生殖激素誘導(dǎo)小尾寒羊同期發(fā)情效果研究

辛?xí)粤?，王二耀，滑留帥，馮亞杰，張子敬，趙洪昌，施巧婷，陳付英，楚秋霞，王鴻周

(河南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所， 河南鄭州 450008)

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生殖激素誘導(dǎo)小尾寒羊同期發(fā)情效果研究

辛?xí)粤?，王二耀，滑留帥，馮亞杰，張子敬，趙洪昌，施巧婷，陳付英，楚秋霞，王鴻周

(河南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所， 河南鄭州 450008)

摘要：為了比較不同生殖激素組合對(duì)小尾寒羊同期發(fā)情效果的影響，采用國產(chǎn)孕酮陰道海綿栓+PMSG+PG(Ⅰ組)、CIDR+PMSG+PG(Ⅱ組)和2次氯前列醇法(Ⅲ組)對(duì)478只小尾寒羊進(jìn)行同期發(fā)情研究。結(jié)果表明，Ⅰ組和Ⅱ組母羊同期發(fā)情率分別為81.1%和83.5%，人工授精后受胎率分別為75.3%和83.2%，差異不顯著(P>0.05)。Ⅲ組同期發(fā)情率94.9%，與Ⅰ組和Ⅱ組比較，差異顯著(P<0.05)；人工授精后受胎率80.6%，與其他兩組無顯著差異(P>0.05)。3種處理方法導(dǎo)致母羊陰道炎發(fā)病率分別為8.2%、3.0%和0。綜合考慮3種處理方法的同期發(fā)情效果、受胎率和藥品成本，國產(chǎn)孕酮陰道海綿栓可替代CIDR在生產(chǎn)中大范圍使用。

關(guān)鍵詞：生殖激素；孕酮陰道海綿栓；氯前列醇；同期發(fā)情；小尾寒羊

近年來，中原農(nóng)區(qū)規(guī)?；犸曫B(yǎng)羊蓬勃發(fā)展，出現(xiàn)了一批上千只甚至幾萬只規(guī)模的羊場(chǎng)。要實(shí)現(xiàn)規(guī)?；驁?chǎng)的盈利，必須充分利用現(xiàn)代繁殖技術(shù)，尤其是同期發(fā)情和人工授精技術(shù)。同期發(fā)情、同期配種、同期產(chǎn)羔以及對(duì)成批整齊的羔羊集中培育、出欄，便于生產(chǎn)的組織和管理，是提高規(guī)?；B(yǎng)羊場(chǎng)繁殖率和養(yǎng)羊生產(chǎn)管理水平的一項(xiàng)必不可少的技術(shù)手段。另外，開展羊胚胎移植工作也需要供體羊和受體羊進(jìn)行同期發(fā)情，其發(fā)情同步化程度是影響胚胎移植成功率的關(guān)鍵因素之一。因此，羊同期發(fā)情技術(shù)是養(yǎng)羊業(yè)生產(chǎn)中一項(xiàng)重要的實(shí)用技術(shù)。本研究使用商品化的國產(chǎn)孕酮陰道海綿栓和進(jìn)口CIDR以及2次前列腺素法對(duì)小尾寒羊進(jìn)行誘導(dǎo)同期發(fā)情，以期找到在生產(chǎn)中便于操作、成本低廉、效果又穩(wěn)定的同期發(fā)情方法。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1試驗(yàn)用動(dòng)物本試驗(yàn)在河南金卡特農(nóng)業(yè)開發(fā)有限公司羊場(chǎng)和博愛顯威養(yǎng)殖專業(yè)合作社進(jìn)行。所用母羊?yàn)榻】禒顩r良好的經(jīng)產(chǎn)或育成小尾寒羊478只；種公羊?yàn)槎挪囱蚝吞m坪烏骨綿羊。

1.1.2藥品國產(chǎn)孕酮陰道海綿栓(含30 mg 氟孕酮，南京農(nóng)業(yè)大學(xué)研制)；CIDR(Y型孕酮陰道栓，含45 mg黃體酮，新西蘭生產(chǎn)，批號(hào)：S051011)；孕馬血清(PMSG，1 000 IU/瓶，寧波第二激素廠產(chǎn)品，批號(hào)：140209)；氯前列醇(PG，0.2 mg/支，上海計(jì)劃生育研究所產(chǎn)品，批號(hào)：20131105)；注射用促黃體素釋放激素A3(LHRH-A3，20 μg/支，寧波市三生藥業(yè)有限公司產(chǎn)品，批號(hào)：120905)；長效土霉素注射液(10 mL∶土霉素100萬單位，江西省特邦動(dòng)物藥業(yè)有限公司產(chǎn)品，批號(hào)：20140611)。

1.2方法

1.2.1同期發(fā)情處理將所選小尾寒羊隨機(jī)分為3個(gè)試驗(yàn)組：Ⅰ組(國產(chǎn)孕酮陰道海綿栓+PMSG+PG法)共180只，在任意一天早上埋植國產(chǎn)孕酮陰道海綿栓，為預(yù)防粘連和感染，在埋植前將海綿栓前端和四周涂抹紅霉素軟膏。放栓當(dāng)天為0 d，第11天頸部肌肉注射孕馬血清330 IU/只，第13天早上撤栓并肌肉注射氯前列醇0.1 mg/只。同時(shí)檢查有無陰道炎癥發(fā)生，如有粘連和陰道炎發(fā)生，及時(shí)用含抗生素的溫生理鹽水沖洗；Ⅱ組(CIDR+PMSG+PG法)共200只，使用CIDR處理，無需涂抹紅霉素軟膏，其他處理同Ⅰ組；Ⅲ組(二次氯前列醇法)共98只，在任意一天第1次注射氯前列醇0.1 mg/只，10 d后第2次注射氯前列醇0.1 mg/只。

1.2.2發(fā)情鑒定在撤栓或第2次注射氯前列醇后，用試情公羊(試情布每天要洗凈)按1∶40～1∶50的公母比例，每天早晚各試情1次。在試情過程中，要隨時(shí)趕動(dòng)母羊，不要讓母羊擁擠，使試情公羊有機(jī)會(huì)追逐發(fā)情母羊，接受公羊爬跨并站立不動(dòng)的母羊視為發(fā)情母羊。做好標(biāo)記和記錄，統(tǒng)計(jì)12 h～24 h、24 h～48 h、48 h～72 h時(shí)間段內(nèi)發(fā)情母羊數(shù)量。

1.2.3人工授精采集杜泊羊和蘭坪烏骨綿羊種公羊新鮮精液，用維生素B12做3倍稀釋后人工授精，輸入子宮頸約1.5 cm深處。每只母羊授精2次～3次，每次間隔12 h，在第1次輸精時(shí)，同時(shí)肌肉注射促黃體素釋放激素A3(促排3號(hào))20 μg/只。

1.2.4妊娠檢查輸精后17 d～25 d 用試情公羊檢查返情，60 d 用獸用B超進(jìn)行妊娠診斷。統(tǒng)計(jì)母羊不返情率和受胎率。數(shù)據(jù)用SPSS進(jìn)行卡方檢驗(yàn)。

2結(jié)果

2.1不同處理方法各時(shí)間段內(nèi)發(fā)情數(shù)量和發(fā)情率

本試驗(yàn)用3種不同方法誘導(dǎo)小尾寒羊同期發(fā)情，在撤栓或第2次注射氯前列醇后12 h開始試情，統(tǒng)計(jì)12 h～24 h、24 h～48 h、48 h～72 h時(shí)間段內(nèi)發(fā)情母羊數(shù)量。結(jié)果表明，使用國產(chǎn)孕酮陰道海綿栓和CIDR并配合使用孕馬血清和氯前列醇的兩組母羊，其發(fā)情集中在12 h～24 h，發(fā)情母羊數(shù)分別占該組總發(fā)情母羊數(shù)的71.9%和74.3%；兩組72 h內(nèi)總發(fā)情率分別為81.1%和83.5%，差異不顯著(P>0.05)。而2次氯前列醇法處理組母羊發(fā)情則集中在24 h～48 h，發(fā)情母羊數(shù)占該組總發(fā)情母羊數(shù)的63.4%，72 h內(nèi)總發(fā)情率則為94.9%(表1)，與Ⅰ組和Ⅱ組相比差異顯著(P<0.05)。

表1　3種處理方法各時(shí)間段內(nèi)母羊同期發(fā)情效果

2.2人工授精受胎率統(tǒng)計(jì)

撤栓時(shí)檢查有無陰道炎癥發(fā)生，統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)，Ⅰ組陰道炎發(fā)病率達(dá)8.2%，Ⅱ組僅為3.0%，Ⅲ組未出現(xiàn)陰道炎。采集鮮精施行人工授精，25 d未返情率3個(gè)組分別為88.4%、91.0%和89.2%，60 d受胎率則分別為75.3%、83.2%和80.6%，其中國產(chǎn)孕酮陰道海綿栓組受胎率稍低，但經(jīng)卡方檢驗(yàn)，與其他兩組并無顯著差異(P>0.05)。具體情況見表2。

表2　小尾寒羊人工授精受胎率情況統(tǒng)計(jì)

3討論

3.1母羊同期發(fā)情集中程度分析

本試驗(yàn)采用國產(chǎn)孕酮陰道海綿栓和CIDR配合孕馬血清和氯前列醇進(jìn)行小尾寒羊同期發(fā)情處理，其發(fā)情時(shí)間集中在12 h～24 h，一般撤栓當(dāng)天下午就有母羊發(fā)情，第2天早上試情發(fā)現(xiàn)大部分母羊發(fā)情，兩個(gè)處理組發(fā)情母羊數(shù)分別占該組總發(fā)情母羊數(shù)的71.9%和74.3%；第2天下午有少量母羊發(fā)情，第3天僅有少數(shù)幾只發(fā)情。

本試驗(yàn)與田樹軍等[1]的研究結(jié)果類似，他們采用撤栓前1 d注射孕馬血清、撤栓時(shí)注射氯前列烯醇的方法，0 h～24 h同期發(fā)情率在80%以上。而馬世林等[2]的研究表明，用CIDR處理13 d后撤栓，同時(shí)肌注400 IU孕馬血清，其0 h～24 h發(fā)情母羊數(shù)占總發(fā)情母羊數(shù)的20%，24 h～48 h為52%，48 h～72 h還有28%的羊發(fā)情，母羊發(fā)情集中在24 h～48 h。葉峰等[3]在撤栓的同時(shí)肌肉注射500 IU孕馬血清，母羊也是集中在24 h～48 h發(fā)情。常育賢等[4]同樣在撤栓時(shí)肌肉注射333 IU孕馬血清，母羊多在24 h～56 h發(fā)情。分析原因，可能與孕馬血清注射的時(shí)間和撤栓時(shí)是否注射氯前列醇有關(guān)。孕馬血清可以促進(jìn)卵巢上卵泡的發(fā)育,但起作用需要一定的時(shí)間；氯前列醇可快速溶解卵巢上殘存的黃體。因此，撤栓前2 d注射孕馬血清，然后2 d后撤掉孕酮栓同時(shí)注射氯前列醇，迅速解除孕激素對(duì)卵泡發(fā)育的抑制作用，則可以顯著提高母羊的同期發(fā)情率和發(fā)情集中程度。

3.2不同處理方法對(duì)母羊同期發(fā)情效果分析

本試驗(yàn)采用國產(chǎn)和進(jìn)口孕酮栓的兩組處理方法，72 h內(nèi)總發(fā)情率分別為81.1%和83.5%，差異不顯著，說明兩種孕酮栓效果相當(dāng)；而2次氯前列醇法處理組總發(fā)情率為94.9%，與Ⅰ組和Ⅱ組相比差異顯著。劉長彬等[5]采用國產(chǎn)孕酮陰道海綿栓處理小尾寒羊，同期發(fā)情率達(dá)到89.06%。田小平等[6]應(yīng)用1次氯前列醇鈉法處理四季發(fā)情的貴州白山羊，同期發(fā)情率可達(dá)到51.8%。陳西英[7]應(yīng)用氯前列烯醇和陰道海綿栓對(duì)280只繁殖母羊進(jìn)行同期發(fā)情試驗(yàn)，用陰道海綿栓試驗(yàn)的母羊同期發(fā)情率91.88%，用氯前列烯醇試驗(yàn)的母羊同期發(fā)情率98.33%。而權(quán)凱等[8]用孕酮栓和2次氯前列醇法處理青海高原半細(xì)毛羊，得到的同期發(fā)情率分別為86.8%和61.8%，2次氯前列醇法效果不如孕酮栓法。2次氯前列醇法能否得到較高的同期發(fā)情率，與綿羊是否為四季發(fā)情品種和處理的季節(jié)有關(guān)。氯前列醇可以溶解黃體，但僅對(duì)排卵后4 d～16 d的黃體有效，其他時(shí)間(4 d以下、17 d以上)的黃體對(duì)氯前列醇不敏感；并且氯前列醇對(duì)于卵巢處于靜止?fàn)顟B(tài)(如處于非繁殖季節(jié)或哺乳期)的母羊也無效果。小尾寒羊?qū)儆诔Ｄ臧l(fā)情綿羊品種，其雌二醇、孕酮和促卵泡素等生殖激素在4個(gè)季節(jié)中基本穩(wěn)定[9]，因此用氯前列烯醇處理效果良好。值得注意的是，氯前列醇法用于綿羊同期發(fā)情時(shí), 一旦有未被發(fā)現(xiàn)的妊娠羊, 則會(huì)引起流產(chǎn), 造成一定的經(jīng)濟(jì)損失, 所以在處理前應(yīng)仔細(xì)檢查，排除妊娠羊只。

3.3不同處理方法對(duì)受胎率的影響

有研究表明，2次氯前列醇法同期發(fā)情率比陰道海綿栓法高，但情期受胎率卻低。李長存等[10]研究發(fā)現(xiàn)，陰道栓處理的母羊同期發(fā)情率90.63%，受胎率65.5%；用氯前列烯醇處理的母羊同期發(fā)情率97.58%，受胎率僅為42.15%。彭巍等[11]采用PG+PG法處理農(nóng)區(qū)藏羊，情期受胎率為60.42%，而采用CIDR+PMSG法處理，農(nóng)區(qū)藏羊的情期受胎率可達(dá)到80.0%。也有不同的報(bào)道，田斌等[12]在春季分別用氯前列烯醇和CIDR+PMSG法對(duì)小尾寒羊進(jìn)行同期發(fā)情處理，氯前列烯醇法的情期受胎率為76.31%，CIDR+PMSG法的情期受胎率為72.09%。本試驗(yàn)結(jié)果表明，3種處理方法60 d情期受胎率分別為75.3%、83.2%和80.6%，無顯著差異，2次氯前列醇法受胎率還高于陰道海綿栓法，這可能與本試驗(yàn)在人工授精時(shí)肌肉注射促黃體素釋放激素A3(促排3號(hào))有關(guān)。

另外，國產(chǎn)孕酮陰道海綿栓組受胎率偏低，可能受使用該栓引起的8.2%陰道炎發(fā)病率影響。有研究表明[13]，使用海綿栓會(huì)導(dǎo)致27.6%的母羊陰道發(fā)生炎癥。本試驗(yàn)在埋栓前將海綿栓前端和四周涂抹紅霉素軟膏，起到潤滑和預(yù)防感染的作用，可降低海綿栓發(fā)生粘連和炎癥的風(fēng)險(xiǎn)。

3.4不同處理方法同期發(fā)情成本分析

進(jìn)口CIDR市場(chǎng)價(jià)約35元，而國產(chǎn)孕酮海綿栓約12元，孕馬血清用藥量每只羊約需6元，1次氯前列醇注射需4元。這樣使用CIDR進(jìn)行同期發(fā)情的藥品成本約為45元，國產(chǎn)孕酮海綿栓為22元，而2次氯前列醇法僅需要8元。本試驗(yàn)結(jié)果表明，國產(chǎn)孕酮陰道海綿和CIDR誘導(dǎo)母羊的同期發(fā)情率和受胎率均無顯著差異，因此，在規(guī)?；B(yǎng)羊生產(chǎn)中，完全可以使用國產(chǎn)孕酮陰道海綿栓誘導(dǎo)母羊同期發(fā)情，可有效降低處理費(fèi)用。目前，應(yīng)用CIDR誘導(dǎo)同期發(fā)情，同期發(fā)情率和受胎率等效果非常穩(wěn)定，不易粘連造成陰道炎癥，但處理成本較高，一般在進(jìn)行胚胎移植供體羊同期發(fā)情時(shí)使用。2次氯前列醇法成本最低，且同期發(fā)情效果確實(shí)可靠，雖然有造成孕羊流產(chǎn)的風(fēng)險(xiǎn)，但在管理規(guī)范的羊場(chǎng)，公、母羊分圈飼養(yǎng)，常年開展同期發(fā)情處理，羊群發(fā)情周期明確，使用2次氯前列醇法還是切實(shí)可行的。

總之,本試驗(yàn)采用國產(chǎn)孕酮陰道海綿栓和CIDR，配合使用孕馬血清和氯前列醇，取得了較好的同期發(fā)情效果，其同期發(fā)情率和受胎率無顯著差異，考慮成本因素，國產(chǎn)孕酮陰道海綿栓更適合在規(guī)?；B(yǎng)羊生產(chǎn)中大范圍使用。2次氯前列醇法成本最低，操作簡便，且同期發(fā)情率高于孕酮栓組，差異顯著，受胎率與孕酮栓組無差異，因此，在管理規(guī)范、母羊繁殖狀況清楚的規(guī)?；B(yǎng)羊場(chǎng)，可以考慮使用。

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Effects of Reproductive Hormone Induction on Estrus Synchronization in Small-tail Han Sheep

XIN Xiao-ling,WANG Er-yao,HUA Liu-shuai,FENG Ya-jie,ZHANG Zi-jing,ZHAO Hong-chang,SHI Qiao-ting,CHEN Fu-ying,CHU Qiu-xia,WANG Hong-zhou

(InstituteofAnimalHusbandryandVeterinaryMedicine,HenanAcademyofAgriculturalSciences,Zhengzhou，Henan，450008,China)

Abstract:In order to study the effects of different reproductive hormone combinations on estrus synchronization in small-tail Han ewes,three combinations of reproductive hormones were used to induce estrus synchronization in 478 small-tail Han ewes.The ewes were divided into three groups.The ewes in group 1 were treated with domestic progeterone-impregnated intravaginal sponge,the pregnant mare serum gonadotrophin ( PMSG) and prostaglandins;The ewes in group 2 were treated with CIDR,PMSG and prostaglandins;The ewes in group 3 were treated two times with prostaglandins.The result showed that the estrus rates of ewes in group 1 and group 2 were 81.1% and 83.5%;The pregnancy rates after artificial insemination were 75.3% and 83.2%,respectively.There were no significant differences between group 1 and group 2(P>0.05).The estrus rate of ewes in group 3 was 94.9%,and had significant differences with group 1 or group 2(P<0.05).Meanwhile,the pregnancy rate of ewes in group 3 was 80.6%,and there were no significant differences with other two groups(P>0.05).The vaginitis incidence of the three group ewes were 8.2%,3.0% and 0,respectively.Considering the estrus rate,the pregnancy rate and medicine costs of the three treatments,domestic progeterone-impregnated intravaginal sponge can be applied in a larger scale to substitute for CIDR.

Key words:reproductive hormone;progeterone-impregnated intravaginal sponge;prostaglandin;estrus synchronization；small-tail Han sheep

文章編號(hào):1007-5038(2016)03-0067-04

中圖分類號(hào):S857.21

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A

作者簡介：辛?xí)粤?1972-)，女，河南鄭州人，副研究員，博士，主要研究方向?yàn)閯?dòng)物遺傳育種與繁殖。

基金項(xiàng)目：河南省科技攻關(guān)計(jì)劃項(xiàng)目(142102110070)；農(nóng)業(yè)部轉(zhuǎn)基因?qū)ｍ?xiàng)(2014ZX08008)；河南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院優(yōu)秀青年科技基金項(xiàng)目(2013YQ20)

收稿日期：2015-10-08