過敏性皮膚疾病的兩種過敏原檢測方法的對比研究

蔣最明，唐滿玲，顧　敏，羅文輝

(株洲市中心醫(yī)院臨床檢驗中心,湖南株洲 412000)

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·論著·

過敏性皮膚疾病的兩種過敏原檢測方法的對比研究

蔣最明，唐滿玲，顧敏，羅文輝

(株洲市中心醫(yī)院臨床檢驗中心,湖南株洲 412000)

摘要:目的分析不同檢測方法應(yīng)用在過敏性皮膚疾病過敏原檢測中的臨床效果。方法選擇該院 2014年3月至2015年3月門診及住院病房收治的74例過敏性皮膚疾病患者作為研究對象，采用隨機(jī)數(shù)字法將其分成免疫印跡法組與皮膚點刺法組，免疫印跡法組患者治療前抽取靜脈血進(jìn)行免疫印跡法過敏原檢測，皮膚點刺法組患者治療前實施皮膚點刺法試驗進(jìn)行過敏原檢測。結(jié)果免疫印跡法組檢測的過敏原陽性率70.3%，而皮膚點刺法組檢測的過敏原陽性率56.8%。免疫印跡法組的過敏原陽性率高于皮膚點刺法組，兩者比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論對于過敏性皮膚疾病的過敏原檢測，免疫印跡法在過敏原的篩選及其順應(yīng)性等方面要優(yōu)于皮膚點刺試驗。

關(guān)鍵詞:免疫印跡法；點刺試驗；過敏性皮膚疾病；過敏原

過敏性皮膚病是皮膚科最常見的疾病，其病因復(fù)雜，遷延反復(fù)，在治療中往往難以取得較滿意的療效。接觸過敏原與過敏性皮膚病的發(fā)生具有密切的關(guān)系,致敏原靶細(xì)胞作用在皮膚，而致敏原到達(dá)機(jī)體以后和皮內(nèi)靶細(xì)胞融合而導(dǎo)致的生物反應(yīng)，則會導(dǎo)致發(fā)生過敏性皮炎、蕁麻疹與濕疹等過敏性皮膚疾病[1]。因此在臨床中，及時檢測過敏原對于過敏性疾病的預(yù)防與診治具備著至關(guān)重要的作用[2]。本研究中選擇本院2014年3月至2015年3月門診及住院病房收治的74例過敏性皮膚疾病患者作為研究對象，通過對比皮膚點刺試驗和免疫印跡法兩種不同的過敏原檢測方法，以探討分析不同檢測方法應(yīng)用在過敏性皮膚疾病過敏原檢測中的臨床效果以及相關(guān)比較，現(xiàn)報道如下。

1資料與方法

1.1一般資料選擇本院2014年3月至2015年3月門診及住院病房收治的74例過敏性皮膚疾病患者作為研究對象，通過隨機(jī)數(shù)字法把全部患者分成皮膚點刺法組與免疫印跡法組，每組37例患者，在免疫印跡法組中，男性患者19例，女性患者18例，年齡5～60歲，平均(26.9±2.9)歲，其中過敏性皮炎患者4例，慢性蕁麻疹患者20例，濕疹患者13例；而皮膚點刺法組中，男性患者20例，女性患者17例，年齡6～61歲，平均(27.8±3.1)歲，其中過敏性皮炎患者4例，慢性蕁麻疹患者20例，濕疹患者13例。全部患者的性別與年齡等基本臨床資料比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2儀器與試劑免疫印跡法組選擇過敏原特異性IgE抗體檢測試劑盒，由德國MEDIWISS,Analytic,Gmbh公司生產(chǎn)(批號為K-150317)。儀器有過敏原檢測儀、攪拌器、洗瓶、避光孵育箱、水平混勻器等。皮膚點刺法組試劑選擇德國默克集團(tuán)Allergro-pharma標(biāo)準(zhǔn)化變應(yīng)原(阿羅格)變應(yīng)原試劑盒，變應(yīng)原點刺液包括組胺(陽性對照液)、生理鹽水(陰性對照液)、屋塵螨、牛奶、雞蛋等[3]。選取的過敏原主要有戶塵螨、屋塵螨、狗毛皮屑、貓毛皮屑、蟑螂、煙曲、桑樹、蒿、柳、蝦、蟹、貝、牛肉、牛奶、芒果、雞蛋等16種過敏原，其中8種為常見吸入性過敏原，8種為常見食入性過敏原。

1.3方法皮膚點刺法組患者實施皮膚點刺試驗。點刺試驗是將少量高度純化的變應(yīng)原液體滴于患者前臂，手持一次性消毒點刺針與前臂成 90°角，快速穿過滴在皮膚上的變應(yīng)原提取液刺入表皮，以不出血為度，停留 1 s 后拔出。每種點刺液用一個新的點刺針，2～3 min后拭去殘留液滴。擦拭時宜用消毒棉簽輕輕吸干藥液，切勿向其他點刺點方向擦拭，以免過敏原點刺液混合，造成假陽性結(jié)果。如患者對該過敏原過敏，則會于15 min內(nèi)在點刺部位出現(xiàn)類似蚊蟲叮咬的紅腫快，或者顏色上有改變。該方法采用組胺作陽性對照，以計算相應(yīng)的反應(yīng)強(qiáng)度[4]。而免疫印跡法患者取靜脈血采用免疫印跡法檢測。免疫印跡法是將靜脈血中特異性過敏原吸附于硝酸纖維素膜表面，置于反應(yīng)槽中，用移液器加入一定量的患者血清后室溫下孵育，標(biāo)本中過敏原特異性的IgE抗體就會與過敏原發(fā)生反應(yīng)，并結(jié)合到硝酸纖維素膜上，待反應(yīng)一段時間后，洗凈多余的抗體，同時加人生物素標(biāo)記的抗人IgE抗體，該抗體已有生物素標(biāo)記。繼續(xù)室溫下孵育，洗脫未結(jié)合上的抗體，然后加上堿性磷酸酶標(biāo)記的鏈霉親和素，繼續(xù)孵育，待結(jié)合完成后，重復(fù)清洗環(huán)節(jié)，再加入底物，使其與底物作用，孵育完成后，會出現(xiàn)特定的酶顯色反應(yīng)，顯色沉淀會反應(yīng)在試劑條上，顏色深淺與血清中slgE抗體水平成正比，待試劑條干燥后，在專用閱讀儀上讀出結(jié)果。所有操作均按說明書要求嚴(yán)格執(zhí)行。

1.4觀察指標(biāo)與評定標(biāo)準(zhǔn)皮膚點刺試驗根據(jù)變應(yīng)原點刺液及陽性對照所致風(fēng)團(tuán)面積之比判定反應(yīng)級別。變應(yīng)原風(fēng)團(tuán)直徑與陰性相同為(-)，變應(yīng)原風(fēng)團(tuán)直徑為組胺風(fēng)團(tuán)直徑的1/4 判定(+)，變應(yīng)原風(fēng)團(tuán)直徑為組胺風(fēng)團(tuán)直徑的1/2判定(++)，變應(yīng)原風(fēng)團(tuán)直徑為組胺風(fēng)團(tuán)直徑(+++)，變應(yīng)原風(fēng)團(tuán)直徑為組胺風(fēng)團(tuán)直徑的2倍判定(+ + + +)[5]。而免疫印跡法是通過計算顯色條的面積積分與內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)曲線對比進(jìn)行分級，從低到高依次分為0級、1級、2級、3級、4級、5級、6級共7個等級，0級：無(0.00～0.34 IU/mL)；1級：低(0.35～0.69 IU/mL)；2級：增加(0.70～3.49 IU/mL)；3級：顯著增加(3.50～17.49 IU/mL)；4級：高(17.50～49.90 IU/mL)；5級：較高(50.00～100.00 IU/mL)；6級：極高(>100.00 IU/mL)。0～1級為陰性，2～6級為陽性。

1.5統(tǒng)計學(xué)處理本研究采用統(tǒng)計學(xué)SPSS17.0對兩組患者的基本臨床數(shù)據(jù)實施處理與統(tǒng)計，采取χ2檢驗對計數(shù)資料進(jìn)行比較，采用t檢驗對計量資料進(jìn)行比較，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1兩組過敏原陽性率比較兩組過敏性皮膚疾病患者經(jīng)過過敏原檢測后,對兩組的過敏原陽性率進(jìn)行分析統(tǒng)計，其中免疫印跡法組的陽性率70.3%，而皮膚點刺法組陽性率56.8%，兩組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

2.2兩組主要過敏原檢測結(jié)果比較兩組主要過敏原檢測結(jié)果比較發(fā)現(xiàn)，食入性過敏原中除牛奶外，其余免疫印跡法組過敏原檢測的陽性率高于皮膚點刺法組。在吸入性過敏原中，只有屋塵螨和戶塵螨兩種過敏原檢測的陽性率比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，其余免疫印跡法組過敏原檢測的陽性率高于皮膚點刺法組，兩組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1　　兩組主要過敏原檢測的陽性率比較[n(%)]

續(xù)表1　　兩組主要過敏原檢測的陽性率比較[n(%)]

3討論

過敏性皮膚疾病還可以稱之成變態(tài)反應(yīng)性疾病，其一般是由致敏原侵入機(jī)體以后發(fā)生異常而導(dǎo)致的疾病，是一種因為內(nèi)在因素過敏體質(zhì)，在外在因素過敏原的作用與誘發(fā)下而致使不同細(xì)胞下致敏原靶細(xì)胞的發(fā)病[6]。近年來，隨著大氣及環(huán)境污染和食物添加劑等的廣泛應(yīng)用，過敏性皮膚疾病的人群逐年擴(kuò)大,其發(fā)病率也呈現(xiàn)出了一定的增長趨勢。對相關(guān)臨床數(shù)據(jù)分析發(fā)現(xiàn),其中大多數(shù)患者具有過敏史[7]。病情常反復(fù)發(fā)作和遷延不愈，但病因卻難以明確，因此探尋過敏皮膚病的病因，明確可導(dǎo)致過敏性皮膚病的主要過敏原，了解接觸吸入性過敏原與發(fā)生過敏性皮膚疾病之間的關(guān)系已經(jīng)成為臨床皮膚科領(lǐng)域研究的熱點問題[8]。目前臨床上過敏原的檢測方法很多，大致可分為體內(nèi)和體外兩種試驗。體內(nèi)檢查主要有皮內(nèi)試驗、點刺試驗、斑貼試驗、激發(fā)試驗等，體外檢測有酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)、點酶聯(lián)免疫吸附試驗(Dot-ELISA)、放射性過敏原吸附試驗(RAST)、免疫印跡法檢測總IgE(tIgE)以及特異性IgE(sIgE)等。本研究中是分別選取體內(nèi)檢測中的皮膚點刺試驗及體外檢測中免疫印跡法檢測特異性IgE抗體。兩組患者經(jīng)過臨床過敏原檢測后,結(jié)果顯示免疫印跡法組的陽性率為70.3%，而皮膚點刺法組的陽性率為56.8%，免疫印跡法組的過敏原陽性檢測率較皮膚點刺法組高。而在對兩組患者進(jìn)行食入性過敏原和吸入性過敏原的檢測結(jié)果分析時也發(fā)現(xiàn)，免疫印跡法組的大部分過敏原陽性率要高于皮膚點刺法組，兩者比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。兩種檢測方法各有利弊。皮膚點刺試驗?zāi)壳芭R床上應(yīng)用廣泛，其優(yōu)點主要是操作簡單、快捷、安全，不需特殊儀器，不受環(huán)境的局限，可根據(jù)臨床的需要，隨時測試各種變應(yīng)原，而且經(jīng)濟(jì)實惠。但在試驗過程中，一旦操作不慎，針尖會刺入過深，會加劇患者，尤其是兒童患者的恐懼感，甚至終止試驗。且過敏原種類偏少，不能很好地滿足臨床的需求。而免疫印跡法檢測總IgE(tIgE)以及特異性IgE(sIgE)，雖然需要靜脈抽血，操作繁瑣，檢測時間長，且費用比較昂貴，但因其痛苦小、特異度高、順應(yīng)性好，且含有更多的過敏原種類，能更好、更準(zhǔn)確地找出過敏性皮膚患者的致病病因，可以更好地服務(wù)于臨床。

綜上所述，兩種過敏原檢測方法各有利弊。免疫印跡法由于包含眾多的過敏原試劑種類，比較容易對過敏原進(jìn)行篩選，且患者具有較好的順應(yīng)性，故對于過敏性皮膚疾病的過敏原檢測，免疫印跡法要優(yōu)于皮膚點刺法試驗。

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Comparative study on two kinds of allergen detection methods for allergic skin diseases

JiangZuiming,TangManling,GuMin,LuoWenhui

(ClinicalLaboratoryCenter,ZhuzhouCentralHospital,Zhuzhou,Hunan412000,China)

Abstract:ObjectiveTo investigate the clinical effect of different detection methods in the detection of allergens in allergic skin diseases.MethodsChoose 74 cases of allergic skin disease patients in our hospital from March 2014 to March 2015 as the research object,they were divided into two groups by random number method,immunoblotting group and skin prick test group,detected allergens of the two groups by immunoblotting and skin prick test before treatment.ResultsThe positive rate was 70.3% in immunoblotting group,and the positive rate was 56.8% in skin prick test group.For allergens detection,the positive rate was higher by using immunoblotting,the differences between the two had significant difference(P<0.05).ConclusionImmunoblotting is better than the skin prick test for allergen detection in allergic skin diseases.

Key words:immunoblotting;skin prick test;allergic skin disease;allergen

(收稿日期：2015-10-18)

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.04.011

文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A

文章編號：1673-4130(2016)04-0459-03

作者簡介：蔣最明，男，副主任技師，主要從事免疫和生化檢驗研究。