注射用益氣復(fù)脈（凍干）改善小鼠心肌缺血再灌注損傷的作用

鄭顯杰， 龐力智， 韓玉瀟， 李 芳， 寇俊萍， 余伯陽(yáng)（中國(guó)藥科大學(xué)，江蘇省中藥評(píng)價(jià)與轉(zhuǎn)化重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江蘇南京211198）

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注射用益氣復(fù)脈（凍干）改善小鼠心肌缺血再灌注損傷的作用

鄭顯杰， 龐力智， 韓玉瀟， 李 芳， 寇俊萍， 余伯陽(yáng)*
（中國(guó)藥科大學(xué)，江蘇省中藥評(píng)價(jià)與轉(zhuǎn)化重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江蘇南京211198）

摘要：目的 考察不同時(shí)間點(diǎn)給藥時(shí)，注射用益氣復(fù)脈（凍干）（紅參、麥冬、五味子）改善小鼠心肌缺血再灌注損傷的效應(yīng)。方法 采用小鼠冠狀動(dòng)脈左前降支結(jié)扎誘導(dǎo)心肌缺血再灌注損傷模型，根據(jù)不同給藥時(shí)間分為8組，即假手術(shù)組，模型組，缺血前10 min給予益氣復(fù)脈組（益氣復(fù)脈＋10 min），益氣復(fù)脈-0 min組，缺血后10、20、30 min給予益氣復(fù)脈組（益氣復(fù)脈-10 min、益氣復(fù)脈-20 min、益氣復(fù)脈-30 min）以及維拉帕米（Verapami1）組，分別在缺血前10 min及缺血后0、10、20、30 min腹腔注射給予益氣復(fù)脈（1.067 g/kg），以及缺血后20 min給予Verapami1（1.85 mg/kg），模型組及假手術(shù)組給予同體積氯化鈉注射液。在缺血30 min再灌注24 h后，采用小動(dòng)物高頻彩色超聲（US）測(cè)定心臟功能，紅四氮唑法測(cè)定心臟梗死面積，蘇木精-伊紅染色法觀察心臟病理組織形態(tài)學(xué)，試劑盒法測(cè)定血清乳酸脫氫酶（LDH）和肌酸激酶（CK）活性。結(jié)果 益氣復(fù)脈各時(shí)間點(diǎn)給藥均可有效保護(hù)缺血再灌注損傷心肌，降低心臟梗死面積（P＜0.01）；一定程度提高心臟射血分?jǐn)?shù)（EF）、縮短分?jǐn)?shù)（FS）；顯著降低LDH及CK活性（P＜0.05，P＜0.01）。除益氣復(fù)脈＋10 min組與模型組相比沒(méi)有顯著性差異（P＞0.05）外，益氣復(fù)脈顯著改善心肌病理組織形態(tài)學(xué)變化，減少炎性細(xì)胞浸潤(rùn)（P＜0.01）；益氣復(fù)脈-20 min組、益氣復(fù)脈-30 min組與益氣復(fù)脈其他組相比，LDH活性顯著降低（P＜0.01）。結(jié)論 益氣復(fù)脈能有效改善小鼠心肌缺血再灌注損傷，特別是在缺血后20 min和30 min給予更有效。

關(guān)鍵詞：注射用益氣復(fù)脈（凍干）；維拉帕米（Verapami1）；心肌缺血再灌注；心肌保護(hù)；梗死面積；心臟病理形態(tài)學(xué)變化；血清酶活性

KEY W 0RDS：Yiqi Fumai Lyophi1ized Injection；Verapami1；myocardia1 ischemia/reperfusion（MI/I）；cardioprotection；infarct sizes；myocardia1histopatho1ogica1morpho1ogy；serum enzymatic activity

缺血性心臟?。╥schemic heart disease，IHD）是因冠脈循環(huán)改變引起冠脈血流和心肌需求之間不平衡而導(dǎo)致的心肌損害，易致心肌梗死或心衰，故死亡率甚高，嚴(yán)重威脅人類(lèi)生命健康和生活質(zhì)量，造成醫(yī)療消耗和醫(yī)療負(fù)擔(dān)日益沉重［1-2］。目前溶栓治療和直接經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈介入治療（PCI）成為防治心肌缺血性疾病最有效的手段，然而在心肌缺血恢復(fù)血流過(guò)程中易引起心肌再灌注損傷（myocardia1 ischemia/reperfusion injury，MII I），可進(jìn)一步導(dǎo)致心肌細(xì)胞的死亡和梗死面積的增加，干預(yù)心肌缺血再灌注，可減小40%～50%的梗死面積，有利于減輕心肌損害［1，3-4］。

注射用益氣復(fù)脈（凍干）（YQFM）是基于中藥經(jīng)典方劑生脈散研制而成的一種現(xiàn)代注射制劑，由紅參、麥冬、五味子組成，具有益氣復(fù)脈，養(yǎng)陰生津之功效，臨床用于冠心病勞累性心絞痛氣陰兩虛癥和冠心病所致慢性左心功能不全Ⅱ、Ⅲ級(jí)氣陰兩虛證，療效確切，副作用較低［5-6］。藥理學(xué)研究證實(shí)，該制劑可顯著改善異丙腎上腺素誘導(dǎo)的小鼠心肌損傷及冠脈結(jié)扎誘導(dǎo)的大鼠慢性心衰［7-8］，但有關(guān)其對(duì)小鼠心肌缺血再灌注損傷的作用，尚未見(jiàn)報(bào)道。本研究擬重點(diǎn)探討注射用益氣復(fù)脈（凍干）改善小鼠心肌缺血再灌注損傷的作用以及時(shí)效關(guān)系，為其防治心肌缺血再灌注損傷的臨床合理用藥提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料

1.1 試劑與儀器 水合氯醛（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）；紅四氮唑（TTC）（上海靈錦精細(xì)化工有限公司）；乳酸脫氫酶（LDH）、肌酸激酶（CK）測(cè)試盒（南京建成生物工程研究所）；DW-3000型小動(dòng)物人工呼吸機(jī)（北京眾實(shí)迪創(chuàng)科技發(fā)展有限公司）；電子分析天平（瑞士Mett1er-To1edo公司）；BL-420S生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)（成都泰盟科技有限公司）；Visua1Sonics Vevo 2100小動(dòng)物專(zhuān)用高頻彩色超聲（加拿大Vivosonic公司）；奧林帕斯DX45顯微鏡（日本O1ympus公司）；DP72相機(jī)（日本O1ympus公司）；6-0帶線縫合針（上海浦東金環(huán)醫(yī)療用品股份有限公司）。

1.2 藥物與制劑 注射用益氣復(fù)脈（凍干）（天津天士力之驕藥業(yè)有限公司，批號(hào)20130805）；鹽酸維拉帕米注射液（上海禾豐制藥有限公司，批號(hào)121101）；氯化鈉注射液（晨欣制藥有限公司，批號(hào)1406301335）。

1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 雄性ICI小鼠，8周齡，體質(zhì)量（25±2）g，SPF級(jí)，由揚(yáng)州大學(xué)比較醫(yī)學(xué)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物合格證號(hào)為SCXK（蘇）2007-0001。

2 方法

2.1 動(dòng)物分組與給藥 取雄性ICI小鼠104只，隨機(jī)分為假手術(shù)組、模型組、缺血前10 min給予益氣復(fù)脈組（益氣復(fù)脈＋10 min）、缺血后0 min給予益氣復(fù)脈組（益氣復(fù)脈-0 min）、缺血后10 min給予益氣復(fù)脈組（益氣復(fù)脈-10 min）、缺血后20 min給予益氣復(fù)脈組（益氣復(fù)脈-20 min）、缺血后30 min給予益氣復(fù)脈（益氣復(fù)脈-30 min）、陽(yáng)性藥組（Verapami1）8組，每組13只。益氣復(fù)脈給予劑量為1.067 g/kg（相當(dāng)于生藥量4.51 g/kg），Verapami1為1.85 mg/kg（術(shù)后20 min給藥），各制劑以氯化鈉注射液溶解。各組小鼠腹腔注射給藥1次，假手術(shù)組和模型組分別給予等量的氯化鈉注射液。手術(shù)過(guò)程中因技術(shù)原因造成小鼠意外死亡，各組間數(shù)量不均。后以相同模型制備方法，制備模型3次，供數(shù)據(jù)測(cè)定。

2.2 小鼠心肌缺血再灌注模型的制備 采用4%水合氯醛腹腔注射麻醉小鼠，仰臥位固定，胸部剪毛，碘酒-酒精進(jìn)行皮膚消毒，連接人工呼吸機(jī)（潮氣量3 mL，呼吸比2∶1，心率110次/min）。參考文獻(xiàn)［9］，在胸骨左側(cè)與胸骨平行作一縱行切口（1.2 cm），鈍性分離胸大肌，暴露第四根肋骨，從第四根肋骨處用止血鉗打開(kāi)胸腔，撕開(kāi)心包，暴露心臟，輕壓胸廓即可將心臟擠出胸腔外。用6-0號(hào)絲線，在冠狀動(dòng)脈左前降支起源出下方3 mm處連同線穿過(guò)的心肌一并結(jié)扎（活結(jié)），結(jié)扎完成迅速放回胸腔，留線頭在胸腔外以便再灌，擠出氣體并縫合。30 min后，輕拉留在外的線頭，解開(kāi)活結(jié)，恢復(fù)心臟冠脈血流，發(fā)生再灌注。24 h后，測(cè)定各項(xiàng)指標(biāo)。模型制作期間用BL-420S生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)對(duì)心電圖進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)控。

2.3 小動(dòng)物高頻彩色超聲（US）測(cè)定 再灌注24 h后，4%水合氯醛腹腔注射麻醉小鼠，仰位，利用Visua1Sonics Vevo 2100小動(dòng)物專(zhuān)用高頻彩色超聲儀，測(cè)定各組小鼠心臟射血分?jǐn)?shù)（EF）和縮短分?jǐn)?shù)（FS）。

2.4 血清酶活性測(cè)定 再灌注24 h后，小鼠眼眶取血，室溫靜置30 min后，2 500 r/min離心10 min，取上清，冷凍保存。采用試劑盒測(cè)定肌酸激酶（CK）及乳酸脫氫酶（LDH）活力，方法參照試劑盒說(shuō)明書(shū)。

2.5 心臟病理組織形態(tài)學(xué)變化觀察 取血后摘取心臟，取左心室結(jié)扎位置到心尖的病變區(qū)域，經(jīng)10%福爾馬林固定2 d，常規(guī)石蠟包埋，切片（5 μm厚），二甲苯脫蠟10 min，再用100%乙醇置換二甲苯2 min，95%乙醇置換1 min，80%乙醇置換1 min，75%乙醇置換1 min，蒸餾水沖洗2 min，蘇木精染色5 min，流水洗去蘇木精液，鹽酸乙醇分化30 s，水浸泡15 min，伊紅染色2 min，常規(guī)脫水，透明，中性樹(shù)膠封片，采用光學(xué)顯微鏡觀察其組織病理學(xué)改變（攝片倍數(shù)200×，標(biāo)尺長(zhǎng)50 μm）。心肌細(xì)胞變性、壞死等按病變占被檢心臟的范圍分別標(biāo)記為0.5分（輕微）、1分（輕度）、2分（中度）、3分（重度）、4分（極重度）。累加所有分?jǐn)?shù)，并計(jì)算出每組動(dòng)物的均分。2.6 心臟梗死面積的測(cè)定 另摘取心臟，置于-20℃冰箱冷凍2 h，取出后從結(jié)扎處到心尖，切1～2 mm左右的薄片，連續(xù)5片。將切片置于含1% TTC（pH 7.4）染液培養(yǎng)皿，避光37℃孵育15 min，取出拍照記錄。應(yīng)用圖像分析系統(tǒng)Image J測(cè)量心肌梗死面積，即梗死心肌占左心室面積百分比（II/LV）［10-11］。

2.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 所有數(shù)據(jù)采用Graphpad Prism 5軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以±s表示，對(duì)各組數(shù)據(jù)比較采用方差分析，對(duì)于兩組間的比較采用Student’s檢驗(yàn)，當(dāng)3組或3組以上比較時(shí)采用Dunnett’s檢驗(yàn)，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 不同時(shí)間點(diǎn)給予益氣復(fù)脈對(duì)心肌缺血再灌注損傷模型小鼠心臟功能的影響 采用小動(dòng)物專(zhuān)用高頻彩色超聲儀，測(cè)定各組小鼠心臟射血分?jǐn)?shù)和縮短分?jǐn)?shù)。如圖1所示，模型組小鼠心臟射血分?jǐn)?shù)和縮短分?jǐn)?shù)明顯降低，與假手術(shù)組比較，具有極顯著差異（P＜0.01）；各時(shí)間點(diǎn)給藥組與模型組比較，心臟功能都有一定程度改善，但無(wú)顯著性差異（P＞0.05）。

3.2 不同時(shí)間點(diǎn)給予益氣復(fù)脈對(duì)心肌缺血再灌注損傷模型小鼠心臟梗死面積的影響 對(duì)心臟切片進(jìn)行TTC染色，測(cè)定各組梗死面積。如圖2所示，模型組心肌梗死面積顯著增加，與假手術(shù)組比較，具有顯著性差異（P＜0.01）；各時(shí)間點(diǎn)給藥組梗死面積均明顯下降，與模型組比較有顯著性差異（P＜0.01）。益氣復(fù)脈各組與陽(yáng)性藥Verapami1組之間無(wú)顯著性差異（P＞0.05），表明不同時(shí)間點(diǎn)給予益氣復(fù)脈都可有效降低缺血再灌注心肌梗死面積，且缺血后給藥略?xún)?yōu)于缺血前10 min給藥。

3.3 不同時(shí)間點(diǎn)給予益氣復(fù)脈對(duì)心肌缺血再灌注損傷模型小鼠心臟病理組織形態(tài)學(xué)變化的影響 利用HE染色對(duì)各組心臟損傷程度進(jìn)行評(píng)估，如圖3所示，模型組小鼠心內(nèi)膜下心肌壞死，血管周?chē)霈F(xiàn)水腫現(xiàn)象，嗜中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)嚴(yán)重，病理組織學(xué)評(píng)分與假手術(shù)組比較，具有顯著性差異（P＜0.01）；益氣復(fù)脈-0 min、益氣復(fù)脈-10 min、益氣復(fù)脈-20 min、益氣復(fù)脈-30 min與模型組比較，心肌病理組織學(xué)形態(tài)均有顯著性改善（P＜0.01）；益氣復(fù)脈＋10 min組與模型組比較，有一定改善趨勢(shì)，但評(píng)分無(wú)顯著性差異（P＞0.05），并比益氣復(fù)脈-30 min組損傷嚴(yán)重（P＜0.05）。

圖1 不同時(shí)間點(diǎn)給予益氣復(fù)脈對(duì)心肌缺血再灌注損傷模型小鼠心臟功能的影響Fig.1 Effects of Yiqi Fumai Lyophilized Injection（YQFM）on cardiac function at different time points in m ice induced by m yocardial ischem ia and reperfusion

圖2 不同時(shí)間點(diǎn)給予益氣復(fù)脈對(duì)心肌缺血再灌注損傷模型小鼠心臟梗死面積的影響Fig.2 Effects of Yiqi Fumai Lyophilized Injection（YQFM）on infarct sizes at different time points in m ice induced by m yocardial ischem ia and reperfusion

圖3 不同時(shí)間點(diǎn)給予益氣復(fù)脈對(duì)心肌缺血再灌注損傷模型小鼠心臟病理組織形態(tài)學(xué)變化的影響Fig.3 Effects of Yiqi Fum ai Lyophilized Injection（YQFM）on appearance ofm icem yocardial histopathologicalmorphology at different time points in m ice induced by m yocardial ischem ia and reperfusion

圖4 不同時(shí)間點(diǎn)給予益氣復(fù)脈對(duì)心肌缺血再灌注損傷模型小鼠血清CK和LDH活力的影響Fig.4 Effects of Yiqi Fumai Lyophilized Injection（YQFM）on serum CK and LDH activities at different time points in m ice induced by myocardial ischem ia and reperfusion

3.4 不同時(shí)間點(diǎn)給予益氣復(fù)脈對(duì)心肌缺血再灌注損傷模型小鼠血清CK及LDH活性的影響 對(duì)各組小鼠血清進(jìn)行CK及LDH活性測(cè)定，如圖4所示，模型組CK及LDH活性顯著升高（P＜0.01），而不同時(shí)間點(diǎn)給藥益氣復(fù)脈后，與模型組相比，CK及LDH活力均顯著下降（P＜0.05，P＜0.01）。此外，各給藥組均能顯著降低CK活力，但各組別之間無(wú)顯著性差異（P＞0.05），提示陽(yáng)性藥Verapami1與益氣復(fù)脈在不同給藥時(shí)間點(diǎn)對(duì)心臟再灌注損傷都具有一定保護(hù)作用，而益氣復(fù)脈-20 min、益氣復(fù)脈-30 min，降低LDH活性作用明顯優(yōu)于益氣復(fù)脈＋10 min、益氣復(fù)脈-0 min、益氣復(fù)脈-10 min 3個(gè)給藥時(shí)間點(diǎn)（P＜0.01）。4 討論

我國(guó)成年人理想心血管健康比例極低，約為0.2%，冠心病死亡率有逐步增大的趨勢(shì)［12-13］。盡快恢復(fù)冠脈血流是臨床上治療心肌缺血的重要手段，然而再灌注過(guò)程中往往對(duì)心肌產(chǎn)生不可逆轉(zhuǎn)的損傷。心肌缺血再灌注損傷是多種因素誘導(dǎo)的復(fù)雜病理過(guò)程，其主要機(jī)制涉及氧自由基產(chǎn)生、鈣離子超載、能量代謝障礙、炎癥反應(yīng)、內(nèi)皮細(xì)胞功能障礙及凋亡等多個(gè)環(huán)節(jié)［14］。心臟梗死面積的大小是急性心肌梗死患者愈后生存的決定性因素［15-16］，大量研究表明，在心肌再灌注早期進(jìn)行一定干預(yù)，可有效地減小心臟梗死面積［17-18］。益氣復(fù)脈作為古方生脈散的現(xiàn)代制劑，在臨床上廣泛應(yīng)用于心肌缺血性疾病。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，益氣復(fù)脈可提高心臟功能，抑制核因子NF-κB的激活并顯著降低腫瘤壞死因子、白細(xì)胞介素-6和白細(xì)胞介素-1β等炎癥因子的活性，具有一定抗炎、抗氧化損傷的作用［7-8］。然而，益氣復(fù)脈是否可改善心肌缺血再灌注模型的有效性和合理的給藥干預(yù)時(shí)間尚未闡明。

超聲心動(dòng)圖（US）作為一種無(wú)創(chuàng)、實(shí)時(shí)、活體、動(dòng)態(tài)研究小動(dòng)物微小結(jié)構(gòu)形態(tài)及功能評(píng)價(jià)的方法，為開(kāi)展心血管疾病病理與治療基礎(chǔ)研究項(xiàng)目提供技術(shù)平臺(tái)［19］。本研究利用US測(cè)定心肌缺血再灌注損傷小鼠EF、FS，結(jié)果顯示模型組小鼠心臟功能明顯受損，益氣復(fù)脈各時(shí)間點(diǎn)給藥組EF、FS平均值均高于模型組，提示對(duì)心臟功能有一定改善作用，但各時(shí)間點(diǎn)給藥組與模型組之間無(wú)顯著性差異，這可能與單次給藥或再灌注時(shí)間過(guò)短有關(guān)［20］。本研究結(jié)果還顯示，在不同時(shí)間點(diǎn)給予益氣復(fù)脈都能有效降低模型小鼠心臟的梗死面積，與陽(yáng)性藥Ca2＋通道阻斷劑Verapami1［21］組之間無(wú)顯著性差異，益氣復(fù)脈＋10 min組的效果略弱于其他組別。組織病理學(xué)檢查表明模型組小鼠的心肌組織呈現(xiàn)嚴(yán)重的心肌變性，心肌纖維腫脹，壞死增加及炎性細(xì)胞的浸潤(rùn)，而益氣復(fù)脈各時(shí)間點(diǎn)給藥組可顯著改善模型小鼠心肌組織損傷，心肌組織炎性細(xì)胞浸潤(rùn)、細(xì)胞水腫和壞死減少。益氣復(fù)脈＋10 min組活性略差于其他組，這可能與補(bǔ)益方劑本身具有滋養(yǎng)、補(bǔ)益機(jī)體氣血陰陽(yáng)不足的作用，用于正常動(dòng)物可能有濫補(bǔ)留邪之嫌有關(guān)，提示“虛則補(bǔ)之”更符合中醫(yī)治則［22］。

另一方面，血清CK和LDH活力是再灌注損傷的重要診斷指標(biāo)。CK通常存在于動(dòng)物的心臟、肌肉以及腦等組織的細(xì)胞漿和線粒體中，是一個(gè)與細(xì)胞內(nèi)能量代謝、肌肉收縮等有直接關(guān)系的重要激酶［23］。在心肌梗死中減少ATP-CK代謝與改善心臟收縮功能有一定相關(guān)性［24］。LDH活力的上升與心肌細(xì)胞壞死密切相關(guān)［25-26］，其活力高低說(shuō)明細(xì)胞膜完整性被破壞的程度大小。本研究結(jié)果顯示，益氣復(fù)脈各時(shí)間點(diǎn)給藥組可顯著降低模型小鼠心肌損傷，提示益氣復(fù)脈可改善ATP代謝，保護(hù)心肌細(xì)胞，從而減少CK的釋放。LDH活力測(cè)定顯示，益氣復(fù)脈-20 min、益氣復(fù)脈-30 min組明顯優(yōu)于其他各組別，在缺血20 min和30 min時(shí)間點(diǎn)可更有效減少心肌細(xì)胞的壞死，從而減少LDH的釋放。上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)，益氣復(fù)脈對(duì)小鼠心肌缺血再灌注損傷有明顯的改善作用，為該制劑臨床防治心肌再灌注損傷提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。另?yè)?jù)報(bào)道，益氣復(fù)脈中的人參皂苷類(lèi)化合物具有拮抗鈣離子通道和抗自由基的作用，還可改善血流動(dòng)力學(xué)參數(shù)，擴(kuò)張冠脈血管，增加血流量，減少外周阻力，在不增加心率的情況下調(diào)節(jié)血壓，不增加心臟氧消耗量的情況下增加心臟每搏輸出量［27-28］；益氣復(fù)脈中的五味子具有抗氧化活性［5，29-30］；益氣復(fù)脈中的麥冬多糖和皂苷類(lèi)成分有一定抗心肌缺血作用［31］。提示上述組分對(duì)益氣復(fù)脈改善心肌再灌注損傷的整體活性均有一定貢獻(xiàn)，值得進(jìn)一步關(guān)注。

文獻(xiàn)表明在再灌注開(kāi)始時(shí)，給予心肌保護(hù)藥物或其他措施可以減小心臟梗死面積［13］。臨床實(shí)驗(yàn)也表明，在心臟手術(shù)之前或血管成形術(shù)中進(jìn)行早期干預(yù)是實(shí)用、有效的手段［3-4］。本研究結(jié)果表明：心肌缺血后給予益氣復(fù)脈可有效改善心肌缺血再灌注損傷，其中益氣復(fù)脈-20 min、益氣復(fù)脈-30 min組在減少LDH釋放，減少心肌細(xì)胞壞死方面效果更佳，提示在再灌注前10 min至再灌注開(kāi)始時(shí)給予益氣復(fù)脈具有更好的效果。這與臨床上經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈介入治療（PCI）時(shí)，在第一個(gè)球囊擴(kuò)張結(jié)束時(shí)給予心臟保護(hù)劑是一致的［18］，為該制劑可能用于PCI的臨床治療提供一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。不同劑量的益氣復(fù)脈對(duì)心肌缺血再灌注損傷的作用，還需要在后續(xù)試驗(yàn)中繼續(xù)考察。益氣復(fù)脈及其有效組分可調(diào)節(jié)NF-κB、絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）、雷帕霉素靶蛋白（mTOI）等信號(hào)通路［29，32］，益氣復(fù)脈是否通過(guò)調(diào)節(jié)上述通路改善心肌缺血再灌注損傷，有待今后深入探討。

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Protective effects of Yiqi Fumai Lyophilized Injection on m ice With m yocardial ischem ia/reperfusion injury

ZHENG Xian-jie， PANG Li-zhi， HAN Yu-xiao， LIFang， KOU Jun-ping， YU Bo-yang*

（Jiangsu Provincial Key Laboratory of TCM Evaluation and Translational Research，China Pharmaceutical University，NanJing 2III9S，China）

ABSTRACT：AIM To eva1uate the cardioprotective effects of Yiqi Fumai Lyophi1ized Injection（Ginseng Radiet Rhizoma rubra，Ophiopogonis Radiand Schisandrae chinensis Fructus）（YQFM）on myocardia1ischemia/reperfusion（MI/I）injury tomice at different administration time points.METH 0DS Themousemode1 for the injury tomyocardia1ischemia reperfusion was estab1ished by 1igating 1eft descending coronary artery.Mice were divided into eight groups，inc1uding sham，MI/I，treatmentwith YQFM 10 min of pre-ischemia group（YQFM＋10 min），YQFM-0 min，treatmentwith YQFM 10 min，20 min and 30 min after ischemia groups（YQFM-10 min，YQFM -20 min and YQFM-30 min）and Verapami1group.Sham and MI/I groupswere injected with the same vo1ume of sodium ch1oride so1ution，whi1e Verapami1group was injected with 1.85 mg/kg Verapami120 min after ischemia.Cardiac functionswere assessed by echocardiography.Infarct size wasmeasured by tripheny1 tetrazo1ium（TTC）staining.Myocardia1histopatho1ogica1morpho1ogy was determined by hematoxy1in and eosin（H&E）staining.Cre-book=474,ebook=8atine kinase（CK）and 1actate dehydrogenase（LDH）activity weremeasured by commercia1assay kits.RESULTS Compared with MI/I group，YQFM cou1d significant1y reduce myocardia1 infarct size at a11administration time （P＜0.01）.A11YQFM groups tended to increase heart ejection fraction and fractiona1shortening to some extent. YQFM-0 min，YQFM-10 min，YQFM-20 min，YQFM-30 min and Verapami1groups cou1d significant1y reducewidespread myocardia1structura1disarray and subendocardia1necrosiswith perivascu1ar edema and neutrophi1s infi1tration（P＜0.01），except for MI/I and YQFM＋10 min groups.YQFM cou1d significant1y decrease the activities of CK and LDH（P＜0.05）.YQFM-20 min and YQFM-30 min groups cou1d more significant1y reduce LDH activity as compared with other YQFM groups，such as YQFM＋10 min，YQFM-0 min and YQFM-10 min groups（P＜0.01）.C0NCLUSI0NS YQFM can protect againstmyocardia1 ischemia/reperfusion injury，especia11y YQFM-20 min and YQFM-30 min groups.

*通信作者：余伯陽(yáng)（1959—），男，博士，教授，研究方向?yàn)橹兴幖皬?fù)方藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及作用機(jī)理。Te1：（025）86185158，E-mai1：boyangyucpu@163.com

作者簡(jiǎn)介：鄭顯杰（1978—），男，碩士生，研究方向?yàn)橹兴帍?fù)方藥效物質(zhì)基礎(chǔ)與作用機(jī)理。Te1：18561908631，E-mai1：18800845@ qq.com

基金項(xiàng)目：國(guó)家自然科學(xué)基金（81274004）；江蘇省高校優(yōu)勢(shì)學(xué)科建設(shè)工程資助項(xiàng)目（2014）

收稿日期：2015-05-19

doi：10.3969/j.issn.1001-1528.2016.03.001

中圖分類(lèi)號(hào)：I285.5

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號(hào)：1001-1528（2016）03-0473-08