白細胞介素-1基因多態(tài)性與冠心病關系研究

梁 皓

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白細胞介素-1基因多態(tài)性與冠心病關系研究

梁 皓

【摘要】目的 分析、研討白細胞介素-1（Interleukin-1）基因多態(tài)性與冠心病關系。方法 研究白細胞介素-1B基因（Interleukin-1B，IL-1B）啟動子區(qū)域-31位點和-511位點和白細胞介素-1受體拮抗劑基因（Interleukin-1 receptor antagonist，IL-1RN）基因多態(tài)性，對其在河南省漢族人群中的分布進行描述。通過相關的方法對于相應的基因?qū)嵤嶋H的分析以及檢測，并找出基因的多態(tài)性情況，對結(jié)果進行探討。結(jié)果 IL-1B-31、IL-1B-511基因多態(tài)性及IL-1RN VNTR多態(tài)性的基因型及等位基因頻率均符合Hardy-Weinberg遺傳平衡，具有群體代表性；基因頻率分布存在著人群和地區(qū)差異。結(jié)論 IL-1B-511T/T基因型是患心臟疾病的最為主要的因素。但在冠心病患者實際的發(fā)病過程中，IL-1B-31、IL-1RN基因不會出現(xiàn)任何的影響，因此對冠心病不起作用。

【關鍵詞】冠心病；基因多態(tài)性；白細胞介素-1

冠心病是臨床常見病之一，冠心病的發(fā)病率呈現(xiàn)出上升趨勢，對患者的身體健康以及生活質(zhì)量等均會造成嚴重的影響，甚至有可能威脅患者生命。研究認為，動脈粥樣硬化是由血管內(nèi)外各種因素造成的慢性炎癥變化，冠心病與各種炎癥因子關系十分密切。臨床通常采用炎癥標志物對冠狀動脈事件進行證實。大量研究表明，IL-6﹑白細胞介素-1等可誘導白細胞在內(nèi)皮細胞內(nèi)定植，又能作為扳機將粥樣斑塊內(nèi)的巨噬細胞與單核細胞激活，使動脈斑塊具有不穩(wěn)定性，故動脈粥樣硬化與IL-1等炎性因子之間關系密切。本文研究漢族人群中IL-1基因多態(tài)性的分布，比較不同人群間IL-1等位基因和基因型頻率，對IL-1這些SNPs位點多態(tài)性在河南地區(qū)漢族人群中的分布特點進行探究，從分學角度對CHD與IL-1家族基因型的相關性展開探討。

1 一般資料

選取2013年11月～2014年8月我院收治的來自濮陽地區(qū)冠心病漢族患者121例為觀察組，男性84人，女性37人，所有患者已經(jīng)使用冠心病的相關臨床診斷標準對其實施診斷，同時所有患者均能夠得到確診［1］，所有患者均確診為冠心病患者。另隨機選取我院進行體檢后顯示完全健康的正常人群，數(shù)量138例。所有患者均需要將其一般資料進行詳細的收集，并且所有的研究對象均為河南省的漢族群眾。

2 實驗材料

冰乙酸﹑硼酸﹑二水乙二氨四乙酸二鈉﹑蛋白酶K（Merck）﹑氯化鈉﹑三氯甲烷﹑硝酸銀﹑甲醇﹑甲醛﹑無水乙醇（北京化工廠）；三羥基氨基甲烷（Tris堿）（上海試劑三廠）；Tris飽和酚（北京索萊寶科技有限公司）；十二烷基磺酸鈉（寶信生物科技公司）；異戊醇（濟寧市化工研究所）；dNTP Mixture（Takara）；氫氧化鈉（天津化學試劑三廠）；Noc I ；碳酸鈉（廣州化學試劑廠）；硫代硫酸鈉（上海試劑四廠）；普通瓊脂糖（上海市東海制藥廠）。

3 實驗方法

將標本從冰箱中取出于室溫自然融化，均勻混合后吸取200 μl放入1.5 ml EP管，加入0.8 ml PBS緩沖液，8 000 rpm離心5 min。小心棄去上清，沉淀加60 μl 10%SDS（終濃度1%）﹑440 μl TE（pH=8.0）﹑3 μl蛋白酶K（終濃度100 μg/ml），37℃水浴消化過夜。添加1/3體積的5 M NaCl，振蕩混勻，4℃ 10 000 rpm離心10 min。將上清液與體積的平衡飽和酚混合均勻，12 000 rpm離心10 min。上清液與等體積氯仿混合均勻，12 000 rpm離心10 min。上清液與1/10體積的3 M NaAC和2倍體積預冷的無水乙醇沉淀1 h（置于- 20℃下）。加入50 μl TE緩沖液溶解沉淀，保存于-20℃下，備用。

4 統(tǒng)計學方法

對于本次研究中的所有數(shù)據(jù)均需要實施正態(tài)性以及方差齊性的相關檢驗，若符合正態(tài)分布以及方差齊，則對其實施檢驗，若無法符合相關要求，使用非參數(shù)的方法進行檢驗。

5 結(jié)果

IL-1B-511﹑IL-1B-31﹑IL-1RN VNTR的相關基因情況在多態(tài)性基因型以及等位基因的頻率上，實際符合Hardy-Weinberg遺傳平衡的相關要求，具有代表性；基因頻率分布存在著地區(qū)和人群差異。IL-1B-511T/T基因型是冠心病的危險因素。詳見表1，表2。

6 討論

冠心病屬于臨床常見疾病，也是一種多因素疾病，屬于環(huán)境與遺傳等因素綜合作用的結(jié)果?，F(xiàn)階段，一些學者認為，冠心病屬于一種炎癥性疾病。動脈粥樣硬化的形成過程不僅是一個免疫反應過程，還是一個炎癥反應過程，在心絞痛與動脈粥樣硬化的過程中，炎癥因子發(fā)揮了重要作用。IL-1屬于促炎癥因子，能與IL-6共同作用，導致血清CRP水平升高。部分學者將CRP與IL-1基因中IL-1β（+3 954）﹑IL-1ra（+2 018）及IL-1α（+4 845）等位點的基因多態(tài)性相比較，認為CRP水平的升高與IL-1β（+3 954）密切相關。

表1　IL-1B-31基因型在病例組與對照組分布及比較

表2　IL-1B-511基因型在病例組與對照組分布及比較

專家發(fā)現(xiàn)，IL-1αC-889T基因的多態(tài)性與冠心病的發(fā)生具有非常密切的關系。目前，臨床尚不清楚IL-1αC-889T的T等位基因引起冠心病的發(fā)病機制，部分學者通過試驗發(fā)現(xiàn)，在采用LPS刺激前，位于889位的TT純合子輕微高于CC純合子的轉(zhuǎn)錄活性。經(jīng)LPS刺激后，mRNA水平會升高5%，而蛋白質(zhì)水平顯著升高，TT純合子為CC純合子的5倍，CT雜合子為CC純合子的2倍。與CC基因型相比，TT基因型在蛋白質(zhì)及mRNA方面升高，升高原因主要為啟動子的活性提高。

IL-1家族基因型與冠脈再通后再狹窄［2-3］﹑CHD的發(fā)展以及CHD的臨床模式［4］均存在相關性，但也有研究表明，IL-1家族基因型與CHD之間并無相關性［5］，這些研究結(jié)果的不一致性可能與人群和地域間的差異有關。有研究［6］提示，IL-1家族基因型與IL-1的表達量也存在相關性。CHD是一種由多種遺傳和環(huán)境因素共同作用所致的復雜的多基因遺傳病，而且本研究表明，IL-1家族基因型具有人群和地域間差異，那么，在中國漢族人群中，IL-1家族基因型與CHD之間是否存在相關性，是否會通過影響IL-1的表達量/或脂質(zhì)代謝而影響CHD的病程，突變基因可能影響IL-1各成分的表達水平，與多種疾病相關［7］。我們對138例中國漢族人群和121例CHD患者進行了IL-1家族基因型分析，結(jié)果顯示IL-1B-31和IL-1RN基因型在CHD患者中的分布與對照組人群相似，但CHD患者中IL-1B-511基因型的分布與對照組人群相比差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。

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Study on the Relationship Between Interleukin-1 Gene Polymorphism and Coronary Heart Disease

LIANG Hao People's Hospital of Puyang City，Puyang 457000，China

【Abstract】

Objective To analyze and study the relationship of interleukin-1 gene polymorphism and coronary heart disease.Methods Research on Interleukin-1B start sub region-31 site and site 511 and interleukin-1 receptor antagonist gene polymorphism，on its distribution in Han of Henan Province population described.Through the relevant methods for the actual implementation of the corresponding gene analysis and detection to identify polymorphisms of genes，andto discuss the results.Results IL-1B-31 and IL-1B-511 gene polymorphism and IL-1RN VNTR polymorphism genotype and allele frequency were in accordance with Hardy Weinberg equilibrium，had the characteristic of group representation.Gene frequency distribution had differences in population and area.Conclusion IL-1B-511T/T genotype is the main factor for heart disease.But in the actual process of morbidity in patients with coronary heart disease，IL-1B-31 gene，IL-1RN will have not any effect，it has no effect on coronary heart disease.

【Key words】Coronary heart disease，Gene polymorphism，Interleukin-1

doi：10.3969/j.issn.1674-9316.2016.02.135

【中圖分類號】R541.4

【文獻標識碼】A

【文章編號】1674-9316（2016）02-0182-02

作者單位：457000 河南省濮陽市人民醫(yī)院