芪黃疽愈方對大鼠肢體動脈硬化閉塞癥血流變的影響*

張　欣　劉　遠(yuǎn)　葛建立　馬云龍　 宋易華　李曉東

河北省中醫(yī)院(石家莊 050011)

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芪黃疽愈方對大鼠肢體動脈硬化閉塞癥血流變的影響*

張欣劉遠(yuǎn)葛建立△馬云龍 宋易華李曉東▲

河北省中醫(yī)院(石家莊 050011)

摘要目的：研究芪黃疽愈方對大鼠肢體動脈閉塞癥血流變的影響。方法：將50只Wistar 大鼠采用高脂飲食喂飼聯(lián)合隱動脈內(nèi)膜損傷的方法制作大鼠 ASO 模型，造模成功后隨機分為模型組、中藥組(芪黃疽愈方高、低、中濃度組)、西藥組，另取10只Wistar 大鼠為空白組?？瞻捉M給予普通飲食喂養(yǎng)，模型組給予高脂飼料喂養(yǎng)并以生理鹽水灌胃，中藥組給予高脂飼料喂養(yǎng)并以相應(yīng)濃度中藥灌胃，西藥組給予高脂飼料喂養(yǎng)，前列地爾肌注聯(lián)合西洛他唑口服，12周后腹主動脈取血，測量血流變學(xué)各指標(biāo)。結(jié)果：與正常組相比，模型組大鼠全血黏度、高、低切指數(shù)、紅細(xì)胞聚集指數(shù)明顯升高；與模型組比較，西藥組、中藥高濃度組大鼠血流變各項指標(biāo)下降明顯；與西藥組比較，中藥高濃度組血流變各指標(biāo)差異不明顯。結(jié)論：芪黃疽愈方能有效防止動脈硬化閉塞癥的發(fā)生和發(fā)展,對動脈硬化閉塞癥的治療起著積極的作用。

主題詞 閉塞性動脈硬化血流動力學(xué)@芪黃疽愈方

下肢動脈硬化閉塞癥(Arteriosclerosis Obliterans ,ASO)是指由于動脈硬化造成的下肢供血動脈內(nèi)膜增厚、管腔狹窄或閉塞，病變肢體血液供應(yīng)不足，引起下肢間歇性跛行、皮溫降低、疼痛、乃至發(fā)生潰瘍或壞死等臨床表現(xiàn)的慢性進展性疾病，常為全身性動脈硬化血管病變在下肢動脈的表現(xiàn)[1]。動脈粥樣硬化的形成與血液的流動性和黏性有密切關(guān)系，研究發(fā)現(xiàn),血液的黏度與切變速度的變化相關(guān),在低切變速度下,血液黏度增高。另外也受血漿黏度的影響,主要以纖維蛋白原和球蛋白的影響最為重要。此外,血漿中脂蛋白、膽固醇和甘油三酯增高也可使血液黏度增高[2]。本研究以大鼠為模型，觀察芪黃疽愈方各濃度組對血流變的改善作用，從而為治療ASO提供理論基礎(chǔ)。

1材料1.1動物8 ～10 個月齡清潔級 Wistar 大鼠60只， 體質(zhì)量(200 ±20)g，由河北醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心提供，實驗動物質(zhì)量合格證號 (1504024),血流變分析儀(眾馳偉業(yè) ZL9000plus)。

1.2藥物高脂飼料(83.15%基礎(chǔ)飼料，5%豬油，1%膽固醇，0.15%膽酸鈉及10%蛋黃粉[3]，其中：膽固醇、膽酸鈉、蛋黃粉均購于石家莊市勃盛化學(xué)試劑有限公司，豬油購于市場)。注射用前列地爾干乳劑；西洛他唑片；維生素D3注射液。芪黃疽愈方 ：黃芪20g，黃精、紅花、鬼箭羽、延胡索、海藻各12g，蟲、牛膝各9g，雞血藤15g)，按原方的組方比例，并根據(jù)體表面積的比率折算出200 g 大鼠的等效用藥劑量作為其用量，另取其1 / 2 劑量和2 倍劑量作為芪黃疽愈方低濃度和芪黃疽愈方高濃度組，于河北省中醫(yī)院藥劑科統(tǒng)一購買飲片，并請河北省中醫(yī)院藥劑科主任鑒定， 符合中華人民共和國藥典 ( 2005 版) 各項的規(guī)定，由河北省中醫(yī)院煎藥室煎制，4℃冰箱保存，芪黃疽愈方組的最終濃度為0.75g生藥/mL,低濃度組為0.35g生藥/mL，高濃度組為1.5g生藥/mL，實驗過程中每次中藥制劑均按同一標(biāo)準(zhǔn)進行。

2方法2.1模型制作造模方法：聯(lián)合采用高脂飲食喂飼及隱動脈內(nèi)膜損傷的方法[4]制作大鼠 ASO 模型制作。①實驗前適應(yīng)性喂養(yǎng)1周，排除飲食異常大鼠，高脂飼料喂養(yǎng)1周。②于清潔動物實驗室內(nèi)用1%戊苯巴比妥鈉( 1mL/200g) 腹腔注射麻醉，每只大鼠取左后肢消毒，從腹股溝中點向后肢內(nèi)側(cè)縱行切開皮膚，分離并暴露隱動脈，用動脈夾阻斷隱動脈遠(yuǎn)近端約1.5 ～ 2.0 cm，取胰島素注射器1支，沿隱動脈血管長軸由遠(yuǎn)端向近端刺入血管腔，將0.2～0.3mL注射用無菌蒸餾水緩慢注入阻斷部位血管，至血管充盈為止，5min后取下針頭和動脈夾，壓迫止血，縫合切口，內(nèi)膜損傷模型完成，共造模50只大鼠。

2.2實驗分組采用隨機數(shù)字表法分六組：模型組(10只)，芪黃疽愈方高濃度組(10只),芪黃疽愈方低濃度組(10只),芪黃疽愈方中濃度組(10只),西藥組(10只),空白組(10只)。

2.3給藥方法空白組：普通飲食喂養(yǎng)，自由飲水。模型組：高脂飼料喂養(yǎng)，并且在實驗開始時在大鼠右下肢肌肉注射維生素D3針劑(3×105μ/kg體重)，每隔30d重復(fù)1次；給予生理鹽水(1mL/100g大鼠)灌胃，1d1次，連續(xù)12周，自由飲水。中藥組(芪黃疽愈方低濃度組、芪黃疽愈方中濃度組、芪黃疽愈方高濃度組)：高脂飼料喂養(yǎng)，并且在實驗開始時在大鼠右下肢肌肉注射維生素D3針劑(3×105μ/kg體重)，每隔30d重復(fù)1次；給予前列地爾0.4μg/kg腹腔注射，1d1次，持續(xù)2周；各組給予相應(yīng)濃度中藥灌胃(1mL/100g大鼠)，1d1次，連續(xù)12周，自由飲水。西藥組：高脂飼料喂養(yǎng)，并且在實驗開始時在大鼠右下肢肌肉注射維生素D3針劑(3×105μ/kg體重)，每隔30天重復(fù)一次；給予前列地爾0.4μg/kg腹腔注射，1d1次，持續(xù)2周；西洛他唑(18mg/kg體重)灌胃，1d1次，連續(xù)12周，自由飲水。

2.4標(biāo)本采集及處理方法麻醉成功后，由腹主動脈采血4 ～ 5 mL至抗凝采血管中，將試管中的全血手工充分混勻，順序插入樣品盤孔中，于血流變分析儀上進行全血測試，全血測試結(jié)束后，以3000轉(zhuǎn)/分離心30min，于血流變分析儀上進行血漿檢測。

2.5統(tǒng)計學(xué)方法用SPSS11.0統(tǒng)計軟件，進行方差分析、秩和檢驗及SNK兩兩比較，分析全血黏度、高切指數(shù)、低切指數(shù)、紅細(xì)胞聚集指數(shù)在各組之間的差異。

3結(jié)果3.1對全血黏度的影響模型組全血黏度各切變率值均較空白組升高(P<0.01),提示血液黏度明顯增高。給予芪黃疽愈方的中藥組其全血黏度各切變率值均降低,以高濃度組作用更明顯(P<0.05)，其中低切變率隨中藥濃度升高，效果越好；中切變率數(shù)據(jù)呈現(xiàn)出模型組全血黏度升高，治療組降低的趨勢。西藥組也有降低全血黏度的作用(P<0.01),且西藥組與高濃度組比較，各切變率均無統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，提示芪黃疽愈方組降低全血黏度作用與西藥組相當(dāng)。

3.2對高切指數(shù)及低切指數(shù)的影響與空白組比較,模型組高切指數(shù)及低切指數(shù)升高(P<0.01)，有統(tǒng)計學(xué)意義。給予芪黃疽愈方中藥后,兩組數(shù)值均降低,其中以芪黃疽愈方高濃度組作用明顯(P<0.01)；西藥組較模型組相比，差異明顯(P<0.01)，但與芪黃疽愈方高濃度組差異不大，無統(tǒng)計學(xué)意義。

3.3對紅細(xì)胞聚集指數(shù)的影響模型組紅細(xì)胞聚集指數(shù)均高于空白組,提示模型組大鼠血流變學(xué)的異常。與模型組比較,芪黃疽愈方中濃度、高濃度、西藥組都與模型組有差別，均比模型組降低，說明治療有效。

4討論血液流變學(xué)指標(biāo)是反映血液、血細(xì)胞、血管功能狀態(tài)的主要指標(biāo)，血液黏度升高，增加了血液對血管壁的浸潤機會，使血管壁的內(nèi)皮增厚、變粗糙狹窄，因此它是多種病理的中間過程，如動脈硬化閉塞癥的出現(xiàn)。肢體動脈硬化閉塞癥發(fā)病機制為動脈內(nèi)膜粥樣斑塊形成,逐漸發(fā)展使血管管腔狹窄以致閉塞,也可因斑塊內(nèi)出血,或表面血栓形成使血流突然中斷[5]。國外的研究也證實血液流變學(xué)異常先于動脈硬化的形成，其改變對促進血管損傷、微循環(huán)障礙以及血栓形成和發(fā)展具有十分重要的影響。

本病屬祖國醫(yī)學(xué)“脫疽”范疇,早在《靈樞·癰疽篇》就對脫疽提出了“急斬之”的手術(shù)治療原則。陳淑長[6]依據(jù)病因、證候表現(xiàn)分脈絡(luò)寒凝、脈絡(luò)血瘀、脈絡(luò)瘀熱、脈絡(luò)熱毒四型；靳建旭等[7]使用活血湯加減同時聯(lián)合脈絡(luò)寧注射液治療療效顯著；李浩杰[8]辨證為4型采用中藥外用熏洗治療療效明顯。

芪黃疽愈方為多年臨床中的實踐、總結(jié)，根據(jù)脫疽的病機，我們認(rèn)為其主要為氣虛血瘀之證。從臨床癥狀看，肢體發(fā)涼怕冷，疼痛，步履沉重乏力，活動艱難，肢端、小腿有瘀斑，或足紫紅色、青紫色。舌有瘀斑或舌質(zhì)絳，脈弦澀。上述癥狀多為年老氣虛，運血無力，日久血行瘀滯而成。這種因虛致瘀之證，治療多以補氣為主，兼以活血通絡(luò)，因氣為血之母，氣行則血行，氣虛則血瘀。故芪黃疽愈方中，以補氣藥物為君，黃芪補氣固表、托瘡生肌，黃精補氣養(yǎng)陰、健脾益腎；兼以紅花活血通經(jīng)、散瘀止痛，鬼箭羽破血通經(jīng)，蟲破瘀血，續(xù)筋骨，延胡索活血，散瘀，理氣，止痛?！讹嬈聟ⅰ罚骸半u血藤，去瘀血，生新血，流利經(jīng)脈。”《本草崇原》指出：“海藻，其味苦咸，其性寒潔，故主治經(jīng)脈外內(nèi)之堅結(jié)?！Ｔ逯魍ń?jīng)脈，故治十二經(jīng)水腫，人身十二經(jīng)脈流通，則水腫自愈矣。” 合牛膝引藥下行，諸藥合用，氣旺血行，瘀散絡(luò)通，諸癥自可漸除。

參考文獻

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[2]戚仁鐸.診斷學(xué)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,1996.

[3]石鶴坤,張宏,杜青云,等.三種高脂乳劑誘導(dǎo)實驗性大鼠高脂血癥模型的比較[J].中國比較醫(yī)學(xué)雜志,2012,16(9):55-57.

[4]車兆義,宋清斌,張繼文,等.大鼠動脈硬化閉塞模型兩種構(gòu)建方法的比較[J].中國組織工程研究與臨床康復(fù),2008,29(9):9841-9844.

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[6]徐旭英.陳淑長教授診治動脈硬化閉塞癥經(jīng)驗[J].云南中醫(yī)中藥雜志,2010,31(3):3.

[7]靳建旭.中醫(yī)藥治療老年人下肢動脈硬化閉塞癥20例[J].中國中醫(yī)急癥,2005,37(3):71-72.

[8]李浩杰.中藥熏洗為主治療肢體動脈硬化閉塞癥81例[J].河北中醫(yī),2004,26(12):900-901.

(收稿2015-10-22；修回2015-11-30)

The influence of Qihuang Juyu prescription on blood hemorheology in rats with arteriosclerossis obliterans

The Traditional Chinese Medicine Medical Hospital of Hebei Province (Shijiazhuang 050001)

Zhang XinLiu YuanGe Jianli et al

ABSTRACTObjective: To study the effect of Qihuang Juyu prescription on blood rheology in rats with arteriosclerossis obliterans. Methods: 50 Wistar rats by making rat model of ASO for high fat diet fed feeding and saphenous arterial intimal injury method, then the modeling were randomly divided into model group, Chinese medicine group (the high, low and middle concentration group of Qihuang Juyu prescription), western medicine group, and another 10 Wistar rats were taken as the blank group.Blank group were given normal diet, model group given high fat diet and with physiological saline by gavage, traditional Chinese medicine group given high fat diet and to the corresponding concentration of traditional Chinese medicine orally, the western medicine group given high fat diet and cilostazol combined with alprostadil. After 12 weeks, abdominal aortic blood was taken and blood rheology measurement study of each index. Results: Compared with normal group, the whole blood viscosity, high and low shear index and erythrocyte aggregation index were significantly higher in the model group, compared with the model group, the blood rheology indexes of western medicine group and Chinese medicine group were decreased significantly. Conclusion: Qihuang Juyu prescriptionmore can effectively prevent arteriosclerosis occlusive disease occurrence and development and hardening of the arteries occlusion treatment of disease plays a positive role.

KEY WORDSArteriosclerosis obliteransHemodynamics@Qihuang Juyu prescription

通訊作者△

【中圖分類號】R543.1

【文獻標(biāo)識碼】A

doi:10.3969/j.issn.1000-7369.2016.03.050

*河北省科技支撐計劃項目(14277760D)

▲石家莊市中醫(yī)院(石家莊 050000)