IFCC促甲狀腺激素國際溯源和檢測一致性系列研究

閆玉峰，張　娟，李　可，曾　偵，余枝廣

(深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司免疫試劑開發(fā)部，廣東深圳 518057)

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·論著·

IFCC促甲狀腺激素國際溯源和檢測一致性系列研究

閆玉峰，張娟，李可，曾偵，余枝廣△

(深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司免疫試劑開發(fā)部，廣東深圳 518057)

摘要:目的考察邁瑞促甲狀腺激素(TSH)測定試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)精密度、最低檢測限、功能靈敏度、抗類似物干擾、抗內(nèi)源性干擾和校準(zhǔn)一致性等性能。確認(rèn)各項(xiàng)性能均符合國際臨床化學(xué)甲狀腺功能檢測標(biāo)準(zhǔn)化委員會(IFCC)促甲狀腺激素一致性研究的基本要求。方法參照相關(guān)EP文件等性能評估指導(dǎo)，使用邁瑞全自動化學(xué)發(fā)光免疫檢測系統(tǒng)CL2000i，對TSH試劑盒的最低檢測限、功能靈敏度、線性、抗類似物干擾、抗內(nèi)源性物質(zhì)干擾、精密度以及校準(zhǔn)一致性進(jìn)行測試。結(jié)果最低檢測限為0.001 5 μIU/mL，功能靈敏度為0.013 μIU/mL，在0～98.95 μIU/mL范圍內(nèi)梯度稀釋，線性相關(guān)系數(shù)r=0.999。終濃度500 mIU/mL的促黃體生成素、500 mIU/mL的促卵泡生成素及200 000 mIU/mL的人絨毛膜促性腺激素分別加入TSH空白校準(zhǔn)品(C0)中，TSH測定結(jié)果均不大于0.2 μIU/mL。三酰甘油(1 800 mg/dL)、膽紅素(10 mg/dL)、血紅蛋白(500 mg/dL)或人血清清蛋白(10 g/dL)對TSH測試結(jié)果的干擾介于-6.91%～8.60%。使用兩個(gè)濃度水平的質(zhì)控和3個(gè)濃度水平的血清樣本測得TSH總不精密度介于3.24%～5.34%。使用兩個(gè)濃度水平的質(zhì)控測得校準(zhǔn)一致性介于-6.58%～5.26%。結(jié)論邁瑞全自動化學(xué)發(fā)光免疫檢測系統(tǒng)CL2000i測定TSH的基礎(chǔ)性能均滿足行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，具備進(jìn)行IFCC國際溯源和檢測一致性評估的條件。

關(guān)鍵詞:促甲狀腺激素；化學(xué)發(fā)光免疫分析法；性能評估

邁瑞全自動化學(xué)發(fā)光免疫檢測系統(tǒng)CL2000i應(yīng)邀參加甲功標(biāo)準(zhǔn)化委員會(C-STFT)發(fā)起的促甲狀腺激素(TSH)試劑盒檢測一致性研究。按照Van Uytfanghe提出的“分步”策略[1]，參與一致性研究的試劑首先要保證基礎(chǔ)性能,包括最低檢測限、功能靈敏度、線性、分析特異度、抗內(nèi)源性干擾、不精密度及校準(zhǔn)一致性等滿足臨床檢驗(yàn)要求(第1期)，然后開展檢測系統(tǒng)方法學(xué)比對研究(第2期)。為此，對邁瑞TSH測定試劑盒進(jìn)行性能評估。

1資料與方法

1.1儀器與試劑深圳邁瑞全自動化學(xué)發(fā)光免疫檢測系統(tǒng)CL2000i以及配套的TSH試劑盒(批號：20131001、20140601和20140901)、校準(zhǔn)品(批號：20140701和20141201)和低、高值甲狀腺功能復(fù)合質(zhì)控品(批號：20131101和20140801)。

1.2方法

1.2.2功能靈敏度使用7例處理過的混合血清樣本(濃度范圍：0.006～0.095 μIU/mL)，在一臺儀器上使用兩批TSH試劑盒，每批試劑對每例樣本各測10次，實(shí)驗(yàn)共進(jìn)行5周。對兩批試劑測得的混合數(shù)據(jù)使用Variance Function Program12.0進(jìn)行擬合，得到以各樣本TSH濃度均值為橫坐標(biāo)，以批間不精密度[CV(%)]為縱坐標(biāo)的擬合曲線。計(jì)算CV為20%對應(yīng)的濃度，即為TSH功能靈敏度。

1.2.3線性參照臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(CLIS)的方案EP-6A，使用TSH空白校準(zhǔn)品(C0)與接近測量范圍上限的TSH高值血清樣本按照4∶1、3∶2、2∶3、1∶4的比例梯度混合，得到4個(gè)稀釋樣本。對6個(gè)樣本分別重復(fù)測試3次，計(jì)算濃度均值。將實(shí)測結(jié)果與理論結(jié)果進(jìn)行擬合，得到擬合方程及線性相關(guān)系數(shù)r。

1.2.4抗類似物干擾向TSH的校準(zhǔn)品C0中，分別加入終濃度為500 mIU/mL的促黃體生成素(LH)，500 mIU/mL的促卵泡生成素(FSH)或200 000 mIU/mL的人絨毛膜促性腺激素(HCG)，制成3種干擾樣本。每個(gè)樣本重復(fù)測定2次，計(jì)算TSH濃度均值。

1.2.5抗內(nèi)源性干擾參照CLIS EP7-A2，制備低、高值兩個(gè)濃度的TSH混合血清樣本，分別添加終濃度為1 800 mg/mL的三酰甘油，10 mg/dL的膽紅素，500 mg/dL的血紅蛋白或10 g/dL的人血清清蛋白，制成內(nèi)源性干擾樣本?？瞻讓φ諛颖緞t分別添加相同體積生理鹽水(對內(nèi)酯和血紅蛋白干擾樣本)、0.1 mol/L NaOH(對膽紅素干擾樣本)或無添加(對人血清清蛋白干擾樣本)。將空白對照樣本和對應(yīng)的干擾樣本各測試3次，計(jì)算樣本濃度均值，并計(jì)算干擾樣本與空白對照樣本的濃度偏差。

1.2.6精密度參照CLIS EP 5-A3，分別對3個(gè)水平的混合人血清和2個(gè)質(zhì)控品進(jìn)行檢測。每天測試2批，2批間隔時(shí)間不少于2 h，每批重復(fù)測試2次，持續(xù)20 d。計(jì)算TSH 試劑盒的精密度。

1.2.7校準(zhǔn)一致性使用2批試劑、2批校準(zhǔn)品和3臺分析儀組成3個(gè)組合，分別對邁瑞低值、高值甲功復(fù)合質(zhì)控品(靶值分別為0.76和39.09 μIU/mL)各重復(fù)測試3次，計(jì)算質(zhì)控均值及其與靶值的偏差。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理使用Excel 2007及Variance Function Program12.0進(jìn)行數(shù)據(jù)處理及分析。

2結(jié)果

2.1最低檢測限測試結(jié)果見表1(見《國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志》網(wǎng)站主頁“論文附件”)。測得TSH最低檢測限為0.001 5 μIU/mL。

2.2功能靈敏度 結(jié)果見圖1，TSH試劑盒功能靈敏度為0.013 μIU/mL。

圖1　　TSH功能靈敏度

2.3線性測試結(jié)果見表2，擬合方程為Y=0.986X+0.195，線性相關(guān)系數(shù)r=0.999。

表2　　TSH 線性測試結(jié)果

表4　　TSH血清干擾測試結(jié)果

表5　　TSH精密度測試結(jié)果

2.4抗類似物干擾將表3濃度的TSH類似物分別加入TSH校準(zhǔn)品C0中，測得的TSH濃度均小于0.2 μIU/mL，結(jié)果見表3(見《國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志》網(wǎng)站主頁“論文附件”)。

2.5抗內(nèi)源性干擾血清內(nèi)源物對TSH測定結(jié)果的干擾介于-6.91%～8.60%。測試結(jié)果見表4。

2.6精密度使用TSH試劑盒測試3個(gè)混合血清樣本和2個(gè)質(zhì)控品，每天在2個(gè)不同時(shí)間段分別測試2次，持續(xù)20 d后共得到80個(gè)測試數(shù)據(jù)，測試結(jié)果見表5。TSH總不精密度介于3.24%～5.34%。

2.7校準(zhǔn)一致性使用2批試劑盒、2批校準(zhǔn)品和3臺分析儀組成3個(gè)組合，測定低、高值質(zhì)控的結(jié)果見表6(見《國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志》網(wǎng)站主頁“論文附件”)，3個(gè)組合的校準(zhǔn)一致性介于-6.58%～5.26%。

3討論

TSH的檢測通常是臨床診斷甲狀腺功能紊亂的首選指標(biāo)。血液中游離甲狀腺激素含量的輕微改變，都會通過負(fù)反饋引起TSH的較大變化。因此，TSH的檢測可以靈敏、特異地反映甲狀腺功能，是評估下丘腦-垂體-甲狀腺軸動態(tài)平衡的重要早期參數(shù)[2-5]。

臨床檢驗(yàn)過程中，為采用通用指南對疾病進(jìn)行診斷和治療，理想情況下要求不同檢測系統(tǒng)對臨床樣本檢驗(yàn)結(jié)果一致并具有可比的參考范圍。實(shí)現(xiàn)檢測結(jié)果一致性，對逐步推行臨床檢驗(yàn)結(jié)果互認(rèn)，提高醫(yī)療服務(wù)質(zhì)量具有重要價(jià)值。2005年，IFCC成立甲狀腺功能標(biāo)準(zhǔn)化工作組。2012年，該組織升格為甲狀腺功能標(biāo)準(zhǔn)化委員會，并在全球召集更多參與者推動一致性研究[4]。IFCC開展TSH一致性研究已達(dá)數(shù)年，目前正采用盡可能多的檢測系統(tǒng)測試具有互換性的真實(shí)人血清樣本，用所有檢測結(jié)果的均值(APTM)替代參考測量程序?qū)嵭幸恢滦詸z測[6-8]。

對于TSH這樣具有重要臨床價(jià)值的待測物，開展一致性研究必須獲取可靠臨床樣本。這要求樣本臨床背景信息清晰可查，濃度分布涵蓋特定范圍并包含對臨床判斷有意義的點(diǎn)。樣本要包括健康人樣本、患者樣本及相關(guān)的可能影響測試結(jié)果的干擾樣本[9]。有研究曾使用9個(gè)制造商的16種TSH免疫試檢測劑盒，對40個(gè)血清樣本進(jìn)行檢測[7-10]。結(jié)果表明，16種試劑盒的批內(nèi)精密度和總精密度分別為1.5%～5.5%和2.5%～7.7%。其中13種試劑盒檢測結(jié)果與APTM相差小于10%，在中間濃度范圍(0.05～5.00 mIU/L)，大部分試劑盒比對較好。但也有少數(shù)TSH試劑盒在低濃度范圍(0.03～0.05 mIU/L)相對于APTM有明顯負(fù)偏差。在有臨床價(jià)值的濃度范圍(<0.05 mIU/L和>5.00 mIU/L)，一種試劑盒表現(xiàn)出高達(dá)-21%～-33%的負(fù)偏差，另一種試劑盒則表現(xiàn)出8%～12%的正偏差。這一結(jié)果表明，不同的TSH檢測試劑盒間測試結(jié)果差異明顯。通過重新校準(zhǔn)，不同檢測系統(tǒng)的TSH測值分布離散性減少，中間濃度范圍的精密度由9.1%改善到5.9%。由此可見，不同TSH檢測試劑盒可通過一組患者血清樣本進(jìn)行校準(zhǔn)，實(shí)現(xiàn)檢測一致性。

通過對邁瑞全自動化學(xué)發(fā)光免疫檢測系統(tǒng)CL2000i TSH試劑盒的測定，其最低檢測限、功能靈敏度、線性、分析特異度、抗內(nèi)源性干擾、精密度和校準(zhǔn)一致性均滿足行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)和臨床使用需求，滿足IFCC檢測系統(tǒng)方法學(xué)比對第1期研究的性能要求，為TSH項(xiàng)目的IFCC檢測系統(tǒng)國際溯源一致性第2期研究奠定了基礎(chǔ)。

參考文獻(xiàn)

[1]Van Uytfanghe K,Linde A,Thienpont LM.A “Step-Up” approach for harmonization[J].Clin Chim Acta,2014,432(1):62-67.

[2]Surks MI,Chopra IJ,Mariash CN,et al.American thyroid association guidelines for the use of laboratory tests in thyroid disorders[J].JAMA,1990,263(1):1529-1532.

[3]Keffer JH.Preanalytical considerations in testing thyroid function[J].Clin Chem,1996,42(1):125-135.

[4]Ladenson PW.Optimal laboratory testing for diagnosis and monitoring of thyroid nodules,goiter and thyroid cancer[J].Clin Chem,1996,42(1):183-187.

[5]Nicoloff JT,Spencer CA.The use and misuse of the sensitive thyrotropin assays[J].J Clin Endocrinol Metab,1990,71(1):553-558.

[6]Van Houcke SK,Van Aelst S,Van Uytfanghe K,et al.Harmonization of immunoassays to the all-procedure trimmed mean-proof of concept by use of data from the insulin standardization project[J].Clin Chem Lab Med,2013,51(5):103-105.

[7]Thienpont LM,Van Houcke SK.Traceability to a common standard for protein measurements by immunoassay for in-vitro diagnostic purposes[J].Clin Chim Acta,2010,411(23):2058-2061.

[8]Thienpont LM,Van Uytfanghe K,Van Houcke S.Standardization activities in the field of thyroid function tests:a status report[J].Clin Chem Lab Med,2010,48(11):1577-1583.

[9]Van Houcke SK,Thienpont LM.“Good samples make good assays” the problem of sourcing clinical samples for a standardization project[J].Clin Chem Lab Med,2013,51(5):967-972.

[10]Thienpont LM,Van Uytfanghe K,Beastall G,et al.Report of the IFCC Working Group for Standardization of Thyroid Function Tests;part 1:thyroid-stimulating hormone[J].Clin Chem,2010,56(6):902-911.

Performance evaluation of Mindray TSH assay on CL2000i system-pre-requisite for IFCC standardization and harmonization of thyroid function tests

YanYufeng，ZhangJuan，LiKe，ZengZhen，YuZhiguang△

(ImmunoassayReagentResearchandDevelopmentDepartment,ShenzhenMindrayBio-MedicalElectronicsCO.,LTD,Shenzhen,Guangdong518057,China)

Abstract:ObjectiveTo evaluate the performance of Mindray TSH chemiluminescence immunoassay,including imprecision,limit of detection,functional sensitivity,interference,cross-reaction,and calibration consistency.The purpose was to confirm Mindray TSH assay meets the criteria of IFCC standardization and harmonization of thyroid functional tests.MethodsThe CLSI guidelines defined in EP documents have been followed to measure the limit of detection,functional sensitivity，specificity,imprecision and calibration consistency of Mindray TSH immunoassay on CL2000i system.ResultsLimit of detection was 0.001 5 μIU/mL，functional sensitivity was 0.013 μIU/mL,the correlation coefficient of linearity was 0.999 in the range of 0-98.95 μIU/mL.Mindray TSH calibrator C0spiked with luteinizing hormone (LH) up to 500 mIU/mL,follicle stimulating hormone (FSH) up to 500 mIU/mL,or human chorionic gonadotropin (HCG) up to 200 000 mIU/mL detected no cross reactivity (detected TSH was less than 0.2 μIU/mL).Hemoglobin up to 500 mg/dL,bilirubin up to 10 mg/dL,triglycerides up to 1 800 mg/dL,and protein up to 10 g/dL showed -6.91%～8.60% bias in TSH measurement.The total imprecision of two controls (high and low levels) and three serum specimens were in the range of 3.24% and 5.34%.Calibration consistency which had been demonstrated with high and low controls were measured between -6.58% and 5.26%.ConclusionThe performance of Mindray thyroid-stimulating hormone assay meets the criteria for IFCC standardization and harmonization of thyroid function tests.

Key words:thyroid stimulating hormone;chemiluminescent immunoassay;performance evaluation

(收稿日期：2015-11-02)

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.04.027

文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A

文章編號：1673-4130(2016)04-0496-03

作者簡介：閆玉峰，女，試劑開發(fā)工程師，主要從事化學(xué)發(fā)光免疫分析法測定試劑盒的開發(fā)?！魍ㄓ嵶髡?，E-mail:yanyufeng@mindray.com。