傳染性法氏囊病病毒分子生物學(xué)研究進(jìn)展*

于新友，李天芝，梅建國，沈志強(qiáng)

(1.山東綠都生物科技有限公司，山東 濱州 256600；2.山東省濱州畜牧獸醫(yī)研究院，山東 濱州 256600)

傳染性法氏囊病病毒分子生物學(xué)研究進(jìn)展*

于新友1，李天芝1，梅建國2，沈志強(qiáng)2

(1.山東綠都生物科技有限公司，山東 濱州 256600；2.山東省濱州畜牧獸醫(yī)研究院，山東 濱州 256600)

本文介紹了傳染性法氏囊病病毒基因組結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，論述了傳染性法氏囊病病毒分子生物學(xué)診斷方法，包括常規(guī)PCR方法、PCR-RFLP方法、熒光定量PCR方法、環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)等，并就其基因工程疫苗方面的研究進(jìn)行了著重闡述。

傳染性法氏囊病病毒；基因組；分子生物學(xué)診斷；基因工程疫苗

雞傳染性法氏囊病病毒 (Infectious Bursal Disease Virus，IBDV)可引起雞傳染性法氏囊病(Infectious bursal disease，IBD)，該病是一種急性、高度接觸傳染性、殺淋巴細(xì)胞性傳染病[1]。

IBDV主要侵害法氏囊的B前淋巴細(xì)胞，導(dǎo)致法氏囊器官萎縮。其結(jié)果不僅直接引起感染雞的發(fā)病和死亡，而且可導(dǎo)致雞的免疫抑制，間接引起其他致病因子的感染以及雞對疫苗免疫的應(yīng)答能力下降[2]。免疫抑制、抗原變異，特別是超強(qiáng)毒株(vvIBDV)的出現(xiàn)，使IBD的防控形勢更加嚴(yán)峻，國際獸疫局將 IBD列為 “影響社會(huì)經(jīng)濟(jì)的重要疾病”。IBDV是雙RNA病毒科禽雙RNA病毒屬成員，基因組由兩個(gè)雙股RNA節(jié)段組成，共編碼VP1、VP2、VP3、VP4和VP5等5個(gè)蛋白，其中VP2是IBDV的主要結(jié)構(gòu)和功能蛋白[3]。國內(nèi)外專家學(xué)者在IBDV分子生物學(xué)方面進(jìn)行了大量研究，現(xiàn)就研究情況進(jìn)行綜述，旨在為IBDV防控提供參考。

1 基因組結(jié)構(gòu)與特點(diǎn)

1.1 編碼區(qū)與非編碼區(qū) IBDV基因組是由A、B雙股RNA片段構(gòu)成，分別為A片段(大片段)和B片段(小片段)，A片段長約3.2～3.4kb，含有兩個(gè)開放閱讀框ORFA1(約3096bp)和ORFA2(約436bp)，ORFA2在前，ORFA1在后，ORFA2與ORFA1的5′端重疊，編碼VP5蛋白，ORFA1則編碼一個(gè)約110 KD的多聚前體蛋白 (NH2-VP2-VP4-VP3-COOH)，前體蛋白經(jīng)相關(guān)酶變?yōu)閂P2前體pVP2以及VP3和VP4。VP2是病毒的主要結(jié)構(gòu)蛋白，以前體的形式存在，在病毒顆粒成熟和釋放時(shí)，才能被蛋白水解酶進(jìn)一步水解為成熟的VP2，并包裝于完整的病毒粒子中，IBDV非編碼區(qū)包括片段A的5′端約 134bp，3′端約 96bp，片段 B的 5′端約111bp，3′端約79bp。A和B兩個(gè)片段的非編碼區(qū)內(nèi)存在同向末端和反向重復(fù)互補(bǔ)序列，這種反向倒置重復(fù)序列可通過形成發(fā)夾式構(gòu)象對RNA起穩(wěn)定作用，是RNA復(fù)制轉(zhuǎn)錄和翻譯的重要信號(hào)。

1.2 病毒蛋白及其作用 VP1蛋白分子質(zhì)量約97KD，僅占總蛋白量的3%，位于核衣殼的內(nèi)面，是一種依賴RNA的RNA多聚酶，與病毒RNA復(fù)制有關(guān)[4]，VP1對IBDV衣殼的組裝是非必需的，但對基因組的復(fù)制卻是必要的，另外，VP1還具有鳥苷酸轉(zhuǎn)移酶活性，它通常以VPg和VP1兩種形式存在，VPg為一基因連接蛋白，把A、B兩個(gè)片段首尾相連，自由形式的VP1與病毒粒子的形成有關(guān)，因?yàn)閂P1-VP3復(fù)合體的形成是IBDV病毒粒子形成的關(guān)鍵步驟[5]。VP2蛋白的分子質(zhì)量約37KD，占病毒總蛋白的51%。VP2有1個(gè)高變區(qū)，該區(qū)由151個(gè)氨基酸殘基組成，高變區(qū)與抗原和毒力的關(guān)系最為密切，在高變區(qū)內(nèi)含有3個(gè)重要的結(jié)構(gòu)，即 2個(gè)親水區(qū)和 1個(gè)七肽區(qū)。位于第212～224位 氨 基 酸 殘 基 間 的 第 一 親 水 區(qū)DYQFSSQYQPGG，對病毒構(gòu)象穩(wěn)定性起著重要作用，位于第314～324位氨基酸殘基間的第二親水區(qū)TSKSGGQAGDQ，是主要的宿主保護(hù)性抗原，能誘導(dǎo)宿主產(chǎn)生病毒中和抗體，位于326～332位氨基酸殘基間的七肽區(qū)SWSASGS，對IBDV毒力的有決定性作用。因此，VP2是IBDV的主要結(jié)構(gòu)蛋白和宿主保護(hù)性抗原，也是病毒衣殼的主要成分，與病毒中和抗體的誘導(dǎo)與識(shí)別、病毒毒力變異、病毒的抗原漂移、細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo)VP3蛋白分子質(zhì)量約33KD，占病毒總蛋白的43%，對IBDV衣殼的形成和形態(tài)的完整是必需的，VP3蛋白的末端有許多散在分布的脯氨酸，形成一個(gè)堿性區(qū)，可與核酸相互連接，從而具有穩(wěn)定病毒RNA的作用，此外，VP3的許多區(qū)段具有親水性，在促進(jìn)病毒與抗體反應(yīng)時(shí)發(fā)揮作用。VP4蛋白分子質(zhì)量約為28KD，具有蛋白水解酶活性，其主要作用在于對多聚前體蛋白NH2-VP2-VP4-VP3-COOH的加工，釋放出VP2和VP3兩個(gè)主要的結(jié)構(gòu)蛋白。研究表明，VP4可在被感染的細(xì)胞的原生質(zhì)表面自聚為管狀結(jié)構(gòu)，可能起著絲氨酸蛋白酶的功能。VP5蛋白分子質(zhì)量約17KD，是一種非結(jié)構(gòu)蛋白，對病毒在體內(nèi)和體外復(fù)制都是非必須的。但在IBDV感染的細(xì)胞中有VP5蛋白，其功能尚不清楚?？赡茉诓《镜牟≡苑矫嫫鹬匾淖饔茫鄙賄P5蛋白，病毒的毒力弱化，但不會(huì)影響自然宿主對IBDV的外周體液免疫應(yīng)答[6]。

2 分子生物學(xué)診斷

2.1 常規(guī)PCR方法 PCR方法是根據(jù)目的片段設(shè)計(jì)引物，借助儀器和DNA聚合酶體外大量擴(kuò)增部分或全部目的片段，是一種快速、簡便、特異的診斷方法。蘇曉鷗等[7]根據(jù)IBDV VP2基因的高度保守序列，設(shè)計(jì)并合成了一對引物，建立了IBDV RT-PCR檢測方法，經(jīng)過優(yōu)化RT-PCR反應(yīng)條件，最終獲得預(yù)期453bp的目的片段，IBDV擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)測序結(jié)果證實(shí)與GenBank中已發(fā)表的致病力不同的IBDV毒株相應(yīng)序列同源性達(dá)97.4%-99.9%，最終建立了RT-PCR檢測方法。用已建立的RTPCR方法對已知的8份臨床IBDV陽性法氏囊病料進(jìn)行檢測，陽性率達(dá)100%，另外對2份雞白血病病毒、2份雞傳染性喉氣管炎病毒、2份雞傳染性支氣管炎病毒(IBV)陽性病料進(jìn)行平行同條件檢測，結(jié)果均為陰性。表明所建立的RT-PCR特異性好、敏感性高，可用于雞傳染性法氏囊病的臨床初步診斷及流行病學(xué)調(diào)查。孫潔等[8]采用世界動(dòng)物衛(wèi)生組織推薦的帶有通用引物和酶切位點(diǎn)的特異性引物，通過對6株不同毒株的反復(fù)試驗(yàn)，優(yōu)化了針對A片段VP2基因的常規(guī)RT-PCR檢測方法和針對B片段VP1基因的RT-PCR檢測方法，兩種RT-PCR檢測方法的靈敏度均為10-3，與其他家禽病毒無任何交叉反應(yīng)。

2.2 PCR-RFLP方法 PCR-RFLP方法通過設(shè)計(jì)保守引物，PCR擴(kuò)增目的基因序列片段，然后用限制性內(nèi)切酶酶切，通過觀察其酶切片段差異即可鑒定不同種或不同基因型。楊蒙等[9]根據(jù)IBDV VP2基因的共保守序列設(shè)計(jì) 1對引物，分別以IBDV超強(qiáng)毒株GX8/99、陜西分離株、強(qiáng)毒株(XZ-1、ZZ-1、JL、GX-2、JS-2、SD-1、SD-3、HeN-4、ZJ-1、JX-2、JS-30)和疫苗株(B87、NF8)的VP2保守序列為模板，采用RT-PCR方法擴(kuò)增VP2基因的共保守序列，并構(gòu)建IBDV不同毒株的重組質(zhì)粒。用AhaⅠ/StuⅠ和BamHⅠ/NspⅠ2組限制性內(nèi)切酶分別對超強(qiáng)毒株、強(qiáng)毒株及疫苗株的重組質(zhì)粒進(jìn)行酶切鑒定。結(jié)果顯示，擴(kuò)增出了IBDV VP2基因中的共保守序列，其長度為802bp。超強(qiáng)毒株能被AhaⅠ/StuⅠ切出327bp的片段，而強(qiáng)毒株及疫苗株則能被BamHⅠ/NspⅠ切出270bp的片段。該RT-PCR結(jié)合限制性內(nèi)切酶酶切的鑒別方法能夠很好的區(qū)分IBDV超強(qiáng)毒株與強(qiáng)毒株和疫苗株。

2.3 熒光定量PCR方法 熒光定量PCR(QRTPCR)技術(shù)是指采用SYBR GreenⅠ熒光染料或熒光探針通過連續(xù)監(jiān)測熒光信號(hào)強(qiáng)弱的變化來測定特異性產(chǎn)物的量，不需要分離PCR產(chǎn)物，即能準(zhǔn)確定量起始模板數(shù)。朱春華等[10]通過RT-PCR方法擴(kuò)增IBDV的VP5基因保守片段，將其克隆到pMD18-T載體，經(jīng)測序鑒定得到陽性質(zhì)粒。以陽性質(zhì)粒為標(biāo)準(zhǔn)品，建立SYBR GreenⅠ實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR的標(biāo)準(zhǔn)曲線和溶解曲線。結(jié)果表明，IBDV熒光定量PCR的標(biāo)準(zhǔn)曲線Ct值與3.29×10～3.29×108之間的病毒基因拷貝數(shù)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。該方法靈敏度可達(dá)33拷貝，且特異性和重復(fù)性好。周欣等[11]根據(jù)IBDV VP4基因的保守序列設(shè)計(jì)并合成了一對引物，以所構(gòu)建的重組質(zhì)粒作為陽性標(biāo)準(zhǔn)品，建立了檢測IBDV核酸載量的SYBR Green I qRT-PCR，結(jié)果表明，其Ct值與標(biāo)準(zhǔn)品模板在 4.03×101～109拷貝/μl范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，對IBDV核酸的最低檢出量為40拷貝/μl，靈敏度是常規(guī)RT-PCR檢測方法的 1000倍，該方法不與其它禽源病毒發(fā)生交叉反應(yīng)，批內(nèi)變異系數(shù)小于0.5%。何秀苗等[12]建立基于IBDV VP2基因的QRT-PCR技術(shù)和標(biāo)準(zhǔn)曲線，并檢測該QRT-PCR體系的特異性、靈敏度和重復(fù)性，最后將該QRT-PCR體系應(yīng)用于雞外周血淋巴細(xì)胞中vvIBDV復(fù)制規(guī)律以及臨床樣品的檢測。結(jié)果表明，建立的QRT-PCR體系特異性好，不能與NDV、IBV及FAV1等發(fā)生反應(yīng)，敏感度為1.51× 101拷貝數(shù)/μl，擴(kuò)增效率達(dá)1.018，重復(fù)性試驗(yàn)組內(nèi)變異系數(shù)和組間變異系數(shù)均小于0.5%，在vvIBDV感染后6h收獲的細(xì)胞含病毒基因組拷貝數(shù)最高，對IBD疑似病例的檢測敏感度高于套式RT-PCR技術(shù)。表明建立的反應(yīng)體系特異、靈敏度高，并具有很好的穩(wěn)定性，可應(yīng)用于病毒復(fù)制水平的檢測和臨床樣品的檢測。

2.4 環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù) 環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù) (loop-mediated isothermal amplication，LAMP)是在等溫條件進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)，基因的擴(kuò)增和產(chǎn)物的檢測可一步完成，擴(kuò)增效率和特異性高，可在15～60min擴(kuò)增109～1010倍。楊作豐等[13]設(shè)計(jì)了針對IBDV VP1基因保守區(qū)6個(gè)特異性部位的4條引物，建立了IBDV的LAMP檢測方法。該方法反應(yīng)體系在恒溫水浴鍋中作用1h即可得到其特有的階梯狀條帶，加入熒光素后肉眼可直接觀察結(jié)果。本方法特異性高，對IBDV的最低檢出量為10-6稀釋倍數(shù)，敏感性是普通RT-PCR的100倍。反轉(zhuǎn)錄LAMP檢測方法和普通RT-PCR方法檢測臨床樣品的符合率為93.8%。

3 基因工程疫苗

3.1 基因工程亞單位疫苗 利用 DNA重組技術(shù)，將外源基因?qū)胧荏w菌或細(xì)胞，使其在受體中高效表達(dá)，分泌保護(hù)性抗原肽鏈，提取保護(hù)性抗原肽鏈，加入佐劑即制成基因工程亞單位疫苗。Pitovsky等[14]將IBDV KS株VP2基因重組到桿狀病毒后，用重組桿狀病毒感染的昆蟲細(xì)胞裂解物免疫SPF雞，結(jié)果顯示，重組桿狀病毒表達(dá)疫苗優(yōu)于法氏囊組織制備的疫苗。杜冬華等[15]將 IBDV HB株VP2基因亞克隆到原核表達(dá)載體pET-32ac(+)中并對其進(jìn)行了誘導(dǎo)表達(dá)，重組蛋白純化后，免疫接種6周齡BALB/c小鼠，制備的血清ELISA效價(jià)在1:6400以上，說明所表達(dá)的HB株VP2蛋白免疫原性良好。 藍(lán)勝芝等[16]構(gòu)建了能表達(dá)IBDV VP2基因的重組酵母菌株，經(jīng)搖瓶誘導(dǎo)表達(dá)試驗(yàn)獲得穩(wěn)定高效分泌表達(dá)的酵母工程菌，表達(dá)量為0.459mg/ml，聚丙烯酰胺凝膠電泳、免疫印跡以及動(dòng)物試驗(yàn)表明，重組酵母工程菌表達(dá)的目的蛋白具有IBDV天然蛋白的生物活性和免疫原性。

3.2 核酸疫苗 核酸疫苗又稱為DNA疫苗，它是將外源基因克隆到真核質(zhì)粒表達(dá)載體上，然后將重組的質(zhì)粒DNA直接注射到動(dòng)物體內(nèi)，使外源基因在活體內(nèi)表達(dá)，產(chǎn)生的抗原激活機(jī)體的免疫系統(tǒng)， 產(chǎn)生相關(guān)免疫應(yīng)答反應(yīng)。Chang等[17]將IBDV VP0基因克隆到pCR311載體中，肌內(nèi)免疫證實(shí)，所產(chǎn)生的抗體水平與攻毒保護(hù)率隨著免疫次數(shù)的增加而提高，攻毒后不出現(xiàn)臨床癥狀。免疫2次以上時(shí)，攻毒后沒有出現(xiàn)法氏囊萎縮，法氏囊組織中也沒有檢測到IBDV。侯賢宏等[18]將2周齡SPF雞隨機(jī)分為6組，以200μg/羽劑量首免：A組免疫重組真核表達(dá)重組質(zhì)粒pCI-VP2/4/3-ChIL-18，B組免疫 pCI-ChIL-18-VP2/4/3，C組免疫pCI-co-VP2/4/3-ChIL-18，D組免疫 pCI-VP2/4/ 3，E組免疫pCI-ChIL-18和pCI-VP2/4/3，F(xiàn)組為空白對照，2周后以相同劑量二免，通過攻毒保護(hù)試驗(yàn)等，比較各試驗(yàn)組IBDV DNA疫苗的免疫原性。結(jié)果顯示，重組質(zhì)粒pCI-co-VP2/4/3-ChIL-18的保護(hù)效果最好，保護(hù)率達(dá)93.3%，pCI-VP2/4/3-ChIL-18免疫效果次之，保護(hù)率達(dá)80.0%，pCIChIL-18-VP2/4/3與pCI-ChIL-18和pCI-VP2/4/3的免疫效果無顯著差異，保護(hù)率均為73.3%，但均優(yōu)于單獨(dú)使用重組質(zhì)粒pCI-VP2/4/3組，保護(hù)率為60.0%。

3.3 活載體疫苗 活疫苗是將外源病原基因插入已有的病毒或細(xì)菌疫苗株基因組或其質(zhì)粒的某些部位使之高效表達(dá)，但不影響該疫苗株的生存與繁殖。接種后，除對原來的病原的保護(hù)之外，還獲得對插入基因相關(guān)疾病的保護(hù)力。Heine等[19]以TK基因作為同源序列，在痘苗病毒晚期啟動(dòng)子及雞痘病毒的pEPL啟動(dòng)子下分別表達(dá)IBDVVP2和VP0基因，將重組雞痘病毒翼下刺種，都能產(chǎn)生抗FPV抗體，但只有含VP2基因的重組病毒才能誘導(dǎo)抗IBDV抗體，并具有明顯的保護(hù)力，但不能抵抗IBDV對法氏囊組織的損傷。李奇蒙等[20]以火雞皰疹病毒為載體，構(gòu)建了能表達(dá)IBDV VP2基因的重組病毒rHVT-VP2。將重組病毒在CEF細(xì)胞中連續(xù)傳代 20次，每隔 5代采用 PCR、western blot和間接免疫熒光進(jìn)行檢測，結(jié)果表明VP2蛋白均得到穩(wěn)定地表達(dá)，為進(jìn)一步研究其免疫學(xué)特性奠定了基礎(chǔ)。 林紅麗等[21]構(gòu)建了能表達(dá)IBDVVP2基因的重組干酪乳桿菌，分別口服、滴鼻/點(diǎn)眼pLA-VP2/L.casei，口服、肌注商品活苗及口服pLA/L.casei和PBS為對照，監(jiān)測IgG和sIgA抗體水平，末免后7d檢測脾淋巴細(xì)胞增殖情況并攻毒，7d后剖檢，觀察法氏囊損傷程度并記錄病變得分和保護(hù)率。結(jié)果表明各組的特異性 sIgA、IgG抗體水平顯著高于對照組(P＜0.01)，口服pLAVP2/L.casei組的淋巴細(xì)胞刺激指數(shù)顯著高于其他組(P＜0.01)，保護(hù)率高達(dá) 83.3%，免疫保護(hù)效果優(yōu)于滴鼻/點(diǎn)眼組。

3.4 基因缺失/標(biāo)記疫苗 基因缺失疫苗是用基因工程技術(shù)將病毒致病性基因進(jìn)行缺失，從而獲得弱毒活疫苗，該類疫苗產(chǎn)生的免疫應(yīng)答很容易與自然感染的抗體反應(yīng)區(qū)別開來，故又稱為 “標(biāo)記”疫苗，它有利于疫病的控制和消滅計(jì)劃。高立等[22]為評價(jià)IBDV VP5缺失病毒株rHLJ0504HT△VP5的生物學(xué)特性，對該缺失病毒與其親本病毒rHLJ0504HT(vvIBDV HLJ0504 253/284雙位點(diǎn)突變細(xì)胞適應(yīng)病毒)進(jìn)行了體外復(fù)制動(dòng)力學(xué)比較研究。結(jié)果表明，VP5缺失病毒復(fù)制滴度明顯低于親本病毒(P＜0.05)。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，該缺失病毒可以誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生良好的免疫應(yīng)答反應(yīng)，免疫后10d，其抗體水平與親本病毒相當(dāng)，并能夠抵抗同源或異源超強(qiáng)毒的攻擊，為免疫雞提供100%保護(hù)。此外，該缺失病毒對免疫雞無明顯的致病性，VP5缺失病毒免疫組與未免疫組禽流感血凝抑制效價(jià)相當(dāng)，不存在明顯差異(P＞0.05)，表明該病毒對免疫雞無免疫抑制作用，不影響其它疫苗的免疫效果。而且，VP5的缺失可以作為鑒定該缺失病毒的生物學(xué)標(biāo)記。

3.5 病毒樣顆粒疫苗 病毒樣顆粒又稱偽病毒或假病毒，是由病毒的一個(gè)或多個(gè)結(jié)構(gòu)蛋白自動(dòng)組裝而成的空心顆粒，外形與天然病毒粒子相似，不含病毒核酸，不能復(fù)制，具有很強(qiáng)的免疫原性，可作為免疫原，安全性好，無感染性，能誘導(dǎo)機(jī)體的免疫系統(tǒng)產(chǎn)生免疫保護(hù)反應(yīng)，是研制安全高效的預(yù)防病毒病的潛在候選疫苗。Lee等[23]用桿狀病毒表達(dá)的VP2蛋白可以自發(fā)形成直徑23nmVLP，經(jīng)過硫酸銨鹽析、親和層析等方法獲得結(jié)晶體。李芹等[24]構(gòu)建了含vvIBDV JL株的VP2全長基因的重組桿粒rBacmid-VP2，將重組桿粒rBacmid-VP2轉(zhuǎn)染sf9細(xì)胞后得到重組桿狀病毒vBac-VP2，將該重組病毒感染sf9細(xì)胞，提取DNA，經(jīng)PCR電泳分析，得到1條與預(yù)期大小相符的特異性條帶，間接免疫熒光檢測，可見特異性熒光，Westernblotting分析，在大約53KD處出現(xiàn)1條特異性的蛋白條帶，電鏡觀察感染重組桿狀病毒的細(xì)胞上清和沉淀，均可見重組VP2蛋白自行組裝形成的病毒樣顆粒。

4 展望

IBD是雞的一種非常重要免疫抑制性疾病，廣泛存在于世界各地，給世界養(yǎng)雞業(yè)造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失，因此，做好IBD防控的研究相關(guān)工作非常重要。目前已經(jīng)建立了多種IBDV分子生物檢測方法，如常規(guī)PCR方法、PCR-RFLP方法、熒光定量PCR方法和環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)等，但這些方法各有利弊，有時(shí)需將幾種檢測方法結(jié)合起來，綜合判斷，才能得到準(zhǔn)確的檢測結(jié)果。目前對于IBD主要依靠疫苗接種來預(yù)防。傳統(tǒng)IBD弱毒活疫苗存在隱性帶毒和變異等風(fēng)險(xiǎn)，且現(xiàn)有的診斷方法無法區(qū)分自然感染野毒和弱毒疫苗免疫的動(dòng)物。而IBD滅活疫苗產(chǎn)生的免疫維持期短，并且需要大劑量免疫，成本高。傳統(tǒng)的IBD疫苗不能對IBDV新出現(xiàn)的變異毒株和超強(qiáng)毒株提供有效的保護(hù)，因此，開發(fā)安全有效的基因工程疫苗是IBD疫苗研發(fā)的重要方向，國內(nèi)外學(xué)者研制了大量的IBD基因工程疫苗，取得了一定的成績，但綜合安全性、效力等多方面評價(jià)，大多數(shù)疫苗的研發(fā)僅停留在試驗(yàn)室階段，并沒有大規(guī)模產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)，目前已經(jīng)有國內(nèi)公司生產(chǎn)的商品化的大腸桿菌表達(dá)的基因工程亞單位疫苗投放市場，并且據(jù)說市場反應(yīng)不錯(cuò)，本人以為該產(chǎn)品畢竟屬于大腸桿菌表達(dá)，如果內(nèi)毒素去除不完全，則會(huì)有一定的安全隱患，但若徹底去除內(nèi)毒素可導(dǎo)致生產(chǎn)成本能較高，對于該疫苗效果筆者以為還有待于市場的進(jìn)一步驗(yàn)證，因此，篩選出典型毒株研發(fā)高效、安全、價(jià)廉的IBD基因工程疫苗是今后努力的方向。現(xiàn)用的傳統(tǒng)IBD疫苗不會(huì)退出市場，短期內(nèi)新型疫苗可能還不會(huì)完全替代現(xiàn)行的傳統(tǒng)疫苗，相信隨著基因工程技術(shù)的不斷發(fā)展，在不遠(yuǎn)的將來，IBD基因工程亞單位疫苗必定會(huì)全面取代IBD傳統(tǒng)疫苗。

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《中國商品代育成雞行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)》出爐

近日，由中國吉蛋堂主辦的中國第二屆育成雞行業(yè)發(fā)展與趨勢高峰論壇在鄭州召開。據(jù)悉，來自全國11個(gè)省市的41家優(yōu)秀育成企業(yè)家代表齊聚，共同探討行業(yè)未來方向。此外，現(xiàn)場還審定通過了《中國商品代育成雞標(biāo)準(zhǔn)》，此標(biāo)準(zhǔn)出臺(tái)將推動(dòng)蛋雞行業(yè)健康發(fā)展，促使農(nóng)牧行業(yè)向規(guī)范化、專業(yè)化、國際化轉(zhuǎn)型。

蛋雞行業(yè)要開放包容地整合資源。如今，互聯(lián)網(wǎng)產(chǎn)業(yè)越來越多地影響到傳統(tǒng)行業(yè)，作為相對邊緣化的養(yǎng)殖業(yè)，也需要抱團(tuán)取暖、合作共贏。對此，中國吉蛋堂創(chuàng)始人張達(dá)認(rèn)為，蛋雞行業(yè)的企業(yè)更需要建立一個(gè)全國性的生態(tài)圈，讓蛋雞產(chǎn)業(yè)鏈精英可以在這個(gè)平臺(tái)上進(jìn)行交易、交流和溝通。“此次我們不僅集合蛋雞行業(yè)的企業(yè)，還有上下游企業(yè)，就是希望大家可以共商業(yè)內(nèi)大事、共享資源?！睆堖_(dá)說，當(dāng)今時(shí)代你整合了好多人，說明你有能力，如果你被別人整合，說明你有價(jià)值。因此，他希望蛋雞行業(yè)也要以更加開放包容的心態(tài)去發(fā)展、去整合資源。對此，前來參會(huì)的代表們紛紛表示建立一個(gè)生態(tài)社群順應(yīng)時(shí)代潮流，也順應(yīng)發(fā)展趨勢?！耙恢庇X得養(yǎng)殖業(yè)比較邊緣化，也屬于自己埋頭苦干的行業(yè)，很少溝通和交流，現(xiàn)在發(fā)現(xiàn)這樣不對，而是應(yīng)該多跟業(yè)內(nèi)人士學(xué)習(xí)，這樣對蛋禽業(yè)的未來發(fā)展，更加充滿了信心?！睆纳轿髭s來的企業(yè)家代表聶武斌說。

審定通過《中國商品代育成雞行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)》。此外，近年來，隨著蛋雞產(chǎn)業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化、規(guī)?；难该桶l(fā)展，推動(dòng)了行業(yè)的專業(yè)化分工，催生出一批專業(yè)的育成雞生產(chǎn)和銷售隊(duì)伍。但由于育成雞行業(yè)發(fā)展時(shí)間較短，育成廠家增加很多，雖然發(fā)展速度過快，但參差不齊，大多不規(guī)范。比如：育成雞的價(jià)格差異很大,從11～19元不等;此外，出售日齡不一、防疫結(jié)果不一，沒有明顯的質(zhì)量概念，加之下游用戶對育成雞沒有基礎(chǔ)認(rèn)識(shí)和一致的驗(yàn)收標(biāo)準(zhǔn)，致使行業(yè)出現(xiàn)信任問題、滯銷問題等。

同時(shí)，育成雞行業(yè)沒有行規(guī)，沒有國標(biāo)，很多企業(yè)不按規(guī)矩出牌，最終損傷了行業(yè)利益和下游養(yǎng)殖戶的利益。因此，為滿足蛋雞品種不斷更新的要求，延長產(chǎn)蛋周期和提高養(yǎng)殖綜合效益，為促進(jìn)資源有效利用，提高勞動(dòng)效率，推動(dòng)行業(yè)的專業(yè)化、規(guī)范化進(jìn)程，帶動(dòng)蛋雞行業(yè)健康發(fā)展，由中國吉蛋堂提出并起草的《中國商品代育成雞行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)》，也在此次會(huì)議上供業(yè)內(nèi)專業(yè)人士討論、審定，并最終通過。

據(jù)悉，該標(biāo)準(zhǔn)的主要內(nèi)容應(yīng)包括育成雞出售基本標(biāo)準(zhǔn)和服務(wù)事項(xiàng)，適應(yīng)于育成雞生產(chǎn)、銷售的企業(yè)與個(gè)人。

S858.315.3

A

1673-1085（2016）2-0016-06

2016-01-19

山東省現(xiàn)代產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系家禽創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)生產(chǎn)與環(huán)境控制創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)項(xiàng)目(SDAIT-13-011-10)；山東省重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃項(xiàng)目(2015GSF121027)。

于新友(1983-)，男，山東菏澤人，助理研究員，碩士，主要從事動(dòng)物傳染病診斷及防控研究。