填精補(bǔ)髓、活血化痰開竅法對(duì)血管性癡呆大鼠海馬組織BDNF和bFGF含量的影響

徐云龍劉 穎邰曉峰趙建軍

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填精補(bǔ)髓、活血化痰開竅法對(duì)血管性癡呆大鼠海馬組織BDNF和bFGF含量的影響

徐云龍1劉 穎1邰曉峰2趙建軍1

【摘要】目的 探討填精補(bǔ)髓、活血化痰開竅法對(duì)血管性癡呆（VD）大鼠海馬組織腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子（BDNF）、堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子（bFGF）含量的影響。方法 采用雙血管阻塞（2VO）改良法復(fù)制VD大鼠模型，以鹽酸多奈哌齊片為陽(yáng)性對(duì)照組，觀察填精補(bǔ)髓、活血化痰開竅法對(duì)大鼠海馬組織BDNF及bFGF含量的影響。結(jié)果 與假手術(shù)組比較，模型組大鼠海馬組織BDNF和bFGF含量升高（P＜0.05）；與模型組比較，陽(yáng)性對(duì)照組，中藥高劑量組，中藥中劑量組海馬組織BDNF含量升高（P＜0.05），陽(yáng)性對(duì)照組，中藥高劑量組海馬組織bFGF含量升高（P＜0.05）。結(jié)論 填精補(bǔ)髓，活血化痰開竅法可通過提高VD大鼠海馬組織BDNF和bFGF含量，改善其學(xué)習(xí)與記憶能力。

【關(guān)鍵詞】填精補(bǔ)髓，活血化痰開竅法；血管性癡呆；腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子；堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子

作者單位：1 130021 長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院；2 130117 長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué) 通訊作者：趙建軍，E-mail：936768008@qq.com

血管性癡呆（vascular dementia，VaD）是指由各種腦血管病引起腦組織損害而產(chǎn)生的癡呆綜合征，其患病率位居老年期癡呆類型的第二位?，F(xiàn)代醫(yī)家治療VD多用填精補(bǔ)髓，活血化痰之法，且療效較好［1］。為進(jìn)一步驗(yàn)證填精補(bǔ)髓﹑活血化痰開竅法對(duì)VD的療效，本研究采用結(jié)扎雙側(cè)頸總動(dòng)脈的方法建成VD大鼠模型，觀察填精補(bǔ)髓﹑活血化痰開竅法對(duì)VD大鼠海馬組織腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子（BDNF）和堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子（bFGF）含量的影響。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

選用4～7月齡，體重220～280 g wistar大鼠，雌雄各半，購(gòu)自長(zhǎng)春市億斯實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限責(zé)任公司。動(dòng)物合格證編號(hào)：SCXK-（吉）2011-0004。

1.2 實(shí)驗(yàn)用藥

填精補(bǔ)髓﹑活血化痰開竅方：石菖蒲﹑郁金﹑山藥﹑山萸肉﹑龜板膠﹑川芎﹑紅花﹑肉蓯蓉﹑益智仁組成。以上藥由四川新綠色藥業(yè)科技發(fā)展股份有限公司生產(chǎn)，批號(hào)：1503001。鹽酸多奈哌齊片：衛(wèi)材（中國(guó)）藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批準(zhǔn)文號(hào)：國(guó)藥準(zhǔn)字H20050978。規(guī)格：5 mg/片。

1.3 主要儀器

BDNF酶聯(lián)檢測(cè)試劑盒：長(zhǎng)春市博邁生物器材經(jīng)銷部。bFGF-4酶聯(lián)檢測(cè)試劑盒：長(zhǎng)春市京濤生物技術(shù)有限公司。

1.4 分組及給藥

實(shí)驗(yàn)大鼠中隨機(jī)分為假手術(shù)組﹑模型組﹑陽(yáng)性對(duì)照藥組﹑填精補(bǔ)髓﹑活血化痰開竅方高﹑中﹑低劑量組，除去死亡后每組選取10只。各治療組在造模后第2 d開始給藥治療，中藥高劑量組（2.0 g/kg體重）﹑中劑量組（1.0 g/kg體重）﹑低劑量組（0.5 g/kg體重），該給藥劑量分別相當(dāng)于該藥物臨床每天服用劑量的等效劑量4倍﹑2倍和等效劑量。陽(yáng)性對(duì)照組鹽酸多奈哌齊片（0.77 mg/ kg體重）。連續(xù)灌胃給藥28 d，每天給藥1次，給藥體積為10 ml/ kg體重。假手術(shù)對(duì)照組﹑模型組給予同體積蒸餾水。

1.5 模型制備

采用雙血管阻塞（2VO）改良法復(fù)制VD大鼠模型［2］。

動(dòng)物購(gòu)入后常規(guī)飼養(yǎng)，適應(yīng)環(huán)境7 d。戊巴比妥鈉（3 mg/kg腹腔注射）將大鼠麻醉后，仰臥位固定，頸部仔細(xì)剪毛并消毒，頸部正中切口，長(zhǎng)約 2 cm，切開皮膚后，逐層鈍性分離皮下組織及肌肉等，充分暴露雙側(cè)頸動(dòng)脈，以手術(shù)線在兩側(cè)頸總動(dòng)脈近心端﹑遠(yuǎn)心端分別雙結(jié)扎。縫合皮膚，回籠飼養(yǎng)。假手術(shù)組動(dòng)物操作同模型組，但不結(jié)扎動(dòng)脈血管。

1.6 檢測(cè)指標(biāo)及方法

檢測(cè)各組大鼠海馬組織BDNF和bFGF含量的變化。斷頭處死大鼠，冰盤上快速取腦，取海馬組織稱重，移至玻璃勻漿管中，并加入等倍體積的預(yù)冷生理鹽水，于冰盤上勻漿，充分研碎，使組織勻漿化。制備好的50%勻漿3 500 r/min離心10 min，提取上清。后采用雙抗體夾心ABC-ELISA法檢測(cè)海馬組織BDNF和bFGF含量。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用Excel 2000統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)本次的研究數(shù)據(jù)進(jìn)行處理分析，結(jié)果用（均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差）（±s）表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

與假手術(shù)組比較，模型組大鼠海馬組織BDNF和bFGF含量升高，二者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。與模型組比較，陽(yáng)性對(duì)照組，填精補(bǔ)髓﹑活血化痰開竅法高劑量組，中劑量組海馬組織BDNF含量升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與模型組比較，陽(yáng)性對(duì)照組，填精補(bǔ)髓﹑活血化痰開竅法高劑量組海馬組織bFGF含量升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)果見表1。

表1　填精補(bǔ)髓、活血化痰開竅法對(duì)VD大鼠海馬組織BDNF、bFGF含量的影響（±s，n=10）

表1　填精補(bǔ)髓、活血化痰開竅法對(duì)VD大鼠海馬組織BDNF、bFGF含量的影響（±s，n=10）

注：與模型組比較：*P＜0.05

組別　　劑量　B D N F（p g / m l）b F G F（p g / m l）假手術(shù)組模型組陽(yáng)性對(duì)照組高劑量組中劑量組低劑量組9 9 .9 ± 1 0 .0 8*1 0 9 .2 ± 5 .6 4 1 1 7 .3 ± 9 .6 2*1 1 7 .8 ± 9 .8 1*1 1 6 .8 ± 9 .8 1*1 1 5 .0 ± 9 .1 2 --0 .7 7 m g / k g 2 .0 g / k g 1 .0 g / k g 0 .5 g / k g 7 .1 4 ± 0 .6 9*7 .8 3 ± 0 .7 8 8 .4 8 ± 0 .5 5*8 .7 9 ± 0 .7 3*8 .4 2 ± 0 .6 6 8 .2 3 ± 0 .5 4

3 討論

神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子（NeurotroPhic factors，NTF）經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)有營(yíng)養(yǎng)及保護(hù)作用。研究證實(shí)在腦缺血后腦內(nèi)神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子表達(dá)增加，可以起到保護(hù)受損腦細(xì)胞及促進(jìn)神經(jīng)細(xì)胞功能恢復(fù)的作用。

腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子（BDNF）和堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子（bFGF）為NTF家族重要成員，有研究顯示BDNF主要由海馬和大腦皮質(zhì)的神經(jīng)元產(chǎn)生［3］。它不但能促進(jìn)神經(jīng)元存活，還可以通過調(diào)節(jié)突觸傳遞和可塑性，有改善學(xué)習(xí)﹑記憶和認(rèn)知行為的作用［4］。bFGF作為神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子，能保護(hù)神經(jīng)元，促進(jìn)神經(jīng)生長(zhǎng)。有研究顯示，外源性的bFGF在皮下注射入VD大鼠后，能遷移至海馬，使海馬神經(jīng)干細(xì)胞增殖，修復(fù)受損組織，從而改善VD大鼠的運(yùn)動(dòng)能力及學(xué)習(xí)記憶的能力［5］。

血管性癡呆在中醫(yī)認(rèn)為本病屬“癡證”“呆癡”等范疇，且中醫(yī)認(rèn)為本病主要病機(jī)在于髓虛毒損，髓虛指腎精不足，髓海虧虛。毒損指瘀毒﹑熱毒﹑痰毒等毒邪破壞形體，損傷腦絡(luò)［6］。故本病應(yīng)采用填精補(bǔ)髓治本，活血化痰開竅治標(biāo)。通過觀察填精補(bǔ)髓﹑化痰開竅法對(duì)VD大鼠海馬組織BDNF和bFGF含量的影響。結(jié)果表明：VD大鼠海馬組織BDNF和bFGF含量較假手術(shù)組升高，提示VD大鼠大腦受到缺血損傷刺激后，可應(yīng)激性激活海馬組織內(nèi)的BDNF和bFGF表達(dá)，發(fā)揮其修復(fù)神經(jīng)元的作用［7］。填精補(bǔ)髓﹑活血化痰開竅法高劑量組﹑中劑量組﹑陽(yáng)性對(duì)照組較模型組能提高VD大鼠海馬組織BDNF的含量，證明中藥高劑量組﹑中劑量組能增加VD大鼠海馬組織內(nèi)BDNF的含量，達(dá)到改善VD大鼠學(xué)習(xí)及記憶能力的目的。而中藥高劑量組和陽(yáng)性對(duì)照組可提高VD大鼠海馬組織bFGF的含量，且高于模型組，說明填精補(bǔ)髓﹑化痰開竅法高劑量組能增加VD大鼠海馬組織內(nèi)bFGF的含量，從而提高VD大鼠的認(rèn)知功能。

參考文獻(xiàn)

［1］韓德軍，楊錫燕，田金洲，等.中藥治療癡呆隨機(jī)對(duì)照文獻(xiàn)治法及用藥規(guī)律分析［J］.中醫(yī)雜志，2014，55（12）：1051-1054.

［2］徐叔云，卞如濂，陳修，等.藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，2002：1060.

［3］Kawamoto Y，Nakamura S，Nakano S，et al.Immunohistochemical localization of brain-derived neurotrophic factor in adult rat brain［J］.Neuroscience，1996，74（4）：1209-1226.

［4］Pandya CD，Kutiyanawalla A，Pillai A.BDNF-TrkB signaling and neuroprotection in schizophrenia ［J］.Asian journal of psychiatry，2013，6（1）：22-28.

［5］葉建新，林航，穆軍山，等.bFGF對(duì)血管性癡呆大鼠海馬神經(jīng)干細(xì)胞的影響［J］.中國(guó)比較醫(yī)學(xué)雜志，2009，19（11）：1-5.

［6］王永炎.關(guān)于提高腦血管疾病療效難點(diǎn)的思考［J］.中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合雜志，1997，17（4）：195-196.

［7］張晉霞，傘云琨，李晶，等.養(yǎng)血清腦顆粒對(duì)血管性癡呆大鼠海馬CA1區(qū)BDNF和bFGF蛋白表達(dá)的影響［J］.世界科學(xué)技術(shù)-中醫(yī)藥現(xiàn)代化，2015，17（11）： 2246-2251.

Effect of Tianjingbusui and Huoxuehuatankaiqiao on the Contents of Basic Fibroblast Growth Factor and Brain-derived Neurotrophic Factor in Hippocampus of Vascular Dementia Rats

XU Yunlong1LIU Ying1TAI Xiaofeng2ZHAO Jianjun11 Affiliated Hospital of Changchun University of Traditional Chinese Medicine，Changchun 130021，China，2 Changchun University of Traditional Chinese Medicine，Changchun 130117，China

【Abstract】

Objective To explore the effect of tianjingbusui huoxuehuatankaiqiao on the contents of basic fibroblast growth factor（bFGF）and brain-derived neurotrophic factor（BDNF）in hippocampus of vascular dementia（VD）rats.Methods The vessel occlusion（2VO）was modified to establish the VD model，and the contents of bFGF and BDNF in hippocampus were observed.Results Compared with normal group，the contents of bFGF and BDNF were increased（P＜0.05）in model group.Compared with model group，the contents of BDNF were increased（P＜0.05）in the high，middle dose of traditional Chinese medicine groups and the donepezil group，the contents of bFGF were increased（P＜0.05）in the high dose of traditional Chinese medicine groups and the donepezil group.Conclusion The tianjingbusui and huoxuehuatankaiqiao could increase the contents of bFGF and BDNF，and improve the learning and memory capability.

【Key words】Tianjingbusui，Huoxuehuatankaiqiao，Vascular dementia，Brain derived neural nutrition factor，Basic fibroblast growth factor

doi：10.3969/j.issn.1674-9316.2016.02.138

【中圖分類號(hào)】R285.5

【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A

【文章編號(hào)】1674-9316（2016）02-0186-02-0186-03