大多數(shù)環(huán)境分枝桿菌中亦不存在，因此大大提高了檢測的特異性。其次，該試驗在刺激干擾素釋放之前，先將單個核細(xì)胞稀釋到同一濃度，這減少了患者白細(xì)胞數(shù)降低對該試驗的影響。此外，T-SPOT檢測在24 h內(nèi)即可完成，雖然PCR技術(shù)和抗酸染色具有更短的檢測周期，但需要肺外結(jié)核患者提供組織，且不易獲得，這就限制了PCR和抗酸染色技術(shù)在肺外結(jié)核診斷中的應(yīng)用，而抗酸染色陽性率低，抗酸陰性的患者也難以排除結(jié)核感染。結(jié)核菌培養(yǎng)和組織活檢是結(jié)核診斷的金標(biāo)準(zhǔn)，除了樣本難以獲得之外，56 d的培養(yǎng)周期也難以滿足快速檢測的要求，而結(jié)節(jié)病與結(jié)核在病理活檢中也存在一定程度的交叉，而T-SPOT技術(shù)能夠大大改善上述方法的弊端。然而該技術(shù)也存在一定程度的劣勢，由于該技術(shù)是通過檢測結(jié)核感染患者的效應(yīng)T細(xì)胞進(jìn)行間接診斷的，因此無法對活動性結(jié)核與潛伏性結(jié)核進(jìn)行區(qū)分。而鑒別活動性與潛伏性結(jié)核的技術(shù)仍有待進(jìn)一步開發(fā)。

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(本文編輯：張大春)

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Evaluation of interferon-gamma release technique in extra-pulmonary tuberculosis detectionLuXi,LiWangping,XieYonghong,SunRuilin,LiuWei,JinFaguang.DepartmentofPulmonaryandCriticalCareMedicine,TangduHospital,FourthMilitaryMedicalUniversity,Xi′an, 710038

【Abstract】ObjectiveTo evaluate the clinic presentation of interferon-gamma release method (T cell spot test) in extra-pulmonary tuberculosis (E-TB) diagnosis. MethodsTotally 265 suspect E-TB patients were included in the study. The clinic practice and risk factors were analyzed. ResultsAmong the 265 cases, there were 147 were diagnosed as E-TB infection that confirmed by bacteriology or histology. E-TB was excluded in 86 patients, and the rest of 32 cases still cannot be diagnosed. After the suspicious cases removed, the sensitivity and specificity of T cell spot test assay were 81% and 53%. Among them, the sensitivity in crewels and tuberculous peritonitis detection was higher than others (both 88%); in tuberculous pleuritis detection was 75%. The specificity in crewels was higher than others (67%); in tuberculosis of intestine detection was only 44%.The sensitivity in immunecompromised group were decreased significantly(P<0.05), besides, the sensitivity was also affected by age factor (≥65y, P<0.05). There was statistically significant in potitive predictive value and negative predictive value(P<0.05). ConclusionsT cell spot test TB is an effective tool for extra-pulmonary tuberculosis diagnosis with high sensitivity. Besides, the results can be affected by the condition of patients′immunologic function and age factor(≥65y). So, it is necessary to test the the immune status of the patient before making the T cell spot test detection, and age factor should also be considered.

【Key words】Extra-pulmonary tuberculosis;Interferon-gamma release method;T cell spot test

(收稿日期：2015-11-16)

Corresponding author：Jin Faguang, Email：jinfag@fmmu.edu.cn

中圖法分類號：R562

文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A

通訊作者：金發(fā)光，Email：jinfag@fmmu.edu.cn

基金項目：國家自然科學(xué)基金資助(31300121)

DOI：10.3877/cma.j.issn.1674-6902.2016.01.006