水飛薊賓膠囊對(duì)酒精性肝纖維化大鼠的保護(hù)作用

黃 靜， 龍子江， 李 麗， 陸松俠

（安徽中醫(yī)藥大學(xué)，安徽合肥230038）

?

水飛薊賓膠囊對(duì)酒精性肝纖維化大鼠的保護(hù)作用

黃 靜， 龍子江*， 李 麗， 陸松俠

（安徽中醫(yī)藥大學(xué)，安徽合肥230038）

摘要:目的 研究水飛薊賓膠囊對(duì)酒精性肝纖維化模型大鼠的保護(hù)作用并探討其作用機(jī)制。方法 取15只健康SD雄性大鼠作為正常對(duì)照組，85只大鼠采用灌胃乙醇混合液的方法復(fù)制酒精肝纖維化模型，將50只造模成功的的大鼠隨機(jī)分為模型組，水飛薊賓高、中、低劑量組和陽性藥組，灌胃給藥4周。末次給藥后取血清，采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）測(cè)定各組大鼠血清肝纖維化指標(biāo)透明質(zhì)酸（HA）、層粘連蛋白（LN）、羥脯氨酸（HyP）、肝組織中Ⅲ型前膠原（PCⅢ）、Ⅳ型膠原（CⅣ）的含有量；用Western b1ot檢測(cè)大鼠肝組織WNT蛋白的表達(dá)量；用HE染色觀察各組肝組織病理學(xué)改變，Masson染色觀察各組肝纖維化程度。結(jié)果 與模型組比較，水飛薊賓高、中、低劑量組大鼠血清HA、LN、HyP、PCⅢ、CⅣ明顯降低（P＜0.01）；水飛薊賓高、中劑量組大鼠肝組織WNT蛋白表達(dá)量顯著降低（P＜0.01，P＜0.05），低劑量組降低不明顯（P＞0.05）；水飛薊賓組肝組織膠原纖維面積明顯減少，肝纖維化程度明顯改善。結(jié)論 水飛薊賓膠囊對(duì)酒精性肝纖維化有一定的治療作用，能顯著改善大鼠酒精性肝組織損傷，減輕肝纖維化。

關(guān)鍵詞:水飛薊賓膠囊；酒精性肝纖維化；透明質(zhì)酸（HA）；層粘連蛋白（LN）；羥脯氨酸（HyP）；Ⅲ型前膠原（PCⅢ）；Ⅳ型膠原（CⅣ）；WNT蛋白

dol:10.3969/j.issn.1001-1528.2016.02.001

KEY W 0RDS: Si1ybin CaPsu1es；a1coho1ic 1iver fibrosis；hya1uronic acid（HA）；1aminin（LN）；hydroxyPro-1ine（HyP）；Proco11agen tyPeⅢ（PCⅢ）；co11agen tyPeⅣ（CⅣ）；WNT Protein

酒精性肝?。╝1coho1ic 1iver disease，ALD）是一種常見的慢性肝病之一，隨著社會(huì)現(xiàn)代化程度的不斷提高，其發(fā)病率逐年升高。ALD的發(fā)病機(jī)制尚未完全清楚，其在不同階段有不同的發(fā)病機(jī)制，過度飲酒則被認(rèn)為是導(dǎo)致酒精性肝病重要原因之一［1］。ALD分為輕度酒精性肝病（MAI）、酒精性脂肪肝（AFL）、酒精性肝炎（AH）、酒精性肝纖維化（ALF）和酒精性肝硬化（AC），可發(fā)展至肝細(xì)胞癌（HCC）［2］。遺傳和非遺傳因素與個(gè)體易感性和ALD的進(jìn)程有關(guān)。其中肝纖維化是肝臟對(duì)慢性損傷的一種修復(fù)反應(yīng)，是指由各種致病因子所致肝內(nèi)結(jié)締組織異常增生，導(dǎo)致肝內(nèi)彌漫性細(xì)胞外基質(zhì)（extrace11u1armatrix，ECM）過度沉淀的病理過程，是多種慢性肝病發(fā)展的共同病理基礎(chǔ)［3］，是發(fā)展到酒精性肝硬化的重要階段［4］。肝纖維化是一種動(dòng)態(tài)病理過程，屬于可逆性病變［5-6］，而肝硬化一旦發(fā)生，損傷則不可逆，將嚴(yán)重危及人們的生命安全。因此，阻斷肝纖維化的發(fā)生和發(fā)展，對(duì)防治肝硬化和慢性肝病具有重要意義。

Wnt信號(hào)通路在器官的生成、再生及分化中發(fā)揮重要作用。在肝細(xì)胞、膽管細(xì)胞、肝星狀細(xì)胞和肝竇內(nèi)皮細(xì)胞表面存在不同Wnt基因及相應(yīng)受體基因的表達(dá)。Wnt信號(hào)通路通過調(diào)節(jié)細(xì)胞的再生與分化，參與肝臟的病理和生理作用，WNT蛋白的異常表達(dá)參與了肝內(nèi)炎癥反應(yīng)，肝內(nèi)脂代謝異常及肝內(nèi)氧化應(yīng)激等，導(dǎo)致酒精性脂肪肝及肝纖維化等慢性肝病的發(fā)生。水飛薊素是傳統(tǒng)的肝臟疾病輔助治療藥物，是上世紀(jì)60年代末從菊科植物水飛薊種子的種皮中提取得到的有效成分。水飛薊素包括水飛薊賓、水飛薊寧、異水飛薊賓等，其中，以水飛薊賓的量最高，保肝活性也最強(qiáng)［7］。水飛薊賓作為傳統(tǒng)的保肝藥物，療效確切，在肝病治療領(lǐng)域得到廣泛的應(yīng)用，常用于肝病的輔助治療及肝纖維化的治療用藥。本實(shí)驗(yàn)通過觀察酒精肝纖維化模型大鼠血清透明質(zhì)酸（hya1uronic acid，HA）、層粘連蛋白（1aminin，LN）、羥脯氨酸（hydroxyPro1ine，HyP）、肝組織Ⅲ型前膠原（Proco11agen tyPeⅢ，PCⅢ）、Ⅳ型膠原（co11agen tyPeⅣ，CⅣ）、肝組織形態(tài)學(xué)以及WNT蛋白相對(duì)表達(dá)量的改變，旨在探討水飛薊賓膠囊對(duì)酒精性肝纖維化損傷的保護(hù)作用及作用機(jī)制，為臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 100只健康SD（SPrague-Daw1ey）大鼠，雄性，SPF級(jí)，體質(zhì)量180～220 g，由安徽省動(dòng)物中心提供，動(dòng)物許可證號(hào)SCXK（皖）2011-002。

1.2 實(shí)驗(yàn)藥品與試劑 藥品:水飛薊賓膠囊（天士力制藥集團(tuán)股份有限公司，批號(hào)130404）；秋水仙堿（西雙版納版納藥業(yè)有限責(zé)任公司，批號(hào)140507）。試劑: HA、LN、HyP、PCⅢ、CⅣ試劑盒，均購自南京建成科技有限公司，批號(hào)分別為E-30400、E-149004、E-30190、E-31035、E-30177。吡唑（批號(hào)2060171）購自美國Sigma公司；玉米油；56度紅星二鍋頭；豬油（自制）；膽固醇，由合肥博美生物科技有限公司提供。WNT兔多克隆抗（美國Biowor1d公司）；β-Actin鼠抗（美國Santa Cruz公司）；山羊抗鼠IgG、山羊抗兔IgG均購自北京中杉生物技術(shù)有限公司；PVDF膜購自美國Mi11iPore公司；ECL超敏發(fā)光試劑盒為美國Thermo公司產(chǎn)品。

1.3 主要儀器 RT-6000酶標(biāo)儀（深圳雷杜生命科學(xué)股份有限公司）；RT-3100型全自動(dòng)洗板機(jī)（深圳雷杜生命科學(xué)股份有限公司）；LeicaRM2016輪轉(zhuǎn)式切片機(jī)，購自上海五相儀器儀表有限公司；O1ymPus BX5型光學(xué)顯微鏡（日本O1ymPus公司）。AF-10型自動(dòng)制冰機(jī)，購自意大利Scotsman公司；EPS 300型電泳儀、VE-180型電泳槽、VE-186型轉(zhuǎn)膜儀均購自Tanon公司。

2 方法

2.1 酒精肝纖維化模型大鼠制備 參照曹芹芳［8］造模方法復(fù)制酒精肝纖維化模型。大鼠正常飼養(yǎng)1周后，85只鼠灌服白酒-玉米油-吡唑混合液［其中56度白酒5 g/（kg·d）、玉米油2 mL/（kg·d）、吡唑27.2 mg/（kg·d）］1 mL/100 g，每天1次，固定在上午8∶30～9∶30，自由飲水。給予高脂飼料（87.5％基礎(chǔ)飼料、10％豬油、2％膽固醇）飼養(yǎng)，連續(xù)16周后隨機(jī)抽取2只大鼠處死后測(cè)肝功能以及肝組織HE染色、Masson染色鏡檢，以確定造模成功。15只正常組大鼠灌胃等容量的蒸餾水，給予普通飼料。

2.2 動(dòng)物分組及給藥 將模型復(fù)制成功大鼠隨機(jī)分為模型組，陽性對(duì)照組（秋水仙堿:臨床人日用劑量為3 mg，按體表面積折算，大鼠每日給藥量0.27 mg/kg），水飛薊賓高、中、低劑量組（臨床人日用劑量210 mg，同法折算得大鼠每日給藥75.6、37.8、18.9［相當(dāng)于臨床人日用劑量］mg/kg），每組10只。藥物組連續(xù)灌胃給藥4周，正常組和模型組灌胃等容量蒸餾水同法操作，各組每日給藥1次。同時(shí)，藥物組和模型組繼續(xù)給予乙醇混合液灌胃及高脂飲食直至實(shí)驗(yàn)結(jié)束。

3 指標(biāo)檢測(cè)

3.1 大鼠血清HA、LN、HyP水平的測(cè)定 末次給藥1 h后，3.5％水合氯醛（1 mL/kg）腹腔注射麻醉大鼠，腹主動(dòng)脈取血，3 000 r/min離心15 min，取血清，采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）測(cè)定各組大鼠血清HA、LN、HyP的量。檢測(cè)步驟按照各試劑盒說明書依法操作。

3.2 大鼠肝組織PCⅢ、CⅣ水平的測(cè)定 末次給藥1 h后，3.5％水合氯醛（1 mL/kg）腹腔注射麻醉大鼠，取右葉肝組織，稱重，加9倍體積的生理鹽水，在冰浴條件下機(jī)械勻漿制成10％的肝組織勻漿，2 500 r/min，離心10 min，取上清液，再用生理鹽水10倍稀釋成1％待測(cè)，按照各試劑盒說明書中依法操作，酶標(biāo)儀檢測(cè)各指標(biāo)濃度。

3.3 Western b1ot檢測(cè)大鼠肝組織WNT蛋白水平每組大鼠取3塊肝組織，每塊100 mg，加入RIPA細(xì)胞裂解液1 mL（內(nèi)含1 mmo1/L苯甲基磺酰氟PMSF）進(jìn)行裂解，12 000 r/min離心10 min，提取總蛋白，用10％聚丙酰烯胺凝膠分離蛋白。在收集的蛋白樣品中加入等量的2×SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液，沸水浴加熱10 min，以充分變性蛋白。待樣品冷卻到室溫后，把蛋白樣品直接上樣到SDS-PAGE膠加樣孔內(nèi)。將預(yù)先裁好與膠條同樣大小的濾紙和PVDF膜（預(yù)先在甲醇中浸泡3 min），浸入轉(zhuǎn)膜緩沖液中5 min。轉(zhuǎn)膜完畢后，立即把蛋白膜放置到預(yù)先準(zhǔn)備好的Western洗滌液中，漂洗5 min，以洗去膜上的轉(zhuǎn)膜液。加入Western封閉液（5％脫脂奶粉），在搖床上緩慢搖動(dòng)，室溫封閉2 h。封閉后加一抗WNT（1∶500）或β-Actin （1∶1 000）于4℃孵育過夜，二抗（1∶10 000）室溫下孵育2 h，使用ECL發(fā)光試劑盒來檢測(cè)蛋白，采用Image J軟件進(jìn)行圖片灰度值分析。

3.4 肝組織形態(tài)學(xué)觀察 末次給藥1 h后，用3.5％水合氯醛（1 mL/kg）腹腔注射麻醉大鼠，取各組大鼠肝臟，在肝右葉同一部位取2塊約1 cm×1 cm×0.5 cm肝組織，10％中性甲醛溶液固定，常規(guī)脫水、包埋、切片，厚度為4 μm，連續(xù)切片5張，分別進(jìn)行HE染色和Masson染色，HE染色觀察肝組織的肝小葉結(jié)構(gòu)、肝索排列、炎性細(xì)胞浸潤(rùn)程度，Masson染色觀察纖維化區(qū)域及程度等。

4 數(shù)據(jù)分析

5 結(jié)果

5.1 水飛薊賓膠囊對(duì)酒精肝纖維化模型大鼠血清HA、LN、HyP水平的影響 與正常組比較，模型組大鼠血清HA、LN、HyP水平顯著升高，具有顯著性差異（P＜0.01）；與模型組比較，水飛薊賓高、中、低劑量組血清中HA、LN、HyP的量降低，存在顯著性差異（P＜0.05或P＜0.01），見表1。

表1　水飛薊賓膠囊對(duì)AL F模型大鼠血清HA、LN、Hy p水平的影響（±s，n=1 0）Tab.1 Effects of Sllybln Capsules on serum HA、LN、Hyp ln ALF model rats（±s，n=10）

表1　水飛薊賓膠囊對(duì)AL F模型大鼠血清HA、LN、Hy p水平的影響（±s，n=1 0）Tab.1 Effects of Sllybln Capsules on serum HA、LN、Hyp ln ALF model rats（±s，n=10）

注:與正常組比較，**P＜0.01，*P＜0.05；與模型組比較，△△P＜0.01，△P＜0.05

組別　　劑量/（mg·kg-1）　HA/（ng·L-1）　LN/（μg·L-1）　HyP/（μg·L-1）正常組212.11±33.38　272.93±31.20　1 078.16±116.44模型組　-　294.76±46.72**　391.96±60.00**　1 383.52±86.46**水飛薊賓高劑量組　75.6　249.99±20.18△　324.67±52.71△　1 180.19±183.60△△水飛薊賓中劑量組　37.8　248.09±24.01△　321.99±66.90△　1 235.24±203.48△水飛薊賓低劑量組　18.9　256.11±23.39△　332.03±38.79△　1 228.60±163.29△秋水仙堿組　0.27　252.15±25.54△　332.75±65.44△-1 314.53±172.93

5.2 水飛薊賓膠囊對(duì)酒精肝纖維化模型大鼠肝組織PCⅢ、CⅣ的影響 與正常對(duì)照組比較，模型組大鼠肝組織PCⅢ、CⅣ水平顯著上升，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；與模型組比較，水飛薊賓高、中、低劑量組和陽性組肝組織PCⅢ、CⅣ水平明顯減少，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），見圖1。

圖1　水飛薊賓膠囊對(duì)酒精肝纖維化模型大鼠肝組織PCⅢ、CⅣ水平的影響（±s，n=1 0）Flg.1 Effects of Sllybln Capsules on llver tlssue PCⅢ、CⅣln ALFmodel rats（±s，n=10）

5.3 水飛薊賓膠囊對(duì)酒精肝纖維化模型大鼠肝組織WNT蛋白表達(dá)的影響 Western b1ot檢測(cè)獲得的蛋白條帶見圖2左側(cè)，經(jīng)軟件分析獲得相應(yīng)灰度值，以β-Actin為內(nèi)參，計(jì)算WNT蛋白表達(dá)相對(duì)值，見圖2右側(cè)。與正常組比較，模型組大鼠肝組織WNT蛋白表達(dá)水平顯著升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。與模型組比較，水飛薊賓高劑量組、陽性組大鼠肝組織WNT蛋白表達(dá)水平顯著降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。水飛薊賓中劑量組大鼠肝組織WNT蛋白表達(dá)水平降低較明顯，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），低劑量組大鼠肝組織WNT蛋白表達(dá)水平降低不明顯，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見圖2。

圖2　We s t e r n b l o t檢測(cè)大鼠肝組織WNT蛋白表達(dá)水平Flg.2 Relatlve expresslon quantltles of llver tlssue WNT proteln by W estern blot

5.4 水飛薊賓膠囊對(duì)酒精肝纖維化模型大鼠肝組織形態(tài)學(xué)的影響

5.4.1 光鏡觀察 HE染色觀察，正常組大鼠肝組織結(jié)構(gòu)清晰，肝細(xì)胞形態(tài)正常，大小均勻，細(xì)胞核清晰可見，肝索排列整齊呈放射狀，匯管區(qū)無纖維結(jié)締組織增生及炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，無脂肪變性及壞死（圖3A）。模型組大鼠肝組織正常結(jié)構(gòu)被破壞，肝細(xì)胞腫脹、變性、壞死，伴大量水樣性變和脂肪變性，肝索排列紊亂，匯管區(qū)及中央靜脈可見大量的炎細(xì)胞浸潤(rùn)，纖維結(jié)締組織增生，并向小葉內(nèi)延伸，部分區(qū)域形成不完全性分割（圖3B）。與模型組比較，水飛薊賓高（圖3C）、中（圖3D）、低劑量組（圖3E），秋水仙堿組（圖3F）病理學(xué)改善明顯，肝組織破壞程度、肝細(xì)胞水腫及脂肪變性程度均較為減輕，肝細(xì)胞壞死亦減輕，匯管區(qū)結(jié)締組織增生不明顯，可見少量淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)和脂肪空泡。

圖3　水飛薊賓對(duì)酒精性肝纖維化模型大鼠肝組織形態(tài)學(xué)的影響（HE染色，×200）Flg.3 Effects of Sllybln Capsules on hlstomorphology change of llver tlssue of alcohol-lnduced llver flbrosls ln rats（HE staln lng，×200）

5.4.2 Masson染色對(duì)膠原纖維的觀察 Masson染色時(shí)膠原纖維被染為藍(lán)色，正常組大鼠肝組織中僅有少許膠原沉積，主要位于匯管區(qū)（圖4A）。模型組大鼠肝臟組織膠原纖維增生明顯，匯管區(qū)、中央靜脈及肝實(shí)質(zhì)內(nèi)有大量的膠原沉積，并進(jìn)入肝小葉形成不完全間隔，顯示肝纖維化形成（圖4B）。與模型組比較，水飛薊賓高（圖4C）、中（圖4D）、低劑量組（圖4E），秋水仙堿組（圖4F）膠原沉積明顯減少。

圖4　各組肝細(xì)胞光鏡觀察（Ma s s o n染色，×4 0 0）Flg.4 Pathologlcal changes of hepatlc tlssues under the llghtm lcroscope ln each group（Masson trlchrome stalnlng，×400）

6 討論

ALD是由于長(zhǎng)期過度飲酒而導(dǎo)致的肝臟損傷性疾病，由于嗜酒人數(shù)的劇增，ALD的發(fā)病率逐年增加，并呈年輕化的趨勢(shì)，嚴(yán)重威脅人類的生命和健康。ALF發(fā)生的主要機(jī)理為肝臟中肝星狀細(xì)胞（HSC）的活化、增殖致使細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）合成與降解失衡，導(dǎo)致細(xì)胞外基質(zhì)在肝臟內(nèi)過度沉積［9-10］，如不加以干預(yù)最終會(huì)形成肝硬化甚至是肝癌。ALF不是獨(dú)立的疾病，而是各種慢性肝病發(fā)展為肝硬化的共同病理基礎(chǔ)，因此，阻止肝纖維化的發(fā)展具有重要的臨床意義。

HA、LN、PCⅢ、CⅣ的水平是反映肝纖維化程度比較公認(rèn)的指標(biāo)［11］，也即臨床上最常檢測(cè)的肝纖四項(xiàng)，對(duì)肝纖維化的發(fā)生、發(fā)展以及評(píng)估具有重要的臨床意義和價(jià)值。HA是ECM的主要成分之一，主要由HSC合成，分布在結(jié)締組織中，肝纖維化早期血液中HA顯著增加，是反應(yīng)肝纖維化最有價(jià)值的血清標(biāo)志物［12］。正常肝臟間質(zhì)含少量LN，在肝纖維化和肝硬化時(shí)，肌成纖維細(xì)胞增多，進(jìn)一步大量合成和分泌膠原、LN等間質(zhì)成分，最終形成完整的基底膜（肝竇毛細(xì)血管化）。PCⅢ水平的升高可以反映肝纖維化處于活動(dòng)期，可反映Ⅲ型膠原的代謝以及纖維化程度，CⅣ的大量沉積可引起肝竇毛細(xì)血管化及匯管區(qū)纖維化。HyP是膠原蛋白所特有的氨基酸，測(cè)定HyP的量可衡量膠原總體水平，間接反映肝纖維化的程度［13］。因此HA、LN、PCⅢ、CⅣ、HyP可以從不同的角度反映肝纖維化的病變程度［14］。

WNT蛋白是一類富含半胱氨酸的糖蛋白家族，參與細(xì)胞的增殖、分化、遷移，調(diào)控器官的發(fā)育，WNT蛋白與細(xì)胞膜上的卷曲蛋白結(jié)合，誘發(fā)其下游一系列信號(hào)分子的表達(dá)，發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)。經(jīng)典的WNT信號(hào)途徑是指β-連鎖蛋白（β-catenin）參與的WNT/β-catenin信號(hào)通路，WNT蛋白與細(xì)胞膜表面的Frizz1ed和LRP家族受體結(jié)合，將信號(hào)傳給蓬亂蛋白Disheve11ed（Dsh），活化的Dsh抑制軸蛋白（Axin）、結(jié)腸腺瘤性息肉病蛋白（APC）、糖原合成激酶-3β（GSK-3β）三聚體組成的復(fù)合物的活性，使胞漿內(nèi)β-catenin蛋白不能被磷酸化，積累的β-catenin與轉(zhuǎn)錄因子TCF/LEF結(jié)合，調(diào)節(jié)靶基因的表達(dá)。當(dāng)沒有Wnt信號(hào)時(shí)，胞漿內(nèi)βcatenin被GSK-3β磷酸化，后又被泛素化，最終被蛋白酶體降解。已有研究表明，Wnt/β-catenin信號(hào)通路參與肝纖維化的形成，使肝星狀細(xì)胞活化并增值，從而引起肝纖維化［15］。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果可見，利用酒精復(fù)制的肝纖維化模型大鼠血清中HA、LN、HyP及肝組織中PCⅢ、CⅣ的量明顯增加，應(yīng)用水飛薊賓治療后均明顯降低，提示水飛薊賓具有減輕肝細(xì)胞損傷、抗肝纖維化的作用。Western b1ot檢測(cè)模型組大鼠肝組織WNT蛋白表達(dá)量顯著高于正常組，各用藥組WNT蛋白表達(dá)量顯著降低。HE染色及Masson染色顯示，模型組大鼠肝細(xì)胞排列紊亂，有大量的變性、壞死、炎細(xì)胞浸潤(rùn)、脂肪空泡及纖維結(jié)締組織的增生，應(yīng)用水飛薊賓進(jìn)行干預(yù)后，肝血竇周圍膠原明顯減少，相鄰血竇間的纖維聯(lián)絡(luò)基本消失，證明其具有抑制和逆轉(zhuǎn)纖維化，保護(hù)肝細(xì)胞作用。綜上所述，水飛薊賓有可能通過抑制Wnt/β-catenin信號(hào)通路降低HA、LN、HyP、PCⅢ、CⅣ水平，促進(jìn)肝纖維化恢復(fù)，對(duì)酒精肝纖維化模型大鼠有明顯的治療作用，為臨床治療酒精肝纖維化提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

參考文獻(xiàn):

［1］ Mi11er A M，HoriguchiN，JeongW I，etal.Mo1ecu1armechanisms of a1coho1ic 1iver disease: innate immunity and cytokines ［J］.Alcohol Clin ExPRes，2011，35（5）∶787-793.

［2］ 常彬霞，孫 穎，滕光菊，等.2012年歐洲肝病學(xué)會(huì)及2010年美國肝病學(xué)會(huì)關(guān)于酒精性肝病指南的解讀［J］.臨床肝膽病雜志，2015，31（1）: 30-34.

［3］ 段雪琳，韋燕飛，廖 丹，等.白花丹水煎液對(duì)四氯化碳誘導(dǎo)肝纖維化大鼠的干預(yù)作用［J］.世界華人消化雜志，2015，23（7）: 1059-1067.

［4］ Parsons C J，Takashima M，RiPPe R A.Mo1ecu1armechanisms of hePatic fibrogenesis［J］.JGastroenterol HePatol，2007，22 （SuPP11）: S79-S84.

［5］ Friedman S L.Reversibi1ity of hePatic fibrosis and cirrhosis—is it a11hyPe?［J］.Nat Clin PractGastroenterol HePatol，2007，4（5）: 236-237.

［6］ Gunzerath L，Hewitt B G，Li T K，et al.A1coho1 research: Past，Present，and future［J］.Ann NY Acad Sci，2011，1216: 1-23.

［7］ 李青權(quán)，周 強(qiáng)，?？∑?，等.水飛薊素藥理機(jī)制新進(jìn)展及臨床價(jià)值再探討［J］.臨床肝膽病雜志，2015，31（2）: 315-317.

［8］ 曹芹芳，虞滌霞，王 密，等.肝泰膠囊對(duì)大鼠乙醇性肝纖維化的治療作用［J］.華中科技大學(xué)學(xué)報(bào):醫(yī)學(xué)版，2013，42（1）: 22-26.

［9］ 楊鳳蕊，婁建石，方步武.蒿鱉養(yǎng)陰軟堅(jiān)方抗CC14復(fù)合因素所致大鼠肝纖維化的作用［J］.中草藥，2011，42（3）: 530-534.

［10］ 陸 輝，龍子江，張道福.無患子皂苷對(duì)高脂血癥大鼠血脂代謝的影響和對(duì)血管內(nèi)皮功能的保護(hù)作用［J］.中國藥業(yè)，2011，20（11）: 14-15.

［11］ 任慧雅，裴 林，張立眾，等.肝復(fù)健膠囊對(duì)免疫性肝纖維化大鼠轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1的影響［J］.中成藥，2007，29 （5）: 768-770.

［12］ 王志旺，邵 晶，郭 玫，等.五脈綠絨蒿總黃酮和總生物堿抗大鼠肝纖維化［J］.中成藥，2013，35（6）: 1125-1128.

［13］ 劉 珺，徐選福，郭傳勇，等.貝母辛抗大鼠肝纖維化的作用研究［J］.中草藥，2013，44（11）: 1455-1459.

［14］ 曹正柳，資曉飛，熊耀斌，等.金水寶膠囊對(duì)肝纖維化大鼠模型TIMP-1及HA等的影響［J］.中成藥，2011，33 （9）: 1497-1499.

［15］ Ling L，Nurcombe V，Coo1S M.Wnt signa1ing contro1s the fate ofmesenchyma1 stem ce11s［J］.Gene，2009，433（1-2）: 1-7.

Protectlve effects of Sllybln Capsules on alcohol-lnduced hepatlc flbrosls ln rats

HUANG Jing， LONG Zi-jiang*， LILi， LU Song-xia
（Anhui University of Traditional Chinese Medicine，Hefei230038，China）

ABSTRACT:AIM To eva1uate the efficacy of Si1ybin CaPsu1es in the treatment of a1coho1-induced 1iver fibrosis in rats and the Possib1e mechanism.METH0DS Fifteen hea1thy ma1e SD rats were used as norma1 contro1 grouP；eighty-five rats receiving ethano1mixtureweremade a1coho1ic 1iver fibrosismode1s.Fifty ratswith successfu1 mode1swere random1y divided into themode1grouP，Si1ybin CaPsu1es high-，medium-and 1ow-dose grouPs，and Positive grouP.After successive administration for four weeks，serum was seParated and HA，LN，HyP，PCⅢ，and CⅣ1eve1sweremeasured by ELISA.The re1ative exPression quantity of 1iver tissueWNT Protein were determined by Western b1ot.Liver tissuemorPho1ogy wasmeasured by HE staining.HePatic fibrosis was eva1uated by Masson trichrome staining.RESULTS ComPared with the contro1 grouP，the Si1ybin-treated grouPs had 1ower 1eve1s of HA，LN，HyP，PCⅢ，and CⅣ（P＜0.01）.The re1ative exPression quantity ofWNTProtein significant-1y reduced in high-and midd1e-dose grouPs（P＜0.01，P＜0.05），whi1e the re1ative exPression quantity of WNT Protein non-significant1y reduced in the 1ow-dose grouP（P＞0.05）；co11agen fibers of the 1iverweremarked-1y decreased in Si1ybin-treated grouPs.HePatic fibrosiswas significant1y imProved in Si1ybin-treated grouPs.C0NCLUSI0 N Si1ybin CaPsu1es are effective in the treatment of a1coho1-induced 1iver fibrosis by attenuating hePatic injury and fibrosis.

*通信作者:龍子江（1957—），男，碩士，教授，從事中藥對(duì)心腦血管疾病防治作用的研究。Te1:（0551）5169216，E-mai1: 1zjy1s@ 163.com

作者簡(jiǎn)介:黃 靜（1984—），女，碩士生，從事中藥的藥理作用及對(duì)疾病防治作用的研究。Te1: 15256061620，E-mai1: huangjing_ 0214@163.com

收稿日期:2015-06-12

中圖分類號(hào):R285.5

文獻(xiàn)標(biāo)志碼:A

文章編號(hào):1001-1528（2016）02-0229-06