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    牛病毒性呼吸道疾病混合感染的病例診斷報告

    2016-04-05 17:10:42劉陽陽張玲玲倪宏波聞曉波
    獸醫(yī)導(dǎo)刊 2016年8期
    關(guān)鍵詞:養(yǎng)牛業(yè)病料牛群

    劉陽陽 張玲玲 倪宏波 聞曉波

    牛病毒性呼吸道疾病混合感染的病例診斷報告

    劉陽陽 張玲玲 倪宏波 聞曉波*

    (黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)動物科技學(xué)院,黑龍江大慶 163319)

    牛呼吸道疾病綜合征是嚴(yán)重危害全球養(yǎng)牛業(yè)的一類重要疾病,具有高發(fā)病率和高死亡率的特點。本文對近日哈爾濱某牛場新引進牛只,幾天后患病,采集鼻拭子,提取總DNA或RNA,進行牛傳染性鼻氣管炎病毒、牛副流感3型病毒、牛病毒性腹瀉病毒和牛腺病毒的PCR或RT-PCR檢測,確診病牛為IBRV、BPIV和BVDV混合感染,情況較為嚴(yán)重,建議及時做好相關(guān)防治措施。

    牛呼吸道疾病綜合征;PCR;IBRV;BPIV;BVDV

    牛呼吸道疾病綜合征(Bovine respiratory disease complex,BRDC)是嚴(yán)重危害養(yǎng)牛業(yè)的一類重要疾病,臨床癥狀多表現(xiàn)為食欲下降、精神沉郁、高熱、呼吸困難和咳嗽等癥狀,牛自身免疫力、應(yīng)激強度、飼養(yǎng)管理也會影響疾病的嚴(yán)重程度。BRDC主要危害犢牛、育肥牛和奶牛,發(fā)病率和死亡率高,發(fā)生疾病后往往會給養(yǎng)殖戶造成重大的經(jīng)濟損失。BRDC的病因比較復(fù)雜,常發(fā)生于新引進的牛群,存在病毒、細(xì)菌和支原體等多種傳染性病原混合感染[1,2],其中病毒是主要的病原。目前分離到的病毒主要有牛傳染性鼻氣管炎病毒(Infectious bovine rhinotracheitis virus,IBRV)、牛副流感3型病毒(Bovine parainfluenza virus type 3,BPIV-3)、牛病毒性腹瀉病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)、牛呼吸道合胞體病毒(Bovine respiratory syncytial virus,BRSV)和牛腺病毒(Bovine adenovirus,BAV)等[3,4]。這些病毒能夠損壞牛呼吸道上皮細(xì)胞,導(dǎo)致牛肺炎、支氣管炎等疾病,而且還可以抑制牛的免疫系統(tǒng),從而更易繼發(fā)其他病原感染,危害牛體健康,進一步推升發(fā)病率和死亡率,從而加重經(jīng)濟損失[5]。此外,潮濕陰冷的環(huán)境、脫水缺氧的狀態(tài)、惡劣的天氣及污濁的空氣都有可能誘發(fā)BRDC的產(chǎn)生[6],因此要注意改善牛舍環(huán)境,注意防寒保暖。

    IBRV是引起牛急性、熱性、接觸性鼻氣管炎的病原,是世界衛(wèi)生組織(WHO)列出的B類傳染病之一,其可感染牛呼吸、黏膜、神經(jīng)、生殖等多個系統(tǒng),并造成牛免疫力下降,從而容易繼發(fā)其他感染,使病情加重,導(dǎo)致死亡率上升[7];還能夠影響育肥牛的生長發(fā)育、奶牛的產(chǎn)奶量等,對養(yǎng)牛業(yè)造成重大經(jīng)濟損失。

    BPIV-3是BRDC的主要病原之一,能夠引起急性、接觸性的牛副流感性感冒,又稱“運輸熱”。該病毒能侵害牛呼吸系統(tǒng),引發(fā)上呼吸道黏膜發(fā)生卡他性炎癥,使免疫機能下降而易繼發(fā)細(xì)菌感染,導(dǎo)致肺炎產(chǎn)生,降低了牛的生產(chǎn)性能,孕畜感染可能會流產(chǎn),治療成本和死亡率也升高。

    BVDV也是BRDC的重要病原之一,能夠引起牛病毒性腹瀉-黏膜病,其感染還會抑制牛機體免疫系統(tǒng),導(dǎo)致疫苗免疫失敗,也容易繼發(fā)其他病原感染,造成嚴(yán)重的危害。懷孕期間的母牛感染BVDV可能發(fā)生死胎、流產(chǎn)等繁殖障礙并向外排毒、散毒,危害健康牛群,形成持續(xù)性感染[8]。臨床特征為黏膜發(fā)炎、糜爛、壞死和腹瀉。BVDV感染能引起黏膜病爆發(fā),死亡率可達100%,因此要格外注意對此病的預(yù)防和控制。

    本文對近日哈爾濱某牛場患BRDC牛群進行病毒分離鑒定,確診為IBRV、BPIV-3和BVDV混合感染?,F(xiàn)報告如下。

    1 實驗材料和方法

    1.1病料、試劑

    哈爾濱某牛場采集的病牛鼻腔棉拭子病料5份。反轉(zhuǎn)錄試劑盒購于Thermo公司;RNA提取試劑盒購于康為世紀(jì)公司;DNA提取試劑盒購于博凌科偉公司。

    1.2引物設(shè)計

    根據(jù)GenBank中已發(fā)表的IBRV、BPIV-3、BVDV、BAV基因序列,設(shè)計特異性鑒定引物。引物由華大基因科技有限公司合成。引物序列、基因名稱見表一。

    1.3病毒的處理和核酸的提取

    將病料用800μl滅菌后的PBS溶液浸潤,浸潤所得溶液按照博凌科偉公司的DNA提取試劑盒和康為世紀(jì)公司的RNA提取試劑盒的操作步驟,分別提取DNA和RNA。按照Thermo公司的反轉(zhuǎn)錄試劑盒操作說明,將提取的RNA進行反轉(zhuǎn)錄獲取cDNA。

    2 實驗結(jié)果

    經(jīng)對病料病毒DNA和RNA的提取及PCR擴增,PCR產(chǎn)物經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳分析。IBRV、BPIV和BVDV檢測目的片段大小分別為423bp、333bp和265bp。結(jié)果如圖一所示,5份病料均檢出IBRV、BPIV-3和BVDV,確診為IBRV、BPIV-3和BVDV混合感染。

    3 討論

    近年來,隨著我國養(yǎng)牛業(yè)的快速發(fā)展,牛只的跨區(qū)域流動更加頻繁,而疾病的傳播和運輸應(yīng)激造成牛呼吸系統(tǒng)疾病也更加泛濫,給養(yǎng)牛業(yè)造成巨大損失[9]。通過對近日哈爾濱某牛場新引進牛只患病后采集鼻腔黏膜拭子,運用PCR方法檢測出IBRV、BPIV-3和BVDV混合感染,病情比較嚴(yán)重,需要盡快采取相應(yīng)處理措施,預(yù)防感染本場原有牛群,對患病牛只進行隔離和對癥治療。對于牛群呼吸道疾病的綜合防治,首先應(yīng)做好牛群引進的管理工作,禁止從疫區(qū)和正在發(fā)病的地區(qū)引進牛只,對引進牛只進行隔離觀察和檢測,做好必要的預(yù)防接種和驅(qū)蟲后再與健康牛群混群;其次要加強飼養(yǎng)管理,確保牛群擁有清潔、充足的飲用水,適當(dāng)補充維生素、礦物質(zhì)元素等營養(yǎng),并確保飼料新鮮;再者要重視衛(wèi)生和疾病防控,做好通風(fēng)、清潔和定時消毒工作,避免牛群過于擁擠,及時發(fā)現(xiàn)患有呼吸系統(tǒng)疾病牛只以早隔離、早治療。

    [1] 馬春霞,李軍,覃勇,等.牛呼吸道疾病綜合征病例的病原分析[J].中國畜牧獸醫(yī),2015,42(9):2481-6.

    [2] 范穎,張繼瑜,周緒正,等.牛呼吸道疾病的病原學(xué)與防制研究進展[J].中國畜牧獸醫(yī),2013,40(1):157-163.

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