固相萃取-高效液相色譜法用于牛奶和蛋白類飲料防腐劑測定中的效果

□張豐蕓 黃遠(yuǎn)景 曾劍鋒 惠州市食品藥品檢驗所

固相萃取-高效液相色譜法用于牛奶和蛋白類飲料防腐劑測定中的效果

□張豐蕓 黃遠(yuǎn)景 曾劍鋒 惠州市食品藥品檢驗所

現(xiàn)階段固相萃取-高效液相色譜法在分析飲料過程中較為常用，這種分析方式主要優(yōu)勢是比較快捷與高效。在長時間發(fā)展過程中，固相萃取-高效液相色譜法在操作的自動化、分析速度、檢測的靈敏度以及分離效能方面均得到較好的發(fā)展，同時還保留經(jīng)典的液相色譜法中：方便色譜制備、樣品的適用范圍比較廣以及流動相比較多等優(yōu)勢，廣泛應(yīng)用在石油化工、生物工程、食品工業(yè)以及制藥工業(yè)等領(lǐng)域中。在科學(xué)技術(shù)不斷發(fā)展的背景下，漸漸用于飲料檢驗之中，并且作用也日漸彰顯，在大多數(shù)飲料檢驗中都應(yīng)用這種檢驗的方式。本文分析了在飲料檢驗過程中應(yīng)用固相萃取-高效液相色譜法的檢驗效果。

試劑及儀器

主要試劑、飲料

樣品為市場上銷售的液體乳、乳制飲料、蛋白飲料；試劑主要包括有乙腈、磷酸、色譜純和磷酸二氫鉀，DR公司提供苯甲酸、山梨酸；fluka公司提供的脫氫乙酸，TCI-GR公司提供的羥基苯甲酸酯。

儀器

高效液相色譜的儀器SP8800泵，生產(chǎn)于美國光譜的物理公司；54400型的積分儀、ChromDe的脫氣機(jī)，Spheri-5RP-18（5 μm）的色譜柱（220 mm 4.6 mm），配10 μL定量管的進(jìn)樣器。

檢驗的方法

將牛奶和蛋白類飲料中提取的防腐劑當(dāng)作研究對象，分成研究組與常規(guī)組，稱取0.2 g的樣品量，常規(guī)組通過薄層的色譜（TLC）方式來檢測，研究組通過固相萃取-高效液相色譜法檢測，對比分析兩種檢驗方法，產(chǎn)品的回收率。

制備樣品

稱提取物10 mL，然后加入比色管25 mL，再加入乙腈直至刻度，20 min超聲，提取樣品并沉淀蛋白，進(jìn)行過濾。過濾之后將5 mL的濾液放置于雞心瓶之中，不停旋轉(zhuǎn)，蒸發(fā)直至近干。而后加入5 mL的甲酸水，進(jìn)行超聲洗滌，之后將液體上已活化的PEPSPE6cc固相萃取柱，進(jìn)行5 mL水凈化和5 mL10%甲醇凈化，甲醇脫洗之后定容到5 mL，氮吹至2 mL過0.45 μm濾膜上機(jī)，分析色譜。

高效液相色譜方法（HPLC）的條件

流動相：0.4%磷酸溶液與甲醇比為45∶55；流速：每分鐘流動的量為1 mL；柱溫為25 ℃；進(jìn)樣的體積為10 μL；波長為360 nm。

統(tǒng)計的方法

應(yīng)用SPSS22．0統(tǒng)計軟件來分析與處理數(shù)據(jù)，用均數(shù)±的標(biāo)準(zhǔn)差(false ±s)來表示計數(shù)資料，并用χ2來檢驗計數(shù)資料，用P＜0.05表示差異存在統(tǒng)計學(xué)方面的意義。

結(jié)果

常規(guī)組中牛奶分離率為89.8%、純度為89.2%，蛋白飲料的分離率為92%、純度為89.0%，乳飲品的分離率為88%、純度為89.1%；研究組牛奶的分離率為99.2%、純度為99.8%，蛋白飲料的分離率為99.1%、純度為99.9%，乳飲品的分離率為98.9%、純度為99.9%。研究組牛奶、蛋白、乳飲品的分離率、純度明顯高于常規(guī)組，對比差異顯著（P＜0.05）。常規(guī)組回收率為85.0%，研究組回收率99.5%，對比差異顯著（P＜0.05）。

討論

高效液相色譜法主要將液體當(dāng)作流動相，同時應(yīng)用高壓輸液的系統(tǒng)進(jìn)行檢測，是色譜方法中的一個重要分支。就原理方面來講，固相萃取-高效液相色譜法與經(jīng)典的液相色譜法相比，并沒有本質(zhì)區(qū)別，但是固相萃取-高效液相色譜法使用了高效微粒的固定相、新型高壓的輸液泵以及高靈敏度的檢測器。固相萃取-高效液相色譜法使用了極細(xì)小高效液相色譜的填料以及小口徑柱，應(yīng)用高壓的輸液泵讓溶劑高速流過色譜柱，與經(jīng)典柱的色譜法相比，速度比較快，并且有高靈敏度、高壓、高效以及高速的特點。

近年來，固相萃取-高效液相色譜法逐漸應(yīng)用在食品、飲料等監(jiān)測的工作中。尤其近年來一些保健品以及飲料中會添加違禁飲料，嚴(yán)重影響了患者生命安全，因此，需要使用固相萃取-高效液相色譜法對這些飲料進(jìn)行監(jiān)測，有效保障飲料的安全性。而本文主要通過固相萃取-高效液相色譜法來分析牛奶、蛋白飲料中防腐劑的含量，清楚了飲料中的各個組成部分。經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，研究組中牛奶、乳飲料、蛋白飲料的回收率明顯高于常規(guī)組，對比差異顯著（P＜0.05）；常規(guī)組回收率為85.0%，研究組回收率99.5%，對比差異顯著（P＜0.05）。綜上所言，固相萃取-高效液相色譜法可以高效率、有效與準(zhǔn)確的測定飲料含量，同時可以檢查飲料中的相關(guān)物質(zhì)，嚴(yán)格監(jiān)測抗生素以及飲料中的違禁成分；并且在飲料回收率、精準(zhǔn)度以及純度方面的檢測效果比較好，值得進(jìn)一步在臨床上推廣與應(yīng)用。

張豐蕓（1990-），女，本科，食品檢驗助理工程師，研究方向：食品檢驗。