GC-MS法同時測定關(guān)東丁香葉揮發(fā)油中4種活性成分

劉同新， 郭偉英

（遼寧醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，遼寧錦州121000）

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GC-MS法同時測定關(guān)東丁香葉揮發(fā)油中4種活性成分

劉同新， 郭偉英*

（遼寧醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，遼寧錦州121000）

摘要:目的 建立同時測定關(guān)東丁香Syringa veutina Kom葉揮發(fā)油中芳樟醇、α-松油醇、突厥酮和棕櫚酸的氣相色譜-質(zhì)譜（GC-MS）方法。方法 揮發(fā)油分析采用HP-5MS毛細(xì)管色譜柱（250 μm×30 m×0.25 μm），程序升溫；進(jìn)樣口溫度250℃；體積流量3.0 mL/min；進(jìn)樣量1 μL；分流比60∶1。結(jié)果 從中共分離出62個峰，鑒定出39種化合物，占揮發(fā)油總量的78.51％。芳樟醇、α-松油醇、突厥酮、棕櫚酸分別在0.003～0.03 mg/mL、0.001 04～0.010 4 mg/mL、0.001 96～0.019 6 mg/mL、0.005 68～0.056 8 mg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，平均回收率分別為99.4％、99.2％、99.4％、99.5％，RSD分別為1.0％、1.4％、1.2％、1.0％。結(jié)論 該方法簡便、快速、準(zhǔn)確，可為關(guān)東丁香葉揮發(fā)油的質(zhì)量控制提供依據(jù)。

關(guān)鍵詞:關(guān)東丁香；葉；揮發(fā)油；芳樟醇；α-松油醇；突厥酮；棕櫚酸；GC-MS

dol:10.3969/j.issn.1001-1528.2016.02.026

KEY W 0RDS: Syringa veutina Kom；1eaves；vo1ati1e oi1；1ina1oo1；α-terPineo1s；damascenone；cety1ic acid；GC-MS

關(guān)東丁香Syringa veutina Kom為木樨科植物，主要生長在遼寧、吉林等北部暖溫帶落葉闊葉林區(qū)，喜光、稍耐陰、耐寒、耐干旱［1］，未收入藥典。它主要含揮發(fā)油類、黃酮類、苯丙素類、環(huán)烯醚萜類及其苷類等成分［2-3］，具有清熱解毒，消炎之功效，用于治療急性黃疸型肝炎。目前，對該植物揮發(fā)油的研究尚未見報(bào)道。

本實(shí)驗(yàn)首次通過GC-MS技術(shù)對關(guān)東丁香葉揮發(fā)油的成分進(jìn)行了鑒定，經(jīng)查閱文獻(xiàn)，證實(shí)其有多種活性成分。其中，芳樟醇可作為香料，同時具有鎮(zhèn)靜、抗菌、抗病毒等作用［4-5］；α-松油醇具有殺菌、抑菌作用［6-8］；突厥酮在設(shè)計(jì)香氣分子的緩慢釋放和控制釋放方面有重要作用［9-10］；棕櫚酸具有降糖的作用［11-12］。結(jié)果顯示，相對含有量分別為芳樟醇8.31％、α-松油醇3.85％、突厥酮2.88％、棕櫚酸10.32％。因此，GC-MS［13-15］法對關(guān)東丁香葉揮發(fā)油中這4種活性成分進(jìn)行含有量測定可為該植物的質(zhì)量控制和進(jìn)一步研究提供依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 實(shí)驗(yàn)儀器 AL-204型精密電子天平（瑞士梅特勒-托利多公司）；安捷倫7890B-5977A GC/MSD氣相-質(zhì)譜聯(lián)用色譜儀，包括Agi1ent7683自動進(jìn)樣器（美國安捷倫公司）。

1.2 試藥與材料 芳樟醇（批號20141015）、α-松油醇（批號20141015）、突厥酮（批號20141218）、棕櫚酸（批號20141015）對照品（南京森貝伽生物技術(shù)有限公司，純度均≥98％）。正己烷為色譜純；乙醚等其他試劑為分析純。關(guān)東丁香葉由遼寧好護(hù)士藥業(yè)（集團(tuán)）有限責(zé)任公司提供（S1-鞍山，S2-錦州，S3-大連），經(jīng)遼寧醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院生藥教研室承偉教授鑒定為木犀科丁香屬植物關(guān)東丁香Syringa veutina Kom的葉。關(guān)東丁香揮發(fā)油（自制）。

2 方法與結(jié)果

2.1 關(guān)東丁香葉揮發(fā)油成分分析 關(guān)東丁香葉揮發(fā)油經(jīng)氣相色譜-質(zhì)譜（GC-MS）（表1）聯(lián)用儀

表1　關(guān)東丁香葉揮發(fā)油中的化學(xué)成分Tab.1 Chem lcal constltuents ln the leaves of Syringa veutina Kom volatlle oll

分析，共分離出62個峰，鑒定出39種化合物，占揮發(fā)油總量的78.51％。

2.2 氣相色譜-質(zhì)譜法(圖1)

1.芳樟醇 2.α-松油醇 3.突厥酮 4.棕櫚酸1.1ina1oo1 2.α-terPineo1 3.damascenone 4.hexadecanoic acid圖1　供試品和對照品溶液的GC-MS色譜圖Flg.1 GC-MS chromatogram s of samples and reference substance solutlons

2.2.1 氣相色譜條件 HP-5MS毛細(xì)管色譜柱（250 μm×30 m×0.25 μm），程序升溫（起始80℃，3℃/min速率升至101℃，23℃/min速率升至111℃，3℃/min速率升至210℃，83℃/min速率升至230℃）；進(jìn)樣口溫度250℃；載氣為高純氦氣；體積流量為3.0 mL/min；進(jìn)樣量為1 μL；分流比60∶1。

2.2.2 質(zhì)譜條件 EI電離源，電離電壓70 eV；離子源溫度230℃；四級桿溫度150℃；掃描質(zhì)量范圍m/z 50～550 amu；溶劑延遲4 min。通過NIST11譜庫檢索，選擇離子采集（SIM），結(jié)合對照品確認(rèn)芳樟醇的保留時間6.577～6.640 min，選擇檢測離子m/z為93；α-松油醇的保留時間9.385～9.468 min，選擇檢測離子m/z為59；突厥酮的保留時間17.173～17.271 min，選擇檢測離子m/z為69；棕櫚酸的保留時間24.250～24.297 min，選擇檢測離子m/z為73。

2.3 溶液配制

2.3.1 對照品儲備液 精密稱取芳樟醇、α-松油醇、突厥酮、棕櫚酸對照品適量，正己烷分別定容至5 mL量瓶中，制成質(zhì)量濃度分別為1.5、0.52、0.98、2.84 mg/mL的對照品溶液。分別精密吸取4種對照品溶液0.5 mL，置于5 mL量瓶中，即得。

2.3.2 供試品溶液 將干燥的關(guān)東丁香葉粉碎，精密稱取10 g，置于1 000 mL圓底燒瓶中，加入數(shù)粒玻璃珠，自揮發(fā)油提取器上端加蒸餾水400 mL，再加乙醚3 mL，冰水冷凝，微沸6 h。待完全冷卻后，取乙醚層的揮發(fā)油，常溫下呈淡黃色透明液體，揮干溶劑，得油率為0.17％，正己烷定容于5 mL量瓶中，稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.4 方法學(xué)驗(yàn)證

2.4.1 線性關(guān)系 分別精密吸取混合對照品溶液0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL，置于5 mL量瓶中，正己烷定容至刻度，搖勻，即得系列質(zhì)量濃度混合對照品溶液，在“2.2”項(xiàng)色譜條件下測定，進(jìn)樣量1 μL。以對照品質(zhì)量濃度（mg/mL）為橫坐標(biāo)（X），峰面積積分值為縱坐標(biāo)（Y）進(jìn)行線性回歸，得芳樟醇、α-松油醇、突厥酮、棕櫚酸的回歸方程分別為Y=14 446 968.776X+ 85 790.622 3（r= 0.999 5，n = 6）；Y = 48 601 151.402X-19 529.363 0（r=0.999 7，n = 6）；Y=34 423 315.859X+19 834.870 5（r= 0.999 9，n = 6）；Y= 12 366 905.045X + 140 230.236 6（r=0.999 7，n =6），在0.003～0.03 mg/mL、0.001 04～0.010 4 mg/mL、0.001 96～0.019 6 mg/mL、0.005 68～0.056 8 mg/mL范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系。

2.4.2 精密度試驗(yàn) 精密吸取混合對照品溶液1 μL，在“2.2”項(xiàng)色譜條件下測定，連續(xù)進(jìn)樣6次，測定峰面積。結(jié)果，芳樟醇、α-松油醇、突厥酮、棕櫚酸的峰面積RSD值分別為1.1％、1.2％、0.6％、0.5％（n =6），表明儀器精密度良好。

2.4.3 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批關(guān)東丁香藥材粉末（S1）6份，按“2.3.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，在“2.2.1”項(xiàng)色譜條件下記錄峰面積。結(jié)果，芳樟醇、α-松油醇、突厥酮、棕櫚酸的平均含有量為3.217 6、1.606 6、2.283 0、6.015 0 μg/g，RSD值分別為1.5％、1.4％、1.7％、1.1％（n =6），表明該方法重復(fù)性良好。

2.4.4 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一份供試品溶液（S1），于0、2、4、6、8、10、12、24 h，在“2.2”項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣1 μL，測定芳樟醇、α-松油醇、突厥酮、棕櫚酸的峰面積。結(jié)果，四者RSD值分別為0.7％、0.9％、0.7％、1.0％，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.4.5 加樣回收率試驗(yàn) 取同一批次含有量已知的關(guān)東丁香藥材粉末（S1）5 g，共9份，精密加入芳樟醇、α-松油醇、突厥酮、棕櫚酸的混合對照品溶液適量，按“2.3.2”項(xiàng)下方法制備低、中、高質(zhì)量濃度的供試品溶液，每個濃度3份，在“2.2”項(xiàng)色譜條件下測定，計(jì)算回收率及RSD值，結(jié)果見表2。

表2　加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果（n=3）Tab.2 Results of recovery tests（n=3）

2.3.6 樣品測定 精密稱取不同批次關(guān)東丁香藥材10 g，按“2.3.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，在“2.1”項(xiàng)色譜條件下分析，計(jì)算芳樟醇、α-松油醇、突厥酮、棕櫚酸含有量。結(jié)果見表3。

表3　4種成分含有量的測定結(jié)果Tab.3 Determ lnatlon results of the contents of four constltuents

3 討論

3.1 萃取溶劑和提取時間的選擇 本實(shí)驗(yàn)采用水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)油，考察萃取溶劑和提取時間對提取效率的影響，另外針對萃取溶劑，還分別考察了乙酸乙酯和正己烷溶劑的萃取效果。結(jié)果表明，關(guān)東丁香葉中的揮發(fā)性成分在正己烷中溶解性較好，出峰較多，故選擇正己烷作為萃取溶劑。同時，對提取時間（4、5、6、7 h）進(jìn)行了考察，發(fā)現(xiàn)提取6 h時效率較高，而且提取完全，但繼續(xù)提取時揮發(fā)油量無明顯變化，故選擇6 h作為提取時間。綜上所述，確定以正己烷萃取溶劑，提取6 h為揮發(fā)油的提取條件。

3.2 毛細(xì)管色譜柱的選擇 本實(shí)驗(yàn)分別考察了HP-5MS和DB-5MS毛細(xì)管色譜柱對測定結(jié)果的影響，兩者均為非極性色譜柱，按各色譜峰的分離度及峰型等各因素分析，發(fā)現(xiàn)前者對待測組分的分離效果更佳，提高了信噪比，具有較高的靈敏度。因此，選擇HP-5MS非極性毛細(xì)管色譜柱。

4 小結(jié)

本實(shí)驗(yàn)以水蒸氣蒸餾法提取關(guān)東丁香葉揮發(fā)油，首次采用GC-MS聯(lián)用技術(shù)對其成分進(jìn)行定性分析，并對其中棕櫚酸、突厥酮、芳樟醇、α-松油醇4種活性成分進(jìn)行含有量測定。經(jīng)系統(tǒng)的方法學(xué)考察發(fā)現(xiàn)，該檢測方法快速、簡便、準(zhǔn)確，可為關(guān)東丁香揮發(fā)油的質(zhì)量控制提供有力的科學(xué)依據(jù)。

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Slmultaneous determ lnatlon of four actlve constltuents ln the leaves of Syringa veutina Kom volatlle oll by GC-MS

LIU Tong-xin， GUOWei-ying*
（College of Pharmacy，Liaoning Medical University，Jinzhou 121000，China）

ABSTRACT:AIM To estab1ish amethod for simu1taneous1y determining 1ina1oo1，α-terPineo1s，damascenone and cety1ic acid in the 1eaves of Syringa veutina Kom vo1ati1e oi1 by gas chromatograPhies-mass sPectrum（GC-MS）. METH0DS The ana1ysis of vo1ati1e oi1was Performed on HP-5MS caPi11ary vesse1 co1umn（250 μm×30 m× 0.25 μm）with Programming temPerature，injector temPeraturewas250℃，f1ow ratewas3.0 mL/min，injection vo1-umewas1 μL，and sP1it ratiowas60∶1.RESULTS Tota162 Peakswere iso1ated，and 39 comPoundswere identified，accounting for 78.51％ in tota1vo1ati1e oi1.Lina1oo1，α-terPineo1，damascenone and cety1ic acid showed good 1inear re1ationshiPs in the ranges of 0.003 -0.03 mg/mL，0.001 04 -0.010 4 mg/mL，0.001 96 -0.019 6 mg/mL and 0.005 68 -0.056 8 mg/mL resPective1y，whose average recoveries were 99.4％，99.2％，99.4％ and 99.5％ with the RSDs of 1.0％，1.4％，1.2％ and 1.0％，resPective1y.C0NCLUSI0N Thismethod is simP1e，raPid and accurate，which can Provide a basis for the qua1ity contro1of the 1eaves of Syringa veutina Kom vo1ati1e oi1.

*通信作者:郭偉英（1958—），男，碩士，教授，研究方向?yàn)樗幤焚|(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及新型給藥技術(shù)。Te1: 13941627032，E-mai1: wyinguo@ 163.com

作者簡介:劉同新（1993—），女，碩士，研究方向?yàn)樗幤焚|(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及新型給藥技術(shù)。Te1: 18641794099，E-mai1: 276173853@qq.com

基金項(xiàng)目:遼寧省科技廳計(jì)劃項(xiàng)目（2011402015）

收稿日期:2015-04-02

中圖分類號:R284.1

文獻(xiàn)標(biāo)志碼:A

文章編號:1001-1528（2016）02-0351-05