耐甲氧西林金黃色葡萄球菌的SCCmec分型及耐藥性分析

吳　宇，王貴宇，余　瑤，徐　莉，黃君富

(第三軍醫(yī)大學(xué)第一附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科，重慶 400038)

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·論著·

耐甲氧西林金黃色葡萄球菌的SCCmec分型及耐藥性分析

吳宇，王貴宇，余瑤，徐莉，黃君富△

(第三軍醫(yī)大學(xué)第一附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科，重慶 400038)

摘要:目的探討臨床分離的346株耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(MRSA)菌株的臨床分布、SCCmec分型及其對(duì)常用抗菌藥物的耐藥情況。方法選擇2014年1月至2015年1月該院分離的784例金黃色葡萄球菌(SA)，采用PCR方法對(duì)其進(jìn)行MRSA 及MRSA SCCmec基因分型鑒定，并對(duì)其檢出分布及耐藥性進(jìn)行分析。結(jié)果784株SA中MRSA 346株(占44.13%)，MRSA中來自痰液占43.06%，傷口分泌物占48.55%；MRSA對(duì)青霉素、左氧氟沙星、紅霉素耐藥性較高，對(duì)萬古霉素、利奈唑胺、替考拉寧均敏感。MRSA 經(jīng)SCCmec分型，共發(fā)現(xiàn)SCCmecⅡ型 130株，SCCmecⅢ型 196株，SCCmecⅣ 型11株，SCCmecV型9株。結(jié)論該院分離的MRSA以SCCmecⅢ型為主，MRSA對(duì)多種抗菌藥物具有耐藥作用，但對(duì)萬古霉素、替考拉寧等敏感。

關(guān)鍵詞:金黃色葡萄球菌；耐甲氧西林；耐藥性

金黃色葡萄球菌(SA)是引起臨床化膿性感染的常見致病菌之一，自1961年英國(guó)首次發(fā)現(xiàn)耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(MRSA)以來，MRSA的耐藥性及檢出率逐年升高，目前已成為引發(fā)院內(nèi)感染重要的致病菌之一[1-2]，因此，監(jiān)測(cè)MRSA的感染情況及對(duì)抗菌藥物的耐藥情況，為臨床用藥提供合理依據(jù)顯得極為重要。本文將本院2014年1月至2015年1月臨床分離出的346株MRSA的SCCmec基因進(jìn)行分型，并對(duì)其臨床分布情況、耐藥性進(jìn)行分析,現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1材料與方法

1.1菌株來源SA菌株為2014年1月至2015年1月西南醫(yī)院門診及住院患者各類標(biāo)本中分離而來，共784株，其中MRSA 346株。質(zhì)控菌株金黃色葡萄球菌(ATCC2923)、質(zhì)控菌株MRSA(ATCC43300)為本院檢驗(yàn)科保存。

1.2儀器與試劑藥敏紙片(Oxoid公司，英國(guó))；TaKaRa細(xì)菌基因組DNA小量純化試劑盒[寶生物工程 (大連)有限公司]、100 bp DNA標(biāo)記物[寶生物工程(大連)有限公司]、瓊脂糖(BIOWEST，西班牙)；TaKaRa Ex Taq?Hot Start Version[寶生物工程(大連)有限公司]；其他試劑均購(gòu)自國(guó)藥集團(tuán)。PCR儀(ABI公司；美國(guó))；水平電泳儀(北京君意東方電泳設(shè)備有限公司)、凝膠成像系統(tǒng)(Bio-Rad，美國(guó))。MRSA PCR鑒定引物及SCCmec基因分型引物均由生工生物工程(上海)股份有限公司合成。

1.3方法

1.3.1基因組DNA的提取按常規(guī)方法接種培養(yǎng)、分離純化收集到的標(biāo)本，使用TaKaRa細(xì)菌基因組DNA小量純化試劑盒提取細(xì)菌基因組DNA，具體方法按照試劑盒說明書進(jìn)行。

1.3.2MRSA的鑒定Nuc為耐熱核酸酶基因，用于SA的鑒定；MecA基因?yàn)榧籽跷髁帜退帥Q定子A，用于MRSA的鑒定。根據(jù)文獻(xiàn)[3] MRSA鑒定引物，具體序列見表1。MRSA雙重PCR反應(yīng)條件為94 ℃ 5 min；94 ℃ 50 s，59 ℃ 45 s，72 ℃ 90 s，共35個(gè)循環(huán)；72 ℃ 5 min。PCR反應(yīng)結(jié)束后，取10 μL PCR產(chǎn)物進(jìn)行1.5%瓊脂糖凝膠電泳分析。

表1　　MRSA鑒定引物序列

1.3.3SCCmec基因分型根據(jù)文獻(xiàn)[4-5]合成SCCmec基因特異引物，具體序列見表2(見《國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志》網(wǎng)站主頁“論文附件”)。SCCmec多重PCR反應(yīng)條件為94 ℃ 5 min；94 ℃ 45 s，65 ℃ 45 s，72 ℃ 90 s，10個(gè)循環(huán)；94 ℃ 45 s，55℃ 45 s，72 ℃ 90 s，30個(gè)循環(huán)；72 ℃ 10 min。PCR反應(yīng)結(jié)束后，取10 μL PCR產(chǎn)物進(jìn)行1.5%瓊脂糖凝膠電泳分析。PCR鑒定正確后，PCR產(chǎn)物送至生工生物工程(上海)股份有限公司進(jìn)一步測(cè)序驗(yàn)證。

1.3.4藥敏試驗(yàn)采用E-Test法對(duì)分離到的MRSA進(jìn)行藥敏試驗(yàn)。

2結(jié)果

2.1MRSA的鑒定及檢出情況2014年1月至2015年1月本院門診及住院患者標(biāo)本中共分離出SA 784株，其中MRSA 346株，占44.13%，MRSA的PCR鑒定見圖1(見《國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志》網(wǎng)站主頁“論文附件”)。檢出MRSA的患者中，男性患者178，占51.45%，女性患者168，占48.55%。MRSA檢出率較高的科室為燒傷科、兒科、ICU，具體見表3。在各類送檢標(biāo)本中，MRSA檢出率在痰液和傷口分泌物標(biāo)本中相對(duì)較高，分別占45.57%、44.80%，見表4。

2.2MRSA的基因分型本研究通過PCR方法共分離鑒定到SCCmecⅢ型 196株，占56.65%；SCCmecⅡ型130株，占37.57%；SCCmecⅣ型 11株，占3.18%；SCCmecⅤ型 9株，占2.60%。未發(fā)現(xiàn)其他型別MRSA。鑒定電泳圖見圖2(見《國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志》網(wǎng)站主頁“論文附件”)。

2.3藥敏試驗(yàn)本研究分離到的SCCmecⅡ型、SCCmecⅢ、SCCmecⅣ及SCCmecⅤ型 MRSA的具體耐藥情況見表5。

表3　　SA科室分布及MRSA檢出情況

表4　　SA、MRSA的來源及檢出情況

表5　　不同SCCmec分型MRSA的耐藥情況分析

3討論

近年來，MRSA的檢出率逐年升高，已成為臨床感染的常見致病菌之一。本研究共分離到MRSA 346株，占SA的44.13%。從臨床分布來看，MRSA檢出率最高的科室依次為燒傷科、兒科與ICU，原因可能與這些科室的患者病情嚴(yán)重，免疫系統(tǒng)功能低下，或頻繁的侵入性操作，需要大量運(yùn)用抗菌藥物有關(guān)。在各類送檢標(biāo)本中，傷口分泌物及痰液MRSA檢出率分別為45.57%、44.80%，表明傷口與下呼吸道感染仍是MRSA感染的主要方式。

MRSA基因分型方法包括脈沖場(chǎng)凝膠電泳、多位點(diǎn)序列分型、葡萄球菌蛋白A分型、葡萄球菌染色體mcc盒(SCCmec)分型等，其中SCCmec染色體盒是MRSA中與 mecA 基因密切相關(guān)的葡萄球菌染色體盒重組酶基因，根據(jù)SCCmec基因型不同可將MRSA分為社區(qū)獲得性MRSA (CA-MRSA) 與醫(yī)院獲得性MRSA (HA-MRSA)，HA-MRSA攜帶SCCmec基因型通常為SCCmecⅠ、Ⅱ、Ⅲ 型，這些基因片段較大，可攜帶多個(gè)耐藥基因，通常表現(xiàn)為多重耐藥。而CA-MRSA則攜帶Ⅳ、Ⅴ型，基因片段較小，臨床中對(duì)抗菌藥物敏感度較高[6-7]。在本研究分離的346株MRSA中，主要為SCCmecⅢ型和SCCmecⅡ型，分別占56.65%、37.57%，SCCmecⅣ型 及Ⅴ型亦有檢出。藥敏試驗(yàn)結(jié)果顯示，所有菌株對(duì)青霉素、苯唑西林均耐藥，對(duì)紅霉素、頭孢西丁、克林霉素、慶大霉素、左氧氟沙星耐藥率均高于80%，所有菌株對(duì)利福平耐藥率較低；未檢測(cè)到耐萬古霉素及替考拉寧的菌株，SCCmecⅡ?qū)t霉素的耐藥性低于其他3種型別；SCCmecⅢ對(duì)慶大霉素的耐藥率高于其他3種型別，SCCmecⅤ對(duì)克林霉素、慶大霉素的耐藥性低于其他3種型別，SCCmecⅢ與SCCmecⅤ對(duì)多種抗菌藥物的耐藥率均為100%，明顯高于其他分型。

綜上所述，隨著抗菌藥物的濫用，MRSA的感染及其流行已日趨嚴(yán)重，除萬古霉素、替考拉寧與利福平外，MRSA對(duì)其他抗菌藥物都有較高的耐藥率。本次研究未發(fā)現(xiàn)萬古霉素耐藥菌株，而世界上已經(jīng)發(fā)現(xiàn)萬古霉素耐藥的SA報(bào)道[8]。因此，應(yīng)該加強(qiáng)對(duì)MRSA監(jiān)測(cè)，合理使用抗菌藥物，降低萬古霉素耐藥的SA出現(xiàn)。除此之外，醫(yī)院各科室應(yīng)做好定時(shí)消毒，加強(qiáng)對(duì)醫(yī)護(hù)人員的培訓(xùn)，切斷MRSA接觸傳播的途徑。

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Methicillin-resistant Staphylococcus aureus SCCmec parting and resistance analysis

WuYu,WangGuiyu,YuYao,XuLi,HuangJunfu△

(DepartmentofClinicalLaboratory,theFirstHospitalAffiliatedtotheThirdMilitaryMedicalUniversity,Chongqing400038,China)

Abstract:ObjectiveTo analyze the clinical distribution,antimicbial resistance and Staphylococcal cassette chromosome mec(SCCmec) genotype characteristics of 346 methicillirrresistant Staphylococcus aureus (MRSA) clinical isolates in the hospital.MethodsA total of 784 strains of Staphylococcus aureus isolated from January 2014 to January 2015 in the hospital，MRSA identification and the SCCmec genotype was conducted by PCR assay.Results346 strains of MRSA (44.13%) were isolated from 784 strains of Staphylococcus aureus，the detection rate of MRSA from sputum accounted for 43.06%，the secretion accounted for 48.55%.MRSA was resistant to penicillin,levofloxacin and erythromycin，sensitive to vancomycin,linezolid and teicoplanin.SCCmec genotyping result showed that SCCmecⅡ was identified in 130，SCCmecⅢ in 196，SCCmecⅣ in 11，SCCmecⅤ in 9.ConclusionSCCmecⅢ is the main genotypes of MRSA from our Hospital，all of the MRSA strains are multi-resistant to tested antibiotics，but sensitive to vancomycin and teicoplanin.

Key words:Staphylococcus aureus；anti-methicillin-resistant；drug resistance

(收稿日期：2015-10-08)

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.04.009

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1673-4130(2016)04-0455-03

作者簡(jiǎn)介：吳宇，女，主管檢驗(yàn)技師，主要從事臨床免疫與微生物學(xué)檢驗(yàn)研究?！魍ㄓ嵶髡?，E-mail：junfu_huang@126.com。