燙傷藥水噴霧劑對(duì)大鼠燙傷創(chuàng)面療效的病理研究*

吳曉斌　陳德軒　張　星　馬朝群

江蘇省中醫(yī)院病理科(南京 210029)

?

·實(shí)驗(yàn)研究·

燙傷藥水噴霧劑對(duì)大鼠燙傷創(chuàng)面療效的病理研究*

吳曉斌陳德軒△張星▲馬朝群△

江蘇省中醫(yī)院病理科(南京 210029)

摘要目的：探討應(yīng)用燙傷藥水噴霧劑對(duì)燙傷大鼠創(chuàng)面治療作用的病理機(jī)制。方法：50只淺II°燙傷SD大鼠隨機(jī)分為燙傷藥水噴霧劑高、中、低劑量治療組，磺胺嘧啶銀組，基質(zhì)軟膏組，判斷創(chuàng)面病理組織學(xué)炎癥程度，觀(guān)察創(chuàng)面新生毛細(xì)血管數(shù)目。結(jié)果：燙傷藥水噴霧劑高、中劑量組有創(chuàng)面炎癥輕、燙傷創(chuàng)面毛細(xì)血管數(shù)量，促進(jìn)創(chuàng)面愈合作用。燙傷藥水噴霧劑中劑量組和基質(zhì)軟膏組新生毛細(xì)血管數(shù)有顯著性差異。結(jié)論：燙傷藥水噴霧劑中劑量對(duì)淺II°大鼠燙傷創(chuàng)面有減輕創(chuàng)面組織炎癥程度，增加新生毛細(xì)血管數(shù)量，促進(jìn)燙傷創(chuàng)面愈合的功效。

主題詞 燙傷，實(shí)驗(yàn)性@燙傷藥水大鼠

燙傷在現(xiàn)代社會(huì)的發(fā)病率呈上升趨勢(shì)。燙傷是臨床常見(jiàn)熱力燒傷的一種，因熱力、熾熱金屬、火焰、蒸氣和高溫氣體等所致的體表組織損害，主要是皮膚損害，以中小面積Ⅱ°燒傷為主[1]。臨床表現(xiàn)為：紅腫、熱痛等改變，損傷主要發(fā)生在皮膚、黏膜，治療效果主要與病變的范圍和深度相關(guān)。長(zhǎng)期以來(lái)，沒(méi)有一種較為理想的治療藥物和方法，始終難以解決患者的疼痛、感染、結(jié)痂、留疤、植皮、致殘等問(wèn)題[2]。燙傷藥水噴霧劑由地榆、虎杖、黃連等藥物組成，具有清熱解毒、化腐生肌的功效，治療各種原因?qū)е碌臓C傷不感染，愈合好，費(fèi)用低。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)燙傷藥水噴霧劑治療淺Ⅱ度燙傷大鼠動(dòng)物模型，對(duì)燙傷創(chuàng)面修復(fù)進(jìn)行病理觀(guān)察。

1材料1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物SD大鼠50只，體重190～220g，動(dòng)物合格證號(hào)：SCXK(浙)2008-0033，南京中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供。置室溫26℃,濕度50%環(huán)境，正常攝食攝水，常規(guī)喂養(yǎng)1周后用于實(shí)驗(yàn)。

1.2材料及儀器蘇木素-伊紅染液，南京宇盛達(dá)科技有限公司；70%酒精500mL；10%水合氯醛50mL；燙傷藥水噴霧劑由黃連、忍冬藤、地榆等中藥組成、江蘇省中醫(yī)院院內(nèi)制劑(蘇藥制字Z0400054)，主要制作工藝流程：以浸漬法等提取相關(guān)成分，致測(cè)定乙醇為75%，分別制備濃度為10g、20g、30g的低中高濃度藥水；磺胺嘧啶銀軟膏(國(guó)藥準(zhǔn)字H44020614)；Leica TP 1020自動(dòng)脫水機(jī)，SAKURA Tissue-Tek.TEC組織包埋機(jī)，Leica RM 2235切片機(jī)，Leica DM 2000顯微鏡，捷達(dá)病理圖文信息系統(tǒng)。

2方法2.1模型建立及分組SD大鼠按照常規(guī)飼養(yǎng)1周后，稱(chēng)重剃毛，70%酒精消毒，然后以10%水合氯醛3mL/kg腹腔注射麻醉后，將制作好的動(dòng)物固定板覆蓋在大鼠背部，恒溫水浴箱溫度設(shè)定在75℃，將4層無(wú)菌紗布浸泡在水浴箱內(nèi)，10s后取出，均勻覆蓋在大鼠背部裸露處15s，用0.9%氯化鈉注射液沖洗，無(wú)菌紗布擦干水分，形成淺Ⅱ度燙傷模型。

2.2給藥方法燙傷后30min將50只大鼠隨機(jī)分為5組，即基質(zhì)軟膏組(模型組)、磺胺嘧啶銀軟膏組(陽(yáng)性對(duì)照組)、燙傷藥水噴霧劑低劑量組(相當(dāng)于含提取液10g)、燙傷藥水噴霧劑中劑量組(相當(dāng)于含提取液20g)、燙傷藥水噴霧劑高劑量組(相當(dāng)于含提取液30g)。模型組給予基質(zhì)軟膏燙傷部位外涂，陽(yáng)性對(duì)照組予磺胺嘧啶銀軟膏燙傷部位外涂每次20mg/只，1d1次。按高、中、低劑量組分別外噴相應(yīng)藥物，3噴約10mL，1d1次。

2.3病理檢查燙傷后第5、10、15 d，每組大鼠麻醉后截取1.5cm×1.5cm創(chuàng)面皮膚，每次取兩塊，取材后即刻置于10 %中性福爾馬林液中，經(jīng) 24h固定后，按外檢病理要求取材，標(biāo)本經(jīng)脫水、浸蠟處理、石蠟包埋切片，蘇木素-伊紅(HE)染色，光鏡觀(guān)察病理組織學(xué)，每個(gè)標(biāo)本隨機(jī)觀(guān)察5個(gè)視野(在切片中心及四周各取1個(gè)視野)，病理圖文分析系統(tǒng)計(jì)算各組大鼠新生毛細(xì)血管數(shù)目。

2.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析，數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，采用t檢驗(yàn)。

3結(jié)果3.1大鼠燙傷創(chuàng)面病理組織學(xué)正常大鼠皮膚在第5、10、15d病理組織學(xué)示表皮結(jié)構(gòu)清晰層次分明，真皮中見(jiàn)毛囊分布，多量汗腺結(jié)構(gòu)，膠原纖維呈編織狀形態(tài)。燙傷后第5d，模型組小鼠表皮層細(xì)胞變性水腫，大量急性炎細(xì)胞浸潤(rùn)，間質(zhì)水腫明顯，細(xì)胞結(jié)構(gòu)紊亂，壞死組織豐富。燙傷藥水噴霧劑高、中、低劑量組和陽(yáng)性對(duì)照組創(chuàng)面組織水腫較輕，組織學(xué)結(jié)構(gòu)明顯，壞死少見(jiàn)，炎癥程度較輕，創(chuàng)面肉芽組織生長(zhǎng)活躍。燙傷后10d，創(chuàng)面開(kāi)始愈合，治療組急慢性炎細(xì)胞浸潤(rùn)，成纖維細(xì)胞增生，膠原纖維形成。模型組大鼠表皮壞死明顯，真皮層部分液化性壞死且間質(zhì)大量急性炎細(xì)胞浸潤(rùn)。燙傷藥水噴霧劑高、中、低劑量組和陽(yáng)性對(duì)照組大鼠創(chuàng)面部分表皮結(jié)構(gòu)初步形成，炎性滲出物少見(jiàn)。真皮汗腺毛囊增生，肉芽組織形成，新生毛細(xì)血管豐富，真皮層結(jié)締組織完整。燙傷后15d，模型組肉芽組織比較明顯，成纖維細(xì)胞部分產(chǎn)生膠原，多量急慢性炎細(xì)胞，皮膚異常增生嚴(yán)重，纖維無(wú)規(guī)則排列。燙傷藥水噴霧劑高、中、劑量組和陽(yáng)性對(duì)照組大鼠愈合創(chuàng)面見(jiàn)少量急慢性炎細(xì)胞，毛細(xì)血管管腔閉合，肉芽組織減少，皮膚結(jié)構(gòu)基本完整，排列規(guī)則。以燙傷藥水噴霧劑中劑量組和陽(yáng)性對(duì)照組最佳。

3.2大鼠創(chuàng)面組織毛細(xì)血管數(shù)量比較用藥后第5d、10d、15d，燙傷藥水噴霧劑高、中劑量組和磺胺嘧啶銀組創(chuàng)面肉芽組織新生毛細(xì)血管數(shù)量均高于基質(zhì)軟膏組(P<0.05)。第10d，燙傷藥水噴霧劑中劑量組創(chuàng)面肉芽組織中毛細(xì)血管數(shù)均高于燙傷藥水噴霧劑高、低劑量組(P<0.05)。燙傷藥水噴霧劑低劑量組(相當(dāng)于含提取液10g)、實(shí)驗(yàn)中劑量組(相當(dāng)于含提取液20g)、實(shí)驗(yàn)高劑量組(相當(dāng)于含提取液30g)均明顯促進(jìn)大鼠燙傷創(chuàng)面脫痂愈合；病理組織學(xué)可見(jiàn)：大鼠燙傷后第 5、10、15d燙傷創(chuàng)面炎癥明顯得到抑制。以實(shí)驗(yàn)中劑量組效果最佳。

4討論燒燙傷由于熱力高溫氣體、強(qiáng)酸強(qiáng)堿等導(dǎo)致多發(fā)性體表組織損害，以中小面積Ⅱ°燒傷為主。皮膚損傷中燙傷較為常見(jiàn)，燙傷創(chuàng)面修復(fù)是一個(gè)復(fù)雜的病理生理過(guò)程，包括炎癥反應(yīng)、肉芽組織形成以及基質(zhì)形成與重新塑形等[3]。祖國(guó)醫(yī)學(xué)總結(jié)出清熱解毒、養(yǎng)陰生津、益氣理脾、活血逐瘀、托里排膿等治療理念及燒傷內(nèi)外兼治的原則[4]。燙傷藥水噴霧劑方中虎杖清熱解毒，散瘀止痛，易收斂，為君藥；地榆涼血止血，解毒斂瘡；忍冬藤清熱疏風(fēng)，通絡(luò)止痛；大黃、黃連清熱瀉火，涼血解毒，逐瘀活血，均為臣藥。冰片清熱止痛，止癢防腐，為佐使[5]。燙傷藥水噴霧劑臨床用于淺Ⅱ°燙傷，減輕燙傷創(chuàng)面早期水腫抑制肉芽組織炎癥，加速創(chuàng)面愈合及減輕疤痕形成，恢復(fù)毛囊、皮脂腺等皮膚附屬器，對(duì)創(chuàng)面愈合后皮膚功能有很好改善作用，傷口恢復(fù)加快，病程明顯縮短。

燒傷創(chuàng)面愈合由炎性細(xì)胞、修復(fù)細(xì)胞、細(xì)胞外基質(zhì)、炎性介質(zhì)及生長(zhǎng)因子等多個(gè)因素在機(jī)體的調(diào)控下，完整而有序的進(jìn)行一系列修復(fù)活動(dòng)，影響創(chuàng)面修復(fù)局部因素主要是感染和血液供應(yīng)[6]。燙傷后皮膚表皮細(xì)胞壞死，組織液滲出，創(chuàng)面因炎性反應(yīng)微循環(huán)通透性增加，微血管擴(kuò)張等導(dǎo)致體液滲出和組織水腫，微循環(huán)的瘀滯則可造成局部栓塞或者組織缺血造成氧平衡破壞、局部壞死，使創(chuàng)面加深。研究提示，燒燙傷創(chuàng)面感染中革蘭陰性菌不動(dòng)桿菌比例最高。燙傷藥水噴霧劑能抑制細(xì)菌生長(zhǎng)，降低創(chuàng)面炎癥程度，減少急慢性炎細(xì)胞浸潤(rùn)，減輕創(chuàng)面水腫；增加新生微血管，改善創(chuàng)面血液供應(yīng)，促進(jìn)創(chuàng)面肉芽組織修復(fù)。

燒燙傷時(shí)大面積創(chuàng)面未及時(shí)封閉、修復(fù)，會(huì)導(dǎo)致患者體液大量流失，出現(xiàn)感染、休克、多器官功能障礙綜合征等連鎖病理變化，也會(huì)影響創(chuàng)面愈合后瘢痕深度和面積。燒傷創(chuàng)面愈合后，皮膚瘢痕組織既影響美觀(guān)，又因缺少汗腺、毛囊等皮膚附屬物，影響皮膚組織功能[7]。病理組織學(xué)顯示，燙傷藥水噴霧劑中劑量組結(jié)痂消失，表皮局部形成，皮膚基底層細(xì)胞排列整齊，真皮中成纖維細(xì)胞多見(jiàn)，中性粒細(xì)胞基本消失，局部見(jiàn)淋巴單核細(xì)胞散在，肉芽組織較薄，毛細(xì)血管有閉合現(xiàn)象。新生汗腺皮脂腺分布在真皮中，纖維排列齊整。與基質(zhì)軟膏組相比有顯著性差異。

新生毛細(xì)血管是創(chuàng)傷后創(chuàng)面肉芽組織中的主要成分，在創(chuàng)傷愈合過(guò)程中起著重要作用，創(chuàng)面組織中新生血管形成，可以改善局部缺血、缺氧狀態(tài)，達(dá)到氧平衡。燒傷創(chuàng)面修復(fù)過(guò)程中過(guò)強(qiáng)、過(guò)弱的炎癥反應(yīng)都不利于創(chuàng)面愈合。本研究顯示燙傷藥水噴霧劑低劑量組由于有效藥物濃度不高，在燙傷創(chuàng)面達(dá)不到最佳治療藥物濃度，抑菌消炎效果略差。而高劑量組各種成分有效濃度偏高，刺激炎癥組織，造成創(chuàng)面滲液較多。兩組創(chuàng)面愈合程度與中劑量組相比略遜。中劑量組能使創(chuàng)面毛細(xì)血管增加，減輕炎癥程度，使肉芽組織中炎癥程度加快組織從炎癥期過(guò)渡到修復(fù)期。促進(jìn)燙傷創(chuàng)面微血管新生及血液循環(huán)，豐富燙傷部位的氧、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)及生物活性因子的供應(yīng)，增強(qiáng)創(chuàng)面組織修復(fù)能力。燙傷藥水噴霧劑有效減輕燙傷創(chuàng)面炎癥，促進(jìn)燙傷創(chuàng)面微血管新生及血液循環(huán)，增強(qiáng)創(chuàng)面組織修復(fù)能力。體現(xiàn)了祖國(guó)醫(yī)學(xué)對(duì)潰瘍創(chuàng)面以祛腐生肌的理念。

綜上研究顯示：燙傷藥水噴霧劑可以減少創(chuàng)面炎癥因子，增加新生毛細(xì)血管數(shù)目，促進(jìn)創(chuàng)面愈合減少皮膚疤痕的功效。我們觀(guān)察燙傷創(chuàng)面皮膚病理學(xué)改變和新生毛細(xì)血管數(shù)量，研究燙傷藥水噴霧劑治療燙傷創(chuàng)面機(jī)理, 為中醫(yī)藥治療燙傷創(chuàng)面提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)，有助于發(fā)揮臨床作用。

參考文獻(xiàn)

[1]劉天舒,朱克儉,尹天雷，等.復(fù)方桐葉燒傷油治療新鮮中、小面積Ⅱ°燒燙傷的多中心臨床研究[J].中藥新藥與臨床藥理,2012,23(3):350-353.

[2]袁汀,周瑜妹.外用中藥治療燒燙傷的研究進(jìn)展[J].光明中醫(yī),2010,25(11):2151.

[3]Schreml S,Szeimies RM,Ppantl L,et al.Wound healing in the 21st century[J].Am Acad Dermatol,2010,63(5):866-881.

[4]賈德文,黃秀琴,張尊迅.濕潤(rùn)燒傷膏治療136例小面積燒燙傷[J].中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)生,2007,45(18):102.

[5]趙前思.外用中藥促進(jìn)燒傷創(chuàng)面愈合機(jī)制的研究進(jìn)展[J].醫(yī)學(xué)綜述,2014,20(16):3003-3005.

[6]屈紀(jì)富,程天民,郝利.參與皮膚傷口愈合的細(xì)胞及其作用的研究進(jìn)展[J].中國(guó)臨床康復(fù),2001,24(5):74.

[7]武永剛,陳君長(zhǎng),王坤正.血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子在骨折愈合過(guò)程中的表達(dá)[J].西安醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2001,22(1):51-53.

(收稿2015-10-20；修回2015-12-13)

【中圖分類(lèi)號(hào)】R541.4

【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A

doi:10.3969/j.issn.1000-7369.2016.03.048

*江蘇省中醫(yī)藥管理局科技項(xiàng)目(LZ11023)

△江蘇省中醫(yī)院普外科(南京 210029)

▲南京中醫(yī)藥大學(xué)(南京 210029)