3種乙型肝炎表面抗原ELISA診斷試劑的比較和評價

石建新

(深圳市福田區(qū)慢性病防治院，廣東深圳 518048)

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·臨床研究·

3種乙型肝炎表面抗原ELISA診斷試劑的比較和評價

石建新

(深圳市福田區(qū)慢性病防治院，廣東深圳 518048)

摘要:目的比較3種乙型肝炎表面抗原 (HBsAg)酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELlSA)檢測試劑盒的性能指標。方法收集該院門診患者血清樣本312例，同時使用3種ELISA表面抗原試劑盒檢測HBsAg，并對所有初檢陽性樣本進行確認試驗。結(jié)果312例血清樣本中，檢測結(jié)果完全一致共計299例(占95.8%)，北京萬泰、珠海麗珠、上海榮盛這3種試劑盒的特異度分別為98.7%、98.3%、97.4%，靈敏度分別為100.0%、100.0%、98.7%，漏診率分別為0、0、1.3%，誤診率分別為1.3%、1.7%、2.6%，診斷準確度分別為99.0%、98.7%、97.8%。結(jié)論3種ELISA試劑盒診斷性能均達到了臨床對檢測HBsAg的要求，診斷準確度以北京萬泰最高。3種試劑盒都有假陽性出現(xiàn)，且假陽性樣本都呈弱反應性(吸光度小于1.0)，因此對ELISA初檢結(jié)果陽性特別是弱反應性的樣本需要再次用靈敏度與特異度更高的時間分辨熒光免疫分析(TRFIA)技術(shù)或HBV DNA等技術(shù)復檢以減少假陽性，有條件的實驗室可采用確認試驗進行確認。

關(guān)鍵詞:乙肝表面抗原；試劑；性能

乙型肝炎是我國主要的傳染病之一，乙型肝炎病毒 (HBV)感染可引起急慢性肝炎、肝硬化、肝癌等病變。目前全球約有3．5億HBV攜帶者，約15%～20% 的患者死于HBV感染引起的相關(guān)疾病，其中三分之一在中國[1-2]。乙型肝炎表面抗原 (HBsAg)作為HBV感染的第一個血清標志物[3]，具有重要的臨床檢測價值，HBsAg的準確檢測對診斷HBV感染極為重要。目前我國大多數(shù)實驗室采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELlSA)來檢測HBsAg，但不同廠家由于包被物、標記材料及方法學等方面的差異，有時會出現(xiàn)同一份標本用不同廠家的試劑盒檢測，結(jié)果的陰陽性存在差異，為此，研究者選擇了市場上常見的3種ELISA試劑盒進行比較，現(xiàn)報道如下。

1材料與方法

1.1標本來源收集本院門診患者血清標本312例，所有標本均空腹采集靜脈血，3 000 r/min離心10 min 后，及時分離血清，置-20 ℃以下凍存。

1.2儀器與試劑檢測用酶標儀為美國寶特ELX-800，洗板機為美國伯樂全自動洗板機，3種表面抗原檢測試劑盒均為國內(nèi)市場上常見的品牌，分別為北京萬泰、珠海麗珠、上海榮盛，確認試劑為珠海麗珠試劑有限公司提供的中和確認試劑。

1.3檢測方法同時采用3種 ELISA試劑盒檢測收集到的血清標本HBsAg，并對所有初檢陽性樣本進行確認試驗，檢測過程中設(shè)陰、陽對照、空白對照和陽性質(zhì)控，操作與結(jié)果判斷嚴格按試劑盒說明進行。

2結(jié)果

312例血清樣本中，3種試劑盒檢測結(jié)果完全一致共計299例，一致率為95.8%，其中77例陽性，222例陰性，檢測結(jié)果不一致13例(占4.2%)，對3種試劑檢測結(jié)果不一致和初檢陽性的樣本再進行確認試驗，13例不一致樣本僅有1例確認試驗為陽性，其余12例確認結(jié)果均為陰性，77例陽性結(jié)果確認試驗結(jié)果均為陽性。萬泰、麗珠、榮盛這3種試劑盒檢測結(jié)果出現(xiàn)假陽性的例數(shù)分別為3、4、6例，榮盛出現(xiàn)了1例假陰性。以確認試驗結(jié)果為金標準計算3種試劑盒性能指標，見表1， 其中特異度=真陰性/(真陰性+假陽性)；靈敏度=真陽性/(真陽性+假陰性)；漏診率=假陰性/(假陰性+真陽性)；誤診率=假陽性/(假陽性+真陰性)；診斷準確率=(真陽性+真陰性 )/(真陽性+真陰性+假陽性+假陰性)。

表1　　3種HBsAg檢測試劑盒性能指標(%)

3討論

目前乙型肝炎診斷主要還是靠血清標記物的檢出，盡管已經(jīng)有不少新技術(shù)應用于臨床，但受制于收費高或儀器貴等原因，我國大多數(shù)實驗室仍采用ELISA來做HBV檢測。國產(chǎn)檢測 HBsAg的ELISA試劑盒品牌較多，由于不同生產(chǎn)廠家采用的包被物、標記材料等差別，試劑盒的性能也有差別。本研究選擇市場上常見的萬泰、麗珠、榮盛這3種品牌的試劑進行評價，研究發(fā)現(xiàn)，3種試劑盒的特異度、靈敏度、誤診率、漏診率和診斷準確度等性能指標均能達到臨床檢測 HBsAg的要求，可以滿足臨床需要。但3種試劑盒的各種性能指標仍然有一定的差別，靈敏度方面3種試劑盒均較高，其中萬泰和麗珠靈敏度達到了100.0%，而榮盛盡管靈敏度相對較低，但是也達到了98.7%，診斷準確度從高到低依次是萬泰、麗珠、榮盛，萬泰試劑盒在本研究中診斷準確度最高，達到99.0%，萬泰試劑因為不存在漏診現(xiàn)象，靈敏度和特異度上具有更好的優(yōu)越性，可以作為初篩方法的首選。

研究還發(fā)現(xiàn)，萬泰、麗珠、榮盛這3種試劑盒檢測結(jié)果均有假陽性，榮盛出現(xiàn)了1例假陰性，這說明ELISA試劑還存在假陽性和假陰性情況，這和傅立強等[4]、姚家奎等[5]學者的報道一致，并且3種試劑盒檢測所出現(xiàn)的假陽性樣本均為弱反應性樣本(吸光度小于1.0)，因此，對于ELISA法檢測 HBsAg陽性特別是較低水平的弱反應性標本有必要再次用靈敏度與特異度更高的時間分辨熒光免疫分析技術(shù)[6]或HBV DNA等技術(shù)復檢以減少假陽性，有條件的實驗室可采用確認試驗對結(jié)果進一步確認，以免出現(xiàn)誤診。

綜上所述，由于一些HBV低水平攜帶者的低抗原量及檢測方法學所限等原因易造成HBsAg的漏檢和假陽性，如何根據(jù)檢測方法各自的優(yōu)勢及臨床需要來選擇經(jīng)濟適用、結(jié)果可靠的方法，尤其需引起臨床醫(yī)生和檢驗工作者的重視。

參考文獻

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[2]Poland GA，Jacobson RM．Clinical practice：prevention of hepatitis B with the hepatitis B vaccine[J]．N Engl J Med，2004，351(27)：2832-2838．

[3]Buffet C．Serum biological markers and screening of viral hepatitis[J]．Rev Prat，1995，45(2)：168-173．

[4]傅立強，桑列勇，方放，等．紹興市59例HBsAg陽性淘汰無償獻血者回訪結(jié)果分析[J]．中國衛(wèi)生檢驗雜志，2012，22(5)：1074-1077.

[5]姚家奎，丁德坤，張素華，等．Elecsys HBsAg確證試驗在灰區(qū)及弱反應性標本檢測中的應用[J]．現(xiàn)代檢驗醫(yī)學雜志，2013，28(6)：8.

[6]王家杰，何慶明，劉佳文，等．乙型肝炎病毒標志物定量檢測方法的評價[J]．國際檢驗醫(yī)學雜志，2015，36(1)：123-124.

(收稿日期：2015-10-18)

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.04.056

文獻標識碼：A

文章編號：1673-4130(2016)04-0554-02