IBDV感染雛雞盲腸扁桃體的病理組織學變化

趙瑩,李文,陶換,劉曉曉,劉婷宇,余燕,馬金友

（河南科技學院,河南新鄉(xiāng)453003）

IBDV感染雛雞盲腸扁桃體的病理組織學變化

趙瑩,李文,陶換,劉曉曉,劉婷宇,余燕,馬金友

（河南科技學院,河南新鄉(xiāng)453003）

為了探究雛雞感染傳染性法氏囊病毒（IBDV）后盲腸扁桃體病理組織學變化的發(fā)展規(guī)律,用實驗室保存的IBDV毒株感染19日齡雛雞,分別在感染后0 h、24 h、48 h、72 h、96 h、120 h、144 h、168 h、192 h取盲腸扁桃體,通過石蠟切片、HE染色,觀察盲腸扁桃體的病理組織學變化.結果表明：在IBDV感染24 h,盲腸扁桃體淋巴小結內淋巴細胞開始出現(xiàn)壞死凋亡；IBDV感染48~72 h,淋巴小結和彌散淋巴組織區(qū)淋巴細胞大量減少,空泡化程度嚴重；IBDV感染96 h,盲腸扁桃體固有層彌散淋巴組織區(qū)和淋巴小結內空泡減少,淋巴細胞增多；IBDV感染120~192 h,組織結構開始恢復正常形態(tài).由IBDV感染造成的雛雞盲腸扁桃體的損傷在感染72 h后最為嚴重,96 h后開始恢復.

雛雞；盲腸扁桃體；IBDV；病理組織學

傳染性法氏囊病病毒（infectious bursal disease virus,IBDV）是雙鏈線狀RNA病毒,能引起雛雞急性、高度接觸性傳染病.早期的研究認為,IBDV主要在法氏囊中成熟的B淋巴細胞[1]、攜帶IgM的未成熟B淋巴細胞[2]或正在增殖的B淋巴細胞[3]中復制,而在T淋巴細胞內不會復制,因而IBDV感染導致大量的B淋巴細胞壞死和凋亡,引起感染雛雞的體液免疫受到抑制,而機體細胞免疫功能不會受到顯著影響.然而,后來的研究顯示,雛雞感染IBDV后,T淋巴細胞的體外增殖能力明顯減弱[4],還能造成組織內網(wǎng)狀細胞、巨噬細胞、異嗜細胞和結締組織細胞凋亡,破壞各組織器官的結構[5].這說明IBDV不但能抑制感染雛雞的體液免疫和細胞免疫,還能造成多組織器官的損傷.目前,關于雛雞感染IBDV對免疫器官的損傷已有不少報道[6-7],其中大多針對的是侵害最為嚴重的法氏囊.而有關感染IBDV后盲腸扁桃體損傷的發(fā)展規(guī)律缺乏較為詳盡的研究.本文采用組織切片、HE染色技術對病毒感染后不同時間點的盲腸扁桃體進行病理組織學觀察,為IBDV感染后雛雞各組織器官損傷的發(fā)展變化規(guī)律提供基礎資料.

1 材料與方法

1.1 動物處理

1日齡白來航雛公雞150只（河南省新鄉(xiāng)市世周養(yǎng)雞場）,置于河南科技學院實訓中心飼養(yǎng)室喂養(yǎng),在整個飼養(yǎng)過程中給予自由采食與飲水,飼養(yǎng)過程嚴格按照《蛋雞飼養(yǎng)管理手冊》進行.飼養(yǎng)2周,待雛雞母源抗體消失后,10倍稀釋實驗室保存的IBDV（編號：19951128）200 μL,分別通過點眼（50 μL）、滴鼻（50 μL）和肛門吸收（100 μL）感染小雞10只,3 d后收集感染小雞的法氏囊,稱質量后按5 g加1 mLPBS（pH 7.36）冰浴中充分勻漿,離心取上清,PCR檢測病毒含量,調整濃度感染雛雞70只,感染量和部位與前面相同,感染時間為19日齡,其余70只未感染IBDV雛雞為對照組.

1.2 病料收集與處理

分別于雛雞感染IBDV的0 h、24 h、48 h、72 h、96 h、120 h、144 h、168 h、192 h隨機取試驗組和對照組雛雞各6只,頸椎脫臼處死,然后取盲腸扁桃體,置于4%多聚甲醛固定液中（0.1 mol/L,pH 7.4）,48 h以后按常規(guī)方法修塊、脫水、透明、浸蠟、包埋,制作厚度為5 μm的組織切片,HE染色.每只雞的盲腸扁桃體選取5張切片,利用Olympus顯微照相系統(tǒng)拍照觀察.

2 結果與分析

光學顯微鏡下,IBDV感染的0 h,雛雞盲腸扁桃體固有層淋巴小結結構清晰,小結內沒有形成明顯的皮髓質和生發(fā)中心,小結外彌散的淋巴組織分布均勻,淋巴細胞結構正常,固有層內腸腺上皮細胞發(fā)育良好,細胞核清晰（圖1-a）.雛雞感染IBDV 24 h,盲腸扁桃體固有層淋巴小結中淋巴細胞出現(xiàn)核固縮、核碎裂、核溶解等典型細胞壞死現(xiàn)象,導致細胞排列疏松,細胞間間隙變寬（圖1-b）.雛雞感染IBDV48 h,低倍鏡下盲腸扁桃體淋巴小結和彌散淋巴組織分界不明顯或無分界；高倍鏡下,大量網(wǎng)狀組織增生,細胞大小不一,巨噬細胞和嗜中性粒細胞增多,淋巴細胞和碎裂溶解的淋巴細胞大量減少.同時腸腺上皮細胞胞核界限不清晰,胞質溶解呈空泡狀,大量盲腸上皮細胞壞死、脫落（圖1-c）.雛雞IBDV 72 h,盲腸扁桃體固有層內大量淋巴細胞消失,空泡化嚴重,破碎的淋巴細胞胞核隨處可見.雛雞感染IBDV 96 h,盲腸扁桃體固有層空泡減少,淋巴細胞數(shù)量增多,腸腺已基本恢復正常（圖1-d）.雛雞感染IBDV 120~192 h,盲腸扁桃體固有層空泡消失,彌散的淋巴組織區(qū)內淋巴細胞分布均勻,和淋巴小結界限清晰,與對照組相比無甚差異（圖1-e、f、g、h、i）.

圖1 IBDV感染后不同時間點雛雞盲腸扁桃體的病理組織學觀察Fig.1 Pathological histologyofcecal tonsils at different time points after chicken infected with IBDV

3 結論與討論

由傳染性法氏囊病毒感染引起的雞傳染性法氏囊病是目前養(yǎng)禽業(yè)危害最大的疾病之一,已被世界動物衛(wèi)生組織列為影響?zhàn)B禽業(yè)的重要疫病.本病主要侵害法氏囊,引起B(yǎng)淋巴細胞變性、壞死,并逐漸被異噬性白細胞、網(wǎng)狀細胞、巨噬細胞取代,法氏囊濾泡消失.在法氏囊受到損傷的同時,其他免疫器官如盲腸扁桃體的組織結構也受到損害.

結果顯示,雛雞感染IBDV 24 h,盲腸扁桃體開始出現(xiàn)病變,48 h和72 h病變最為嚴重,到了96 h病變減輕,120~168 h盲腸扁桃體病變基本消失,這和我們之前對法氏囊的研究略有不同,即：雛雞感染IBDV96 h,法氏囊損傷最為嚴重,120 h以后病變減輕并開始修復[8].雛雞IBDV感染后法氏囊和盲腸扁桃體這種損傷和修復時間上的不同可能和不同免疫器官的含毒量多少以及存留時間長短有關,陳明勇等[9]的研究表明,IBDV人工感染雛雞,法氏囊含毒量最大,帶毒時間最長,其次是脾臟、胸腺、盲腸扁桃體、哈德氏腺含毒量較低,帶毒期也較短.

研究結果還顯示,雛雞感染IBDV 48 h,盲腸扁桃體固有層內腸腺上皮細胞核固縮,胞質溶解,盲腸上皮細胞壞死脫落,說明雛雞感染IBDV后非免疫細胞也受到了侵害.大量的研究也表明,IBDV感染會造成非免疫器官如腎臟、肝臟、腺胃、肌肉、十二指腸等多器官的損傷[10],這可能與IBDV感染會造成雛雞血液中IFN-Y的水平增加有關,Rautenschlein等[11]研究認為,增加的IFN-Y啟動巨噬細胞,激活一氧化氮合酶（iNOS）,導致NO和腫瘤壞死因子TNF-a的產生,引起組織炎癥和細胞凋亡,組織結構遭到破壞.

[1]Chen L,Ran M J,Shab X X,et al.BAFF enhances B-cell-mediated immune response and vaccine-protection against a very virulent IBDVin chicken[J].Vaccine,2009,27（9）：1393-1399.

[2]陳家麗,蔣守群.雞傳染性法氏囊病及其免疫抑制研究進展[J].養(yǎng)禽與禽病防治,2012（5）：2-3.

[3]郭太杰.傳染性法氏囊病的研究概況[J].黑龍江畜牧獸醫(yī),2010（11下）：86.

[4]滕素玲.益生菌應用雛雞IBD免疫后免疫器官免疫功能和IL-2及其受體mRNA表達變化[D].哈爾濱：東北農業(yè)大學動物醫(yī)學學院,2011.

[5]Tanimura N,Sharma J M.Appearance of T cells in the bursa of fabricius and cecal tonsils during the acute phase of infectious bursal disease virus infection in chickens[J].Avian Diseases,1997,41（3）：638-645.

[6]Inoue M,Miyano K.Thymic lessions in chicken infected with infections bursal disease virus[J].Avian Diseases,1994,38（4）：839-846.

[7]劉爵,韋莉,姚煒光.雞傳染性法氏囊病超強毒感染后SPF雞免疫器官病理學觀察[J].畜牧獸醫(yī)學報,2002,33（4）：371-376.

[8]劉曉曉,余燕,邵營格,等.雛雞感染IBDV后法氏囊組織結構的動態(tài)變化[J].河南科技學院學報：自然科學版,2015,43（4）：40-43.

[9]陳明勇,高齊瑜,楊漢青,等.傳染性法氏囊病病毒變異E株感染雞細胞凋亡的研究[J].畜牧獸醫(yī)學報,2002,33（2）：180-184.

[10]佟美嬌.IBDV感染SPF雛雞免疫器官細胞凋亡及相關基因表達變化[D].哈爾濱：東北農業(yè)大學,2013.

[11]Rautenschlein S,Yeh H Y,Njenga M K,et al.Role of intrabursal T cells in infectious bursal disease virus（IBDV）infection：Tcells promote viral clearance but delayfollicular recovery[J].Archives ofVirology,2002,147（2）：285-304.

（責任編輯：盧奇）

The change of cecal tonsils in chickens infected with infectious bural disease virus

ZHAO Ying,LI Wen,TAO Huan,LIU Xiaoxiao,LIU Tingyu,YU Yan,MA Jinyou
（Henan Institute ofScience and Technology,Xinxiang453003,China）

To explore the histopathological change regulation of cecal tonsils in chickens infected with infectious bural disease virus,a group of 19-days-old chickens were infected with the standard strains of infectious bursal disease virus（IBDV）saved in our laboratory.Cecal tonsils were collected at 0,24,48,72,96,120,144,168 and 192 h after the chickens infected with IBDV,respectively.Histopathological changes of cecal tonsils were observed using paraffin section and HE staining.The results showed that necrosis and apotosis of the lymphocytes emerged in lymph node of lamina propria after the chicken infected with IBDV for 24 h.IBDV,the lymphocyte cells decreased dramatically and vacuolation emerged largely in lymph node and diffuse lymphoid tissue area during the chicken infected with IBDV for 48~72 h.Lymphocyte cells increased and vacuolation decreased in diffuse lymphoid tissue area and lymph node after the chicken infected with IBDV for 96 h.The tissue structure of cecal tonsil was beginning to recover to the normal after the chicken infected with IBDV for 120~192 h.The jury of cecal tonsil was the most serious after the chicken infected with IBDV for 72 h,then began to recover after 96 h.

chickens；cecal tonsil；infectious bursal disease virus；histopathologic

S858.31

A

1008-7516（2016）03-0043-04

10.3969/j.issn.1008-7516.2016.03.010

2016-04-05

河南省高?？萍紕?chuàng)新人才支持計劃（13HASTIT006）；河南科技學院大學生創(chuàng)新實驗項目（2014CX041）

趙瑩（1995―）,女,河南濟源人,本科生.

馬金友（1968―）,男,河南信陽人,博士,副教授.主要從事分子病理學與動物病原學研究