雞傳染性貧血病研究進(jìn)展

宋麗霞?。ㄉ綎|省海陽(yáng)市辛安鎮(zhèn)獸醫(yī)站　265124）　包小萌　范 磊　（山東省海陽(yáng)市動(dòng)物疫病預(yù)防與控制中心）　高延娜?。ㄉ綎|省海陽(yáng)市二十里店鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)站）

文獻(xiàn)綜述

雞傳染性貧血病研究進(jìn)展

宋麗霞（山東省海陽(yáng)市辛安鎮(zhèn)獸醫(yī)站265124）包小萌范 磊（山東省海陽(yáng)市動(dòng)物疫病預(yù)防與控制中心）高延娜（山東省海陽(yáng)市二十里店鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)站）

雞傳染性貧血病(CIA)是由雞傳染性貧血病毒(CIAV)引起的一種使能使感染雞再生障礙性貧血、淋巴組織萎縮、出血的病毒性傳染病。雞傳染性貧血病(CIA)主要發(fā)生于2～4周齡的雛雞，導(dǎo)致雛雞貧血和成雞的免疫抑制。目前，雞傳染性貧血病對(duì)養(yǎng)雞業(yè)的危害不斷上升，已引起世界各個(gè)養(yǎng)禽國(guó)家的廣泛關(guān)注，如何有效的進(jìn)行防治成為一大熱點(diǎn)，本文就近些年雞傳染性貧血病(CIA)的研究進(jìn)展及防治措施做一綜述。

雞傳染性貧血病是由圓環(huán)病毒科(Circoviridae)陀螺病毒(Gyrovirus)屬的雞傳染性貧血病毒(Chicken infectious anemia virus，CIAV)引起的，臨床上以貧血、骨髓黃染、全身淋巴組織萎縮和免疫機(jī)能損害為主要特征。1979年Yuasa等[1]首次分離到雞傳染性貧血病毒(Gifu—1)株。該病呈世界性分布，廣泛存在于日本、英國(guó)、瑞典、美國(guó)、巴西、阿根廷、澳大利亞、新西蘭和南非等國(guó)家。1992年我國(guó)崔現(xiàn)蘭等[2]首次從肉雞群中分離出該病毒。目前我國(guó)山東、河南、江蘇、吉林、黑龍江、安徽、廣西等多個(gè)省市地區(qū)有該病的報(bào)道。由于雞傳染性貧血病毒(CIAV)不僅可導(dǎo)致雛雞再生障礙性貧血和免疫抑制，嚴(yán)重影響雛雞的生長(zhǎng)發(fā)育和免疫反應(yīng)，還可與馬立克氏病病毒、傳染性法氏囊病病毒等相互作用[3]，給養(yǎng)殖業(yè)帶來(lái)了巨大損失，因此該病已成為當(dāng)前嚴(yán)重危害我國(guó)養(yǎng)雞業(yè)的傳染病之一，應(yīng)引起我們的高度重視。

1　病原學(xué)

（1）CIAV在2000年第7次國(guó)際病毒分類委員會(huì)(International Committee on Taxonomy of Virus, ICTV)報(bào)告后被歸為圓環(huán)病毒科(Circoviridae)，陀螺病毒(Gyrovirus)屬。CIAV是一種單股環(huán)狀的DNA病毒，無(wú)囊膜，平均直徑為25.0～26.5nm[4]，二十面體對(duì)稱，為二十面體單股負(fù)鏈DNA病毒。CIAV基因組全長(zhǎng)2.3kb，有3個(gè)部分或完全重疊的開放閱讀框，分別編碼VP1、VP2和VP3三種種蛋白質(zhì)。VP1是唯一的衣殼蛋白[5]，也是主要的免疫原蛋白，其與VP2蛋白共同作用可誘導(dǎo)產(chǎn)生較高的中和抗體；VP2為CIAV的非結(jié)構(gòu)蛋白，可能作為一個(gè)折疊蛋白參與病毒組裝過(guò)程VP1空間構(gòu)象的形成，最近發(fā)現(xiàn)VP2具有蛋白磷酸酶活性[6]，但其在病毒感染中具體生物學(xué)功能尚不清楚；VP3是功能蛋白，可誘導(dǎo)雞胸腺淋巴母細(xì)胞和原始造血細(xì)胞凋亡[7]，導(dǎo)致雛雞出現(xiàn)嚴(yán)重貧血、出血及免疫抑制。CIAV是一種比較保守的病毒，目前認(rèn)為CIAV僅有1個(gè)血清型。（2）目前，MDCC-CU147細(xì)胞系可能是CIAV增殖的最好細(xì)胞系。2013年崔鵬鵬等[8]提取生長(zhǎng)狀態(tài)良好的MDCC-MSB1細(xì)胞的Mrna，以5'端標(biāo)記有生物素的OligodTprimer為引物反轉(zhuǎn)錄，合成雙鏈后連接Adapter。分級(jí)純化后，通過(guò)BP重組反應(yīng)構(gòu)建入門文庫(kù)，入門文庫(kù)擴(kuò)增后提取質(zhì)粒，通過(guò)LR重組反應(yīng)轉(zhuǎn)化為表達(dá)文庫(kù)。結(jié)果表明，構(gòu)建的表達(dá)文庫(kù)具有較高的質(zhì)量，為研究雞傳染性貧血病毒的受體及其細(xì)胞嗜性奠定了基礎(chǔ)。

2　流行病學(xué)

（1）雞是CIAV已知的唯一宿主。所有年齡的雞對(duì)感染均易感[9]，但是1～3周齡有完全免疫力的雛雞對(duì)該病的易感性迅速降低[10]。在火雞或鴨血清中檢測(cè)不到CIAV抗體。用高劑量的病毒接種1日齡的雛火雞，對(duì)感染有抵抗力，并且不產(chǎn)生CIAV抗體。（2）雞傳染性貧血病毒可以通過(guò)水平和垂直方式傳播。經(jīng)孵化的雞蛋進(jìn)行垂直傳播認(rèn)為是最重要的傳播途徑[11]。由感染公雞的精液也可以造成雞胚的感染[12]。（3）蛋傳播僅發(fā)生于實(shí)驗(yàn)感染母雞后的8～14d[13]，但是野外觀察表明垂直傳播可能出現(xiàn)在感染后的3～6周內(nèi)，1～3周是一個(gè)高峰，很顯然取決于感染的傳播率和對(duì)CIAV免疫力的產(chǎn)生。（4）感染后5～7周，病毒在雞的糞便中的濃度較高。經(jīng)直接或間接接觸通過(guò)口腔途徑最后可能發(fā)生水平感染，在實(shí)驗(yàn)感染雞證實(shí)的通過(guò)呼吸途徑引起的感染，在野外也有可能發(fā)生。雞傳染性貧血病毒在雞群中很容易的到傳播。在自然感染CIAV的野外雞群，大多數(shù)雞出現(xiàn)血清學(xué)陽(yáng)轉(zhuǎn)通常需要2～4周。（5）目前，雞傳染性貧血病毒廣泛存在于世界上所有主要家禽生產(chǎn)國(guó)家。英國(guó)、瑞典、德國(guó)、加拿大、丹麥、美國(guó)、荷蘭、巴西和阿根廷等國(guó)家都證實(shí)了本病的存在，澳大利亞及其它一些歐洲、非洲、亞洲國(guó)家，通過(guò)血清學(xué)調(diào)查，也發(fā)現(xiàn)了雞群廣泛感染CIAV。日本至少有11個(gè)毒株，西德的代表株為Cux-1，美國(guó)的代表株為CIA-1從這些毒株的抗原性來(lái)看，CIAV只有一個(gè)血清型，但各株毒的變化較大。我國(guó)于1992年由崔現(xiàn)蘭等在黑龍江省首先分離到該病毒。隨后我國(guó)其它省市的雞群中也陸續(xù)分離到該病毒，證實(shí)了國(guó)內(nèi)雞群中CIAV感染較為普遍。崔現(xiàn)蘭等[14]還應(yīng)用建立的間接免疫熒光法(IIFA)對(duì)來(lái)自大連、沈陽(yáng)、哈爾濱地區(qū)部分雞場(chǎng)的血清進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果陽(yáng)性率分別為78.3%、81.3%和84%。劉岳龍等[15]應(yīng)用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)和斑點(diǎn)雜(Dot-blot)的方法對(duì)江蘇省不同地市隨機(jī)采集的2月齡左右不同疾病的病雞DNA樣品進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果表明在被檢的52個(gè)不同雞群來(lái)源的病料中，有36個(gè)雞群來(lái)源的病料DNA顯示CIAV陽(yáng)性，群陽(yáng)性率69.2%；許蘭菊等[16]用Digoxigenin標(biāo)記的1.4kbCIAV探針對(duì)河南省不同地市隨機(jī)采集的病雞材料用斑點(diǎn)雜交的方法檢測(cè)CIAV，結(jié)果檢出CIAV群陽(yáng)性率為46.3%，個(gè)體陽(yáng)性率30.6%；楊林等[17]選擇黑龍江省內(nèi)不同地區(qū)、不同品種、不同日齡的雞群，利用間接酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)對(duì)黑龍江省9個(gè)市(縣)13個(gè)雞場(chǎng)的3502份雞血清進(jìn)行了雞傳染性貧血病血清學(xué)抗體檢測(cè)，結(jié)果表明這13個(gè)雞場(chǎng)均有陽(yáng)性雞檢出，血清陽(yáng)性率在4.34%～87.8%之間，平均性率為33.64%；王莉莉等[18]對(duì)山東省12個(gè)地市的58個(gè)雞群雞傳染性貧血的流行情況進(jìn)行了調(diào)查，共檢測(cè)了368份血清樣品，蛋雞群、肉雞群和種雞群的雞傳染性貧血病毒(CIAV)ELISA抗體檢出率分別為91.7%、77.6%和84.75%，平均抗體陽(yáng)性率為83.2%。蔣玲艷等應(yīng)用PCR檢測(cè)技術(shù)，對(duì)采自廣西五個(gè)主要養(yǎng)雞地區(qū)50多個(gè)雞群321羽病雞的組織樣品，進(jìn)行了雞傳染性貧血病毒核酸的檢測(cè)，結(jié)果檢測(cè)的病例平均陽(yáng)性率為28.34%楊克禮等應(yīng)用PCR檢測(cè)技術(shù)，對(duì)采自安徽省六個(gè)主要養(yǎng)雞地區(qū)39個(gè)雞群的95羽病雞的組織樣品進(jìn)行了雞傳染性貧血病毒核酸的檢測(cè)，結(jié)果檢測(cè)的病例平均陽(yáng)性率為22.11%。作為養(yǎng)雞大省的湖北省，目前尚未見有關(guān)于雞傳染性貧血病流行情況的報(bào)道。

3　CIAV的分子生物學(xué)檢查

常規(guī)的實(shí)驗(yàn)室診斷方法有病毒分離與鑒定、血清學(xué)試驗(yàn)、電鏡檢查、測(cè)量血細(xì)胞壓積值(HCT)、單克隆抗體免疫組化法檢查CIAV抗原和抗體等。這些方法要求純化病毒、獲得病毒感染的MSB1細(xì)胞、陽(yáng)性血清或單克隆抗體等，造成成本高、花費(fèi)時(shí)間較多，且具有特異性差、敏感度低、不適于大批量檢測(cè)等缺點(diǎn)，而不能滿足臨床快速診斷的需要。而基于核酸技術(shù)的診斷方法的特點(diǎn)恰能彌補(bǔ)常規(guī)診斷方法的這些不足。

3.1聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)檢測(cè)用PCR方法檢測(cè)CIAV是近期的一個(gè)新發(fā)展。已有幾個(gè)實(shí)驗(yàn)室建立了用來(lái)檢測(cè)CIAV感染的MSB1細(xì)胞、病料組織或疫苗中CIAV-DNA的PCR方法。吉榮等設(shè)計(jì)一對(duì)擴(kuò)增部分VP1序列的引物對(duì)臨床上表現(xiàn)為免疫抑制狀態(tài)的雞群進(jìn)行CIAV和REV共感染的檢測(cè)；劉岳龍等根據(jù)已發(fā)表的Cux-1株基因組序列設(shè)計(jì)了一對(duì)擴(kuò)增整個(gè)VP3序列及部分VP1序列的引物，用于CIAV的臨床診斷；謝芝勛等設(shè)計(jì)一對(duì)擴(kuò)增部分VP3序列和部分VP1序列的引物進(jìn)行PCR檢測(cè)人工感染雞體內(nèi)的CIAV動(dòng)態(tài)的研究，并從PCR檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性的組織中分離到了CIAV。宋秀龍等設(shè)計(jì)兩對(duì)引物建立了用套式PCR檢測(cè)CIAV的方法，并證明該法具有較高敏感性和特異性。此外，Car-rieJ等報(bào)道用實(shí)時(shí)PCR(real-timePCR)對(duì)CIAV感染的細(xì)胞中的DNA進(jìn)行了定量檢測(cè)，并證實(shí)其敏感性、特異性優(yōu)于套式PCR。這些研究說(shuō)明，用PCR對(duì)CIAV進(jìn)行臨床診斷不僅切實(shí)可行，且具有快速、準(zhǔn)確、特異的優(yōu)點(diǎn)，滿足了臨床診斷的要求。用優(yōu)化的PCR方法不僅能從實(shí)驗(yàn)和自然感染雞的臨床樣品中檢出CIAVDNA，而且還可為SPF雞群的監(jiān)測(cè)、活毒疫苗中CIAV污染的檢測(cè)以及CIAV的進(jìn)一步研究開辟一條新的途徑。

3.2核酸探針檢測(cè)利用核酸探針技術(shù)作為臨床檢測(cè)手段，可提高診斷的敏感性及特異性，為證明病原在體內(nèi)的存在、復(fù)制提供直接的依據(jù)，在獸醫(yī)臨床中可作為流行病學(xué)調(diào)查、臨床檢測(cè)和診斷手段之一。用于臨床診斷CIAV的探針有全基因組DNA、VP1基因片段、部分VP1序列和部分非編碼區(qū)序列等，一般用地高辛標(biāo)記。如段玉友等用VP1基因片段制成探針對(duì)江蘇等地隨機(jī)采集的病死雞樣品進(jìn)行了CIAV感染情況的檢測(cè)；金文杰等用CIAV全基因組探針從江西、廣西等地被診斷為IBD的病料樣品中檢測(cè)到了CIAV；孫偉等用含CIAV部分VP1序列和部分非編碼區(qū)序列的探針從疑為CIAV的15～30日齡雞的20份肝DNA中檢測(cè)到了6份陽(yáng)性。CIAV探針可用于檢測(cè)臨床病料組織中DNA、受感染的MSB1細(xì)胞DNA，具有特異性強(qiáng)、重復(fù)性好、一次可檢測(cè)多份樣品的優(yōu)點(diǎn)。因此，可用于對(duì)田間大批量樣品進(jìn)CIAV帶毒檢測(cè)和流行病學(xué)調(diào)查。

4　防治

國(guó)內(nèi)外對(duì)本病的防治研究多數(shù)仍處于實(shí)驗(yàn)階段，還未篩選出治療雞傳染性貧血病的特效藥，且用于臨床的報(bào)告較少，結(jié)論尚不一致，有待于進(jìn)一步研究。本病主要以預(yù)防為主，在引種時(shí)要從沒有該病發(fā)生的種雞場(chǎng)引種。做好馬立克氏病病、傳染性法氏囊病等免疫抑制病的預(yù)防接種工作，降低機(jī)體對(duì)雞傳染性貧血病病毒的易感性。也可采用保健中藥提高免疫力，防治雞傳染性貧血病。李敬云[19]采用中藥八珍湯加減(黃芪、當(dāng)歸、黨參、熟地、川芎、白術(shù)、茯苓、杭芍、麥冬、肉蓯蓉、刺首烏、枸杞子、菟絲子)防治該病。Vielitz等[20]報(bào)道，用自然發(fā)病雞肝乳劑或SPF雞胚毒對(duì)13～15周齡的種雞飲水免疫，能有效預(yù)防子代雞該病的暴發(fā)。德國(guó)羅曼動(dòng)物保健有限公司的研究資料表明，使用Cux-1株活疫苗飲水免疫適宜年齡的后備種雞，可給子代提供高水平而一致的母源抗體，有效保護(hù)子代抵抗自然野毒的侵襲，從而解決CIA所帶來(lái)的系列問題；該活疫苗在當(dāng)今世界近30個(gè)國(guó)家使用10多年，從未發(fā)現(xiàn)任何不良影響。這說(shuō)明，使用Cux-1 株活疫苗免疫種雞保護(hù)子 代，是控制該病切實(shí)有效的方法。另外，Steenhuisen等試驗(yàn)證明給母代接種減毒的CIAV疫苗可有效地預(yù)防該病的發(fā)生。事實(shí)上，在集約化養(yǎng)殖場(chǎng)，實(shí)行管理上的防控措施只能在一定程度上減少雞傳染性貧血病毒的感染，效果往往不顯著。而依靠其病原的自然傳播感染種雞群控制該病又具有不確定性且難以控制。目前尚無(wú)商品化CIA滅活疫苗、亞單位疫苗、 基因工程疫苗等非CIA活疫苗可用，因此，研究安全、高效的雞傳染性貧血病疫苗仍是當(dāng)前國(guó)內(nèi)外獸醫(yī)學(xué)者的重要課題。

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