早發(fā)重度PE及HEELP綜合征患者胎盤(pán)組織、母血、臍血中HMGB1和RAGP的表達(dá)觀察

李紅，閆歡，朱琳琳,2，王曉芳，王金銘，冷茂東,張展

(1鄭州大學(xué)第三附屬醫(yī)院，鄭州 450052；2新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院)

早發(fā)重度PE及HEELP綜合征患者胎盤(pán)組織、母血、臍血中HMGB1和RAGP的表達(dá)觀察

李紅1，閆歡1，朱琳琳1,2，王曉芳1，王金銘1，冷茂東1,張展1

(1鄭州大學(xué)第三附屬醫(yī)院，鄭州 450052；2新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院)

目的 觀察早發(fā)重度子癇前期(PE)及HELLP綜合征患者胎盤(pán)組織、母血、臍血中高遷移率族蛋白1(HMGB1)和晚期糖基化終末產(chǎn)物受體(RAGE)的表達(dá)變化，探討其與早發(fā)重度PE及HELLP綜合征發(fā)病的關(guān)系。方法 30 例早發(fā)重度PE患者(早發(fā)重度PE組)、12例HELLP綜合征患者(HELLP組)、30例正常孕婦(對(duì)照組)，分別采用免疫組化法、Western blotting法對(duì)三組胎盤(pán)組織中的HMGB1蛋白和RAGE蛋白進(jìn)行定位及定量檢測(cè)，采用實(shí)時(shí)定量PCR法對(duì)三組胎盤(pán)組織中HMGB1 mRNA和RAGE mRNA進(jìn)行檢測(cè)，采用ELISA對(duì)三組母血、臍血中的HMGB1蛋白和RAGE蛋白進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果 對(duì)照組胎盤(pán)組織中僅有極少量HMGB1陽(yáng)性合體滋養(yǎng)細(xì)胞，早發(fā)重度PE組HMGB1陽(yáng)性細(xì)胞主要為合體滋養(yǎng)細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞且陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量明顯增多，HELLP組HMGB1陽(yáng)性細(xì)胞主要為合體滋養(yǎng)細(xì)胞、單核巨噬細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞；對(duì)照組胎盤(pán)組織可見(jiàn)少量RAGE陽(yáng)性合體滋養(yǎng)細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞，早發(fā)重度PE組RAGE陽(yáng)性細(xì)胞分布與對(duì)照組一致，HELLP組RAGE陽(yáng)性細(xì)胞主要為合體滋養(yǎng)細(xì)胞、單核巨噬細(xì)胞(陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量和表達(dá)強(qiáng)度均明顯高于早發(fā)重度PE組)。早發(fā)重度PE組和HELLP組胎盤(pán)組織中HMGB1、RAGE的蛋白及mRNA表達(dá)明顯高于對(duì)照組(P均<0.05)，且HELLP組高于早發(fā)重度PE組(P均<0.05)。早發(fā)重度PE組和HELLP組母血HMGB1、RAGE蛋白水平明顯高于對(duì)照組(P均<0.05)，且HELLP組高于早發(fā)重度PE組(P均<0.05)。三組臍血HMGB1、RAGE蛋白水平相比,P均>0.05。結(jié)論 HMGB1、RAGE在早發(fā)重度PE及HELLP綜合征患者胎盤(pán)組織及母血中的表達(dá)明顯升高，二者可能共同參與了早發(fā)重度PE及HELLP綜合征的發(fā)生發(fā)展過(guò)程。

子癇前期；HELLP綜合征；高遷移率族蛋白1；晚期糖基化終末產(chǎn)物受體

重度子癇前期(PE)是一種常見(jiàn)的妊娠期高血壓疾病，多發(fā)生于妊娠20 周以后[1]。HELLP綜合征是妊娠期高血壓疾病的一種嚴(yán)重并發(fā)癥，多繼發(fā)于重度PE。近年來(lái)，重度PE與炎癥的關(guān)系越來(lái)越受到重視。高遷移率族蛋白1(HMGB1)是一種獨(dú)立的晚期炎性介質(zhì)[2]，與細(xì)胞膜表面晚期糖基化終末產(chǎn)物受體(RAGE)結(jié)合后可激活細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)通路，引發(fā)一系列病理?yè)p傷，參與多種全身和局部炎性疾病的發(fā)病過(guò)程。正常妊娠即存在輕度炎性反應(yīng)。有研究[3]結(jié)果提示過(guò)度炎癥反應(yīng)導(dǎo)致機(jī)體的一系列損傷反應(yīng)是引發(fā)PE的重要因素。有關(guān)HMGB1、RAGE與早發(fā)重度PE及其并發(fā)癥HELLP綜合征的關(guān)系尚不明確。本研究對(duì)早發(fā)重度PE及HELLP綜合征患者胎盤(pán)組織、母血、臍血中HMGB1和RAGE的表達(dá)變化進(jìn)行了觀察，探討其與早發(fā)重度PE及HELLP綜合征發(fā)病的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 2012年12月～2015年12月就診于鄭州大學(xué)第三附屬醫(yī)院的早發(fā)重度PE患者30例(早發(fā)重度PE組)、HELLP綜合征患者12例(HELLP組)，同期選擇正常足月孕婦30例(對(duì)照組)作對(duì)照。早發(fā)重度PE組年齡(29.3±1.6)歲、采血孕周(30.7±2.6)周、分娩孕周(31.7±2.5)周、BMI(31.4±0.9)kg/m2；HELLP組年齡(30.2±1.9)歲、采血孕周(31.6±3.0)周、分娩孕周(32.7±2.4)周、BMI(31.5±1.1)kg/m2；對(duì)照組年齡(30.6±2.1)歲、采血孕周(29.6±2.2)周、分娩孕周(38.8±2.7)周、BMI(30.1±1.2)kg/m2；三組年齡、采血孕周、分娩孕周、BMI有可比性(P均>0.05)。三組均為自然受孕、單胎妊娠、剖宮產(chǎn)分娩、初產(chǎn)婦，均無(wú)原發(fā)性慢性高血壓病、肝腎疾病及其他合并癥。

1.2 標(biāo)本采集及處理 ①胎盤(pán)組織：胎盤(pán)娩出后立即以臍帶為中心于胎盤(pán)母體面3 、6 、9 、12 點(diǎn)和中央?yún)^(qū)(避開(kāi)鈣化區(qū))各取1 cm×1 cm×1 cm的組織1 塊,生理鹽水清洗后分3份，其中 1 份4%多聚甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋，供免疫組化染色用；其余2份置入凍存管封存后立即投入液氮中保存，供Western blotting及實(shí)時(shí)定量 PCR 檢測(cè)用。②母血：空腹采集肘靜脈血5 mL，置入含促凝劑和分離膠的試管，2 500 r/min離心15 min，取血清，-80 ℃冰箱中保存?zhèn)錂z。③臍血：胎兒娩出后、胎盤(pán)娩出前留取臍靜脈血5 mL，處理方法同母血。

1.3 胎盤(pán)組織HMGB1、RAGE檢測(cè) ①HMGB1、RAGE蛋白定位檢測(cè)：受檢胎盤(pán)組織標(biāo)本用免疫組化SP法染色，DAB顯色試劑顯色，蘇木素復(fù)染，脫水，封片，顯微鏡下觀察。以PBS代替一抗作陰性對(duì)照。每張切片400倍顯微鏡下隨機(jī)選取5個(gè)視野,每個(gè)視野計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞，計(jì)算5個(gè)視野陽(yáng)性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)，即為該切片陽(yáng)性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)：無(wú)陽(yáng)性細(xì)胞計(jì)0分，陽(yáng)性細(xì)胞≤10%計(jì)1分、11%～50%計(jì)2分、51%～75%計(jì)3分、>75%計(jì)4分；細(xì)胞無(wú)著色計(jì)0分、淺黃色計(jì)1分、黃色或深黃色計(jì)2分、褐色或棕褐色計(jì)3分；上述兩項(xiàng)得分之積<3為陰性、≥3為陽(yáng)性。②HMGB1、RAGE蛋白定量檢測(cè)：采用Western blotting法。將受檢胎盤(pán)組織置EP管，加300 μL裂解液和3 μL蛋白酶抑制劑，勻漿、離心后提取蛋白，BCA 定量試劑測(cè)定蛋白濃度，蛋白上樣量為40 μg，體系為25 μL。配制8%聚丙烯酰胺凝膠，加樣后電泳、轉(zhuǎn)膜、5%脫脂牛奶封閉、一抗 4 ℃孵育過(guò)夜，洗膜30 min，加熒光素標(biāo)記的二抗。用ODYSSEYClx檢測(cè)與成像系統(tǒng)對(duì)條帶的灰度進(jìn)行掃描、分析。以目的蛋白條帶與內(nèi)參條帶的灰度值之比表示目的蛋白的相對(duì)表達(dá)量。③HMGB1、RAGE mRNA檢測(cè)：采用實(shí)時(shí)定量PCR法。用TRIzol 提取受檢胎盤(pán)組織總RNA，根據(jù)逆轉(zhuǎn)錄試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄。PCR反應(yīng)體系：cDNA模板0.8 μL，2×Ultra SYBR Mixture10 μL，上游引物(10 μmol/L)0.4 μL，下游引物(10 μmol/L)0.4 μL，去RNase水8.4 μL，總體積20 μL。PCR反應(yīng)條件：95 ℃預(yù)變性10 min，95 ℃變性15 s，60 ℃退火1 min，共35個(gè)變性/退火循環(huán)，72 ℃ 延伸10 min。所有反應(yīng)設(shè)復(fù)孔，所有PCR 產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳證實(shí)為特異性條帶。PCR反應(yīng)結(jié)束后，記錄熒光信號(hào)達(dá)到設(shè)定閾值所經(jīng)歷的反應(yīng)循環(huán)數(shù)(Ct值)，以2-ΔΔCt表示HMGB1、RAGE的mRNA相對(duì)表達(dá)量。實(shí)時(shí)定量PCR引物由北京華大基因公司設(shè)計(jì)合成，HMGB1上游引物為 5′-TGAGCTCCATAGAGACAGCG-3′，下游引物為 5′-GCAGACATGGTCTTCCACCT-3′，擴(kuò)增產(chǎn)物248 bp；RAGE上游引物為5′-GCTGTCAGCATCAGCATCAT-3′，下游引物為5′-ATTCAGTTCTGCACGCTCCT-3′，擴(kuò)增產(chǎn)物225 bp；內(nèi)參基因β-actin上游引物為5′-GTTGCGTTACACCCTTTCTTGAC-3′，下游引物為5′-CTCGGCCACATTGTGAACTTTG-3'，擴(kuò)增產(chǎn)物198 bp。

1.4 母血、臍血中HMGB1蛋白和RAGE蛋白的檢測(cè) 采用ELISA法，按試劑盒說(shuō)明書(shū)操作。在450 nm處測(cè)光密度(OD)值，以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算母血、臍血中HMGB1蛋白和RAGE蛋白表達(dá)量。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件。多個(gè)獨(dú)立樣本均數(shù)比較用單因素方差分析，兩組間比較用LSD-t檢驗(yàn)；率的比較用χ2檢驗(yàn)；相關(guān)性分析用Pearson相關(guān)分析法。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 三組胎盤(pán)組織HMGB1、RAGE蛋白定位檢測(cè)結(jié)果比較 對(duì)照組胎盤(pán)組織中僅有極少量HMGB1陽(yáng)性細(xì)胞，主要為合體滋養(yǎng)細(xì)胞，呈彌漫性分布、淺黃色；早發(fā)重度PE組HMGB1陽(yáng)性細(xì)胞主要為合體滋養(yǎng)細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量明顯增多，染色強(qiáng)度也明顯增強(qiáng)；HELLP組HMGB1陽(yáng)性細(xì)胞主要為合體滋養(yǎng)細(xì)胞、單核巨噬細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞，呈褐色或棕褐色。對(duì)照組胎盤(pán)組織可見(jiàn)少量RAGE陽(yáng)性細(xì)胞，主要為合體滋養(yǎng)細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞；早發(fā)重度PE組RAGE陽(yáng)性細(xì)胞分布與對(duì)照組一致，但染色強(qiáng)度明顯增強(qiáng)；HELLP組RAGE陽(yáng)性細(xì)胞主要為合體滋養(yǎng)細(xì)胞、單核巨噬細(xì)胞，且陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量和表達(dá)強(qiáng)度均明顯高于早發(fā)重度PE組，呈棕褐色。

對(duì)照組、早發(fā)重度PE組、HELLP組的HMGB1蛋白陽(yáng)性表達(dá)率分別為20.00%、66.67%、83.33%，RAGE蛋白陽(yáng)性表達(dá)率分別為16.66%、66.67%、91.67%；早發(fā)重度PE組和HELLP組的HMGB1、RAGE蛋白陽(yáng)性表達(dá)率與對(duì)照組相比，P均<0.05；HELLP組與早發(fā)重度PE組HMGB1、RAGE蛋白陽(yáng)性表達(dá)率相比，P均<0.05。

2.2 三組胎盤(pán)組織HMGB1、RAGE蛋白定量檢測(cè)結(jié)果比較 對(duì)照組、早發(fā)重度PE組、HELLP組胎盤(pán)組織HMGB1蛋白相對(duì)表達(dá)量分別為0.24±0.05、0.41±0.21、0.92±0.21，RAGE蛋白相對(duì)表達(dá)量分別為0.54±0.12、0.87±0.18、1.27±0.31；早發(fā)重度PE組、HELLP組與對(duì)照組相比，P均<0.05；HELLP組與早發(fā)重度PE組相比，P均<0.05。

2.3 三組胎盤(pán)組織HMGB1、RAGE的mRNA檢測(cè)結(jié)果比較 對(duì)照組、早發(fā)重度PE組、HELLP組HMGB1 mRNA相對(duì)表達(dá)量分別為0.72±0.06、1.35±0.32、1.69±0.42，RAGE mRNA相對(duì)表達(dá)量分別為0.91±0.14、1.53±0.34、1.91±0.42；早發(fā)重度PE組、HELLP組與對(duì)照組相比，P均<0.05；HELLP組與早發(fā)重度PE組相比，P均<0.05。

2.4 三組母血、臍血中HMGB1蛋白和RAGE蛋白檢測(cè)結(jié)果比較 對(duì)照組、早發(fā)重度PE組、HELLP組母血HMGB1蛋白水平分別為(8.31±0.37)、(12.08±1.55)、(18.31±1.91)ng/mL，RAGE蛋白水平分別為(17.17±1.02)、(26.55±4.18)、(35.78±5.21)ng/mL；早發(fā)重度PE組、HELLP組與對(duì)照組相比，P均<0.05；HELLP組與早發(fā)重度PE組相比，P均<0.05。

對(duì)照組、早發(fā)重度PE組、HELLP組臍血HMGB1蛋白水平分別為(2.24±0.15)、(2.41±0.24)、(2.43±0.26)ng/mL，RAGE蛋白水平分別為(4.15±0.33)、(4.62±0.43)、(5.01±0.60)ng/mL；三組間兩兩比較，P均>0.05。

2.5 早發(fā)重度PE組、HELLP組母血HMGB1蛋白與RAGE蛋白水平的相關(guān)性 早發(fā)重度PE組、HELLP組母血HMGB1蛋白與RAGE蛋白水平均呈正相關(guān)，r分別為0.820、0.840，P均<0.05。

3 討論

HMGB1是一類廣泛存在于真核細(xì)胞內(nèi)的非組核蛋白，可通過(guò)免疫細(xì)胞分泌和壞死細(xì)胞釋放兩種途徑轉(zhuǎn)移至細(xì)胞外，其發(fā)生變化較晚、持續(xù)時(shí)間較長(zhǎng)，是一種獨(dú)立的晚期炎性介質(zhì)[4]。文獻(xiàn)[5,6]報(bào)道，PE患者胎盤(pán)組織中HMGB1蛋白及 mRNA高表達(dá)。本研究發(fā)現(xiàn)，對(duì)照組胎盤(pán)組織中無(wú)或僅有極少量HMGB1蛋白陽(yáng)性細(xì)胞，主要為合體滋養(yǎng)細(xì)胞，呈彌漫性分布、淺黃色；早發(fā)重度PE組HMGB1蛋白陽(yáng)性細(xì)胞主要為合體滋養(yǎng)細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞，染色強(qiáng)度明顯增強(qiáng)；HELLP組HMGB1蛋白陽(yáng)性細(xì)胞主要為合體滋養(yǎng)細(xì)胞、單核巨噬細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞，呈褐色或棕褐色染色；早發(fā)重度PE組和HELLP組的HMGB1蛋白陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于對(duì)照組，HELLP組高于早發(fā)重度PE組；早發(fā)重度PE組和HELLP組的HMGB1 mRNA表達(dá)量也明顯高于對(duì)照組，HELLP組高于早發(fā)重度PE組；這與Pradervand等[7]的研究結(jié)果一致?？紤]合體滋養(yǎng)細(xì)胞、單核巨噬細(xì)胞及血管內(nèi)皮細(xì)胞是HMGB1蛋白的主要靶細(xì)胞，過(guò)度炎癥刺激可誘導(dǎo)單核巨噬細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、合體滋養(yǎng)細(xì)胞表達(dá)HMGB1和其他炎癥因子，引起機(jī)體局限性和系統(tǒng)性的炎性病變。本研究結(jié)果還證實(shí)，早發(fā)重度PE組及HELLP組胎盤(pán)組織局部分泌并釋放HMGB1是HMGB1的重要來(lái)源。另外，本研究發(fā)現(xiàn)早發(fā)重度PE組及HELLP組母血HMGB1蛋白水平明顯高于對(duì)照組，且HELLP組顯著高于早發(fā)重度PE組，考慮可能是早發(fā)重度PE患者在發(fā)病初期由于炎癥刺激等原因直接導(dǎo)致滋養(yǎng)細(xì)胞及單核巨噬細(xì)胞損傷壞死，HMGB1釋放入血，引起母血中HMGB1蛋白水平升高。HMGB1將可能成為早發(fā)重度PE及HELLP綜合征的早期預(yù)測(cè)指標(biāo)。

RAGE是細(xì)胞表面免疫球蛋白超家族中的一種多配體受體，主要分布于單核巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞等細(xì)胞表面。在不同的疾病狀態(tài)下，RAGE可以結(jié)合不同的配體，包括HMGB1、鈣粒蛋白S100、晚期糖基化終產(chǎn)物蛋白AGE等[8]。正常生理狀態(tài)時(shí)，RAGE的mRNA和蛋白呈低水平表達(dá)，然而在多種炎性疾病狀態(tài)下RAGE的配體大量堆積，上調(diào)RAGE的表達(dá)并與其結(jié)合，導(dǎo)致組織細(xì)胞的損害。Holmlund等[9]認(rèn)為與健康對(duì)照組比較，PE患者胎盤(pán)組織中RAGE表達(dá)并無(wú)明顯變化；但Oliver等[10]的研究卻顯示，PE患者胎盤(pán)組織中RAGE的表達(dá)水平比正常組孕婦明顯升高。本研究發(fā)現(xiàn)，RAGE的 mRNA和蛋白在早發(fā)PE組及HELLP組胎盤(pán)組織中均高于對(duì)照組，且HELLP組表達(dá)水平高于早發(fā)重度PE組；對(duì)照組胎盤(pán)組織可見(jiàn)少量RAGE蛋白陽(yáng)性細(xì)胞，主要為合體滋養(yǎng)細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞；早發(fā)重度PE組RAGE蛋白陽(yáng)性細(xì)胞分布與對(duì)照組一致，但染色強(qiáng)度明顯增強(qiáng)；HELLP組RAGE蛋白陽(yáng)性細(xì)胞主要為合體滋養(yǎng)細(xì)胞、單核巨噬細(xì)胞，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量和表達(dá)強(qiáng)度均明顯高于早發(fā)重度PE組；早發(fā)重度PE組和HELLP組的RAGE蛋白陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于對(duì)照組，HELLP組高于早發(fā)重度PE組；早發(fā)重度PE組和HELLP組的RAGE mRNA表達(dá)量也明顯高于對(duì)照組，HELLP組高于早發(fā)重度PE組。這與Zhu等[6]的研究結(jié)果相符。分析可能是早發(fā)重度PE患者在發(fā)病初期，RAGE的配體HMGB1大量堆積，通過(guò)受體依賴的方式上調(diào)RAGE的表達(dá)，導(dǎo)致促炎癥細(xì)胞因子的作用增強(qiáng)，繼而侵犯滋養(yǎng)細(xì)胞，使合體滋養(yǎng)層細(xì)胞及單核巨噬細(xì)胞中的RAGE表達(dá)上調(diào)；同時(shí)早發(fā)重度PE發(fā)生時(shí)，炎性損傷刺激免疫細(xì)胞分泌的HMGB1入血，RAGE與其配體HMGB1結(jié)合，激活細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)途徑，誘導(dǎo)氧化應(yīng)激和炎性損傷反應(yīng)，又可進(jìn)一步導(dǎo)致細(xì)胞壞死，這種正反饋效應(yīng)導(dǎo)致HMGB1、RAGE的作用被放大，加重了靶組織的損傷，繼而導(dǎo)致HELLP綜合征的發(fā)生、發(fā)展。本研究結(jié)果還顯示，早發(fā)重度PE組、HELLP組母血RAGE蛋白水平明顯高于正常對(duì)照組，且其HMGB1蛋白水平與RAGE蛋白水平呈正相關(guān)，提示早期聯(lián)合檢測(cè)母血HMGB1、RAGE蛋白可以預(yù)測(cè)早發(fā)重度PE及HELLP綜合征；三組臍血中HMGB1、RAGE蛋白水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，可能是由于胎盤(pán)屏障的保護(hù)作用，早發(fā)重度PE及HELLP綜合征未造成胎兒血管內(nèi)皮細(xì)胞的損傷，這需要進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量進(jìn)行驗(yàn)證。

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Expression of HMGB1 and RAGE in placenta, maternal serum and cord serum in patients with early-onset severe PE and HELLP syndrome

LIHong1,YANHuan,ZHULinlin,WANGXiaofang,WANGJinming,LENGMaodong,ZHANGZhan

(1TheThirdAffiliatedHospitalofZhengzhouUniversity,Zhengzhou450052,China)

Objective To observe the expression changes of high mobility group box 1 (HMGB1) and receptor for advanced g1ycation end products (RAGE) in the placenta, maternal serum and cord serum in patients with early-onset severe preeclampsia (PE) and HELLP syndrome, and to analyze the correlation of HMGB1 and RAGE with the pathogenesis of early-onset severe PE and HELLP syndrome. Methods Thirty patients with early-onset severe preeclampsia (early-onset severe PE group), 12 patients with HELLP syndrome (HELLP group) and 30 healthy pregnant women (control group) were recruited in the study. Immunohistochemistry and Western blotting were used to investigate the locations and expression of HMGB1 and RAGE protein in the placentas. Real-time PCR was used to investigate the expression of HMGB1 and RAGE mRNA in the placentas. ELISA was further used to detect the levels of HMGB1 and RAGE protein in maternal and cord serums of the three groups. Results A low level of positive immunostaining for HMGB1 was observed in syncytiotrophoblast cells in placentas of control group, the level was significantly increased in syncytiotrophoblast and vascular endothelial cells in placentas of early-onset severe PE group, besides, in the placentas of HELLP group, positive HMGB1 cells were mainly syncytiotrophoblast, macrophage and vascular endothelial cells. A small amount of positive immunostaining for RAGE was observed in syncytiotrophoblast and vascular endothelial cells in placentas of the control group, the distribution of positive cells in placentas of the early-onset severe PE group was consistent with that of the control group, what's more, in the placentas of HELLP group, the positive RAGE cells were mainly syncytiotrophoblast and macrophage cells (immunoreactive cells and the expression intensity were significantly higher than those in the early-onset of severe PE group). Compared with the control group, the protein and mRNA levels of HMGB1 and RAGE were increased in the placentas of early-onset PE and HELLP groups, furthermore, the levels of them in HELLP group were even higher than those in the early-onset severe PE group (allP<0.05). In addition, the levels of HMGB1 and RAGE in the maternal serum of early-onset severe PE and HELLP groups were higher than those of the control group, besides, the levels of them in the HELLP group were even higher than those in the early-onset severe PE group (allP<0.05). However, there were no statistically significant differences in the levels of HMGB1 and RAGE in the cord serum among the three groups (allP>0.05). Conclusion The levels of HMGB1 and RAGE protein increase significantly in the maternal and cord serums of patients with early-onset severe PE and HELLP syndrome, both of which may participate the occurrence and development of early-onset severe PE and HELLP syndrome.

preeclampsia; HELLP syndrome; high mobility group box 1; receptor for advanced glycation end products

河南省高等學(xué)校重點(diǎn)研究項(xiàng)目(15A320064)。

李紅(1976-)，女，碩士，主治醫(yī)師，主要研究方向?yàn)閲a(chǎn)醫(yī)學(xué)。E-mail: 525444760@qq.com

10.3969/j.issn.1002-266X.2016.43.010

R714.25

A

1002-266X(2016)43-0034-04

2016-08-18)