乳腺癌患者基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子－1和人類表皮生長因子受體－2表達(dá)的臨床意義研究

龐菁春，樊 靜

（重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院，重慶 400021)

乳腺癌患者基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子－1和人類表皮生長因子受體－2表達(dá)的臨床意義研究

龐菁春，樊 靜

（重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院，重慶 400021)

目的 觀察基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子－1（TIMP－1）和人類表皮生長因子受體－2（HER－2）在乳腺癌患者中的表達(dá)及其臨床意義。方法 收集2007年1月至2008年12月收治的乳腺癌患者98例，所有病例均隨訪5年，分析TIMP－1和HER－2在乳腺癌中的表達(dá)與不同臨床病理特征的關(guān)系，應(yīng)用總生存時(shí)間（OS）評(píng)估患者預(yù)后情況。結(jié)果 全組腫瘤組織TIMP－1陽性表達(dá)率為57．14%，HER－2為42．86%，二者的表達(dá)與患者年齡、腫瘤大小、臨床分期和病理類型均無關(guān)（P＞0．05）；TIMP－1的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織學(xué)分級(jí)有關(guān)（P＜0．05）；HER－2與雌激素受體(ER)、孕激素受體(PR)狀態(tài)有關(guān)（P＜0．05）。TIMP－1表達(dá)者5年生存率為 61．79%，低于TIMP－1未表達(dá)者的66．64%，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0．05）；HER－2表達(dá)者5年生存率為56．43%明顯低于未表達(dá)者的64．32%（P＜0．05）。結(jié)論 TIMP－1表達(dá)者可能與腫瘤淋巴轉(zhuǎn)移、組織分化有關(guān)，但不能作為不良預(yù)后的獨(dú)立指標(biāo)；HER－2陽性表達(dá)者5年生存率明顯較低，可作為不良預(yù)后指標(biāo)。

金屬蛋白酶抑制劑；基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子－1；人類表皮生長因子受體－2；乳腺惡性腫瘤

乳腺癌是危害女性健康的惡性腫瘤，是異質(zhì)性強(qiáng)的腫瘤，但隨著醫(yī)學(xué)科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，對(duì)腫瘤疾病的治療或預(yù)后預(yù)測研究的深入，其發(fā)病率從20年前的大幅上升逐漸開始下降，許多預(yù)后因素如淋巴結(jié)狀態(tài)、內(nèi)分泌受體狀態(tài)等的提出，有效地指導(dǎo)了乳腺癌患者的綜合性治療，使其死亡率得到明顯下降[1]。目前，有許多學(xué)者對(duì)基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑（TIMP－1）和人類表皮生長因子－2（HER－2）開展了研究，但TIMP－1的陽性表達(dá)對(duì)腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移抑制作用還存在爭議[2]，HER－2的表達(dá)與乳腺癌發(fā)生、轉(zhuǎn)移和預(yù)后有關(guān)。筆者通過對(duì)我院收集的98例乳腺癌患者檢測其TIMP－1和HER－2的表達(dá)，探索其臨床病理特征及預(yù)后的意義，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1．1 一般資料

收集我院2007年1月至2008年12月收治的乳腺癌患者98例，均為女性；年齡25～72歲，平均（55．4± 12．1）歲；術(shù)前均未接受過任何治療，臨床資料記錄完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：術(shù)前接受新輔助治療、放射治療（簡稱放療）、化學(xué)治療（簡稱化療）；晚期轉(zhuǎn)移性乳腺癌、雙原位癌患者；臨床資料不全或標(biāo)本不符合要求。入選患者中，左乳48例，右乳50例；腫瘤組織直徑0．8～10 cm，中位數(shù)為3．6 cm，≤2 cm者24例，2～5 cm者51例，＞5 m者23例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移56例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移42例；組織學(xué)分級(jí)Ⅰ級(jí)53例，Ⅱ級(jí)28例，Ⅲ級(jí)17例；臨床分期Ⅰ期20例，Ⅱ期52例，Ⅲ期26例；浸潤性導(dǎo)管癌83例，其他類型癌15例；孕激素受體（PR）陽性64例，陰性34例；雌激素受體（ER）陽性66例，陰性32例。所有病例隨訪5年，采用定期門診復(fù)查和電話隨訪相結(jié)合的方式，隨訪了解患者術(shù)后治療、生存情況，隨訪截至2014年12月31日或死亡時(shí)間。

1．2 方法

采用免疫組織化學(xué)法檢測98例乳腺癌患者石蠟切片標(biāo)本，觀察乳腺癌組織中TIMP－1和HER－2的表達(dá)水平。免疫組化試劑：鼠抗人TIMP－1，HER－2單克隆抗體及S－P試劑盒（福建福州邁新生物技術(shù)公司）。試驗(yàn)操作步驟嚴(yán)格按照S－P法進(jìn)行，所有標(biāo)本經(jīng)10%福爾馬林液固定，石蠟包埋，取6張切片，切片厚度4～5 μm，TIMP－1及HER－2單克隆抗體為一抗；DBA顯色后做陽性和陰性對(duì)照，以已知的陽性乳腺癌切片作為陽性對(duì)照，磷酸鹽緩沖液代替相應(yīng)抗體作為陰性對(duì)照；試驗(yàn)平行重復(fù)觀察2次，每張切片取代表性的高倍視野≥5，以保證結(jié)果的準(zhǔn)確性。

1．3 檢測結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)

TIMP－1陽性標(biāo)準(zhǔn)：TIMP－1呈棕色顆粒狀，主要定位于癌細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)或少許其他間質(zhì)細(xì)胞內(nèi)；按Shimizu等方法，根據(jù)發(fā)生棕色反應(yīng)的陽性強(qiáng)度和棕色顆粒面積進(jìn)行判斷。每張切片按照棕色陽性強(qiáng)度分為無著色、淡黃色、棕黃色和褐黃色，分別評(píng)分0，1，2，3分。切片棕色反應(yīng)面積按陽性細(xì)胞數(shù)計(jì)算，陽性細(xì)胞數(shù)量＜5%為陰性（－）；陽性細(xì)胞數(shù)5%～25%為弱陽性（＋）；陽性細(xì)胞數(shù)達(dá)26%～50%為陽性（＋＋）；陽性細(xì)胞數(shù)＞50%以上為強(qiáng)陽性（＋＋＋），陽性數(shù)包括弱陽性、陽性和強(qiáng)陽性。

HER－2陽性標(biāo)準(zhǔn)：依據(jù)ASCO／CAP評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)對(duì)HER－2陽性細(xì)胞數(shù)和著色程度評(píng)分分級(jí)。HER－2呈棕黃色顆粒，定位于癌細(xì)胞胞膜。細(xì)胞未染色或＜10%的腫瘤細(xì)胞胞膜染色為0級(jí)；＞10%的腫瘤細(xì)胞胞膜呈現(xiàn)微弱染色為1級(jí)；＞10%的腫瘤細(xì)胞呈現(xiàn)弱至中度的染色和＜30%的腫瘤細(xì)胞較強(qiáng)的染色之間的為2級(jí)；＞30%的腫瘤細(xì)胞呈浸潤性染色為3級(jí)。其中0級(jí)和1級(jí)為陰性，2級(jí)和3級(jí)為陽性。

1．4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 20．0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，年齡、腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織學(xué)分級(jí)、臨床分期、病理類型、ER／PR狀態(tài)等計(jì)數(shù)資料采用百分比表示，不同病理特征組間比較采用 χ2檢驗(yàn)。采用乘積極限法（Kapplan－Meier法）計(jì)算患者TIMP－1和 HER－2表達(dá)5年生存率，取Log－Rank法比較不同組間生存率。P＜0．05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2．1 與臨床病理特征的關(guān)系

全組腫瘤組織 TIMP－1陽性表達(dá)率達(dá) 57．14%（56／98），HER－2陽性表達(dá)率為 42．86%（42／98）。TIMP－1和HER－2表達(dá)與乳腺癌患者的年齡、腫瘤大小、臨床分期和病理類型均無關(guān)（P＞0．05）；TIMP－1的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織學(xué)分級(jí)有關(guān)（P＜0．05），與ER及PR狀態(tài)無關(guān)；HER－2與ER及PR狀態(tài)有關(guān)（P＜0．05），但與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織學(xué)分級(jí)無關(guān)，詳見表1。

表1 TIMP－1和HER－2表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系(例)

2．2 與生存率的關(guān)系

乳腺癌患者TIMP－1表達(dá)者5年生存率為61．79%，低于陰性表達(dá)者的66．64%，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0．05)，見圖1。HER－2表達(dá)者5年生存率為56．43%，明顯低于陰性表達(dá)者的64．32%(P＜0．05)，見圖2。

圖1 TIMP－1表達(dá)與患者生存率關(guān)系曲線

圖2 HER－2表達(dá)患者生存率關(guān)系曲線

3 討論

目前，TIMP－1是有關(guān)乳腺癌治療和預(yù)后研究的熱點(diǎn)問題之一。TIMP－1能有效抑制基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）的活性，阻止MMPs對(duì)細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）的降解，而ECM是阻止腫瘤細(xì)胞向外擴(kuò)散、轉(zhuǎn)移的天然生理屏障，腫瘤細(xì)胞必須穿越ECM，才可能進(jìn)入血管或淋巴管遠(yuǎn)處擴(kuò)散。TIMP－1除了抑制MMPs降解作用外，還可抑制腫瘤血管的形成，從而抑制腫瘤細(xì)胞的生長和擴(kuò)散。本研究結(jié)果顯示，TIMP－1高表達(dá)促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的淋巴轉(zhuǎn)移和腫瘤細(xì)胞的分化，理論上也認(rèn)為TIMP－1表達(dá)越強(qiáng)，乳腺癌的預(yù)后越好。但有研究顯示，TIMP－1的增高，同時(shí)也伴隨著MMPs增高，導(dǎo)致TIMP／MMP的比例失衡，尤其是在轉(zhuǎn)移性乳腺癌中MMP－2，MMP－9顯著增高[3－4]，主要是因?yàn)闄C(jī)體受腫瘤細(xì)胞的刺激宿主細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞同時(shí)產(chǎn)生大量的MMP的原因；當(dāng)TIMP－1主要來源于腫瘤內(nèi)源性表達(dá)時(shí)，TIMP－1反而會(huì)促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增長，只有當(dāng)來源于外源性時(shí)，才可能抑制腫瘤細(xì)胞的生長、擴(kuò)散；表達(dá)TIMP－1的乳腺癌更具有侵襲性，這類患者術(shù)后更容易出現(xiàn)骨轉(zhuǎn)移[5]。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，TIMP－1在乳腺癌中陽性率占57．14%，TIMP－1陽性表達(dá)者生存率低于表達(dá)陰性者，但無顯著差異，可能與TIMP－1主要來源于內(nèi)源性腫瘤細(xì)胞有關(guān)，在本研究中來源于浸潤性腫瘤的占89．29%（50／56）。該研究結(jié)論與張紹坤等[6]的研究一致。

HER－2是表皮生長因子受體家族中的一種跨膜蛋白，與配體相結(jié)合發(fā)揮類似酪氨酸激酶活性，通過細(xì)胞信號(hào)通路的調(diào)節(jié)細(xì)胞生長、增殖和分化作用。乳腺癌患者HER－2表達(dá)與預(yù)后的相關(guān)性研究已逐漸受到重視。有臨床研究報(bào)道，HER－2蛋白過度表達(dá)的患者相比無HER－2表達(dá)的患者的腫瘤負(fù)荷較大，腫瘤增殖指數(shù)高，組織分化低，淋巴轉(zhuǎn)移發(fā)生率高，患者的總生存率與無病生存率均減少[7]。本研究進(jìn)一步證實(shí)，HER－2高表達(dá)者的5年生存率為56．43%，明顯低于HER－2陰性表達(dá)患者的64．32%，表明HER－2作為一項(xiàng)獨(dú)立的預(yù)后指標(biāo)可預(yù)測乳腺癌患者預(yù)后。本結(jié)果與楊黎等[8]的研究報(bào)道一致，也有研究結(jié)果報(bào)道HER－2高表達(dá)者的5年無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移生存率并未見明顯差別。HER－2高表達(dá)導(dǎo)致乳腺癌患者生存率降低的因素，可能通過磷酸肌醇－3激酶／蛋白激酶B（PI3K／Akt）通路促進(jìn)乳腺癌癌細(xì)胞的生長增殖、侵襲轉(zhuǎn)移的作用有關(guān)；同時(shí)可導(dǎo)致細(xì)胞表面整合素和黏合素功能的異常，促進(jìn)了腫瘤細(xì)胞的擴(kuò)散和轉(zhuǎn)移。王言等[9]的研究認(rèn)為，HER－2在腋淋巴陽性乳腺癌患者中高表達(dá)與預(yù)后相關(guān)，HER－2陽性患者中5年生存率達(dá)55．2%，明顯低于陰性患者。在本次研究ER和PR狀態(tài)中，ER和PR陰性患者中HER－2高表達(dá)，這可能與ER和PR陰性也是乳腺癌預(yù)后不良的因素有關(guān)，ER和PR陽性通常乳腺癌發(fā)展比較緩慢，分化好，術(shù)后生存率高[10－11]。王鴻雁等[12]已經(jīng)報(bào)道HER－2基因的擴(kuò)增與ER和PR陰性有顯著的相關(guān)性。李春艷等[13]報(bào)道，ER及PR和HER－2均陰性乳腺癌的侵襲性更強(qiáng)，預(yù)后更差。目前，HER－2也成為乳腺癌的治療靶點(diǎn)，出現(xiàn)了曲妥珠單抗、拉帕替尼等藥物，目前還有有關(guān)數(shù)種新型HER－2靶向藥物單一或聯(lián)合治療的試驗(yàn)正在進(jìn)行，有望為HER－2靶向治療帶來新的改觀。

綜上所述，TIMP－1和HER－2可作為預(yù)測指標(biāo)對(duì)乳腺癌患者的預(yù)后進(jìn)行預(yù)測，TIMP－1高表達(dá)者可能抑制腫瘤細(xì)胞的擴(kuò)散，但同時(shí)來源于內(nèi)源性的TIMP－1有可能會(huì)促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖、擴(kuò)散，在對(duì)患者進(jìn)行預(yù)后預(yù)測時(shí)需要綜合考慮相關(guān)因素。HER－2高表達(dá)患者5年生存率較低，預(yù)后較差，綜合考慮 TIMP－1和HER－2可以較好的預(yù)測乳腺癌患者的預(yù)后。但HER－2表達(dá)水平與臨床病理相關(guān)性還存在不同的認(rèn)識(shí)，TIMP－1對(duì)乳腺癌患者的預(yù)后也存在不確定性，還有待進(jìn)一步深入研究。

[1]樊 嶸，金冶寧．TIMP－1在乳腺癌中的作用機(jī)制和臨床意義[J]．現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué)，2009，17（1）：154－156．

[2]Wurtz S?，Schrohl AS，Moundsen H．TIMP－1 as a tumor marker in breast cancer－an update[J]．ActaOncol，2008(47)：580－590．

[3]郭 通，龐 達(dá)．KiSS－1、TIMP－1在乳腺癌中的表達(dá)及在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中的意義[J]．齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2010，31(7)：1 012－1 014．

[4]Daniele A，Lito AF，Giannelli G，et al．Expression of metal－loproteinases MMP－2 and MMP－9 in sentinel lymph node and serum of patients with metastatic and non－metastatic breast cancer[J]．Anticancer Res，2010，30（9）:3 521－3 528．

[5]劉 君，楊艷芳，傅西林，等．基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子1和nm－23在人表皮生長因子受體2陽性乳腺癌中的表達(dá)及意義[J]．中華腫瘤雜志，2012，34(8)：600－602．

[6]張紹坤，郭 冰，王 雷，等．金屬蛋白酶組織抑制因子員在乳腺癌組織中的表達(dá)及其與多種生物學(xué)指標(biāo)的關(guān)系[J]．中華乳腺病雜志（電子版），2011，5（5）：542－544．

[7]韓曉紅，石遠(yuǎn)凱，馬 麗，等．應(yīng)用FISH和IHC技術(shù)檢測中國乳腺癌患者HER－2基因狀態(tài)及蛋白表達(dá)的前瞻性多中心研究[J]．中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2010，33（7）：655－657．

[8]楊 黎，朱 霞，冉 立．HER－2、PCNA、Bcl－2、Bax在乳腺癌組織中的表達(dá)與預(yù)后的關(guān)系[J]．癌癥，2007，26（7）：756－761．

[9]王 言，姚 璐，劉 毅，等．人表皮生長因子受體2表達(dá)對(duì)腋淋巴結(jié)陽性和陰性乳腺癌患者預(yù)后的不同影響[J]．中華腫瘤雜志，2010，2（7）：511－513．

[10]張 青，李小歡，楊 真，等．110例乳腺癌患者HER－2基因擴(kuò)增狀況及其與臨床病理特征的關(guān)系[J]．中國醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2013，10（11）：86－88．

[11]楊麗麗，梁莉萍，趙 峰．ER、PR、HER－2、Ki67、Nm23、P53在多中心性乳腺癌中的表達(dá)及臨床意義[J]．重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2012，37（11）：964－966．

[12]王鴻雁，張學(xué)斌，蔣伊娜，等．乳腺癌HER－2基因擴(kuò)增的臨床病理意義[J]．腫瘤防治研究，2010，37（11）：1 264－1 268．

[13]李春艷，張 晟，劉 艷，等．三陰型乳腺癌159例臨床病理特征分析[J]．實(shí)用癌癥雜志，2012，27（6）：624－626．

Clinical Significance of TIMP－1 and HER－2 Expression in Breast Cancer Patients

Pang Jingchun,Fan Jing
(The First Affiliated Hospital of Chongqing Medical University,Chongqing,China 400021)

Objective To investigate the clinical significance of tissue inhibitors of metalloproteinase－1 (TIMP－1)and human epidermal growth factor receptor 2(HER－2)expression in breast cancer patients．Methods 98 breast cancer patients from January 2006 to December 2007 were collected and followed－up for 5 years,then the relations between TIMP－1,HER－2 and clinical pathological features of breast cancer patients were analyzed,and the overall survival(OS)was applied to assess the patients′prognosis．Results The rate of TIMP－1 positive expression was 57．14%,and HER－2 was 42．86%．The TMP－1 and HER－2 expressions and patient age,tumor size,clinical stage and histological type were irrelevant(P＞0．05);TIMP－1 expression and lymph node metastasis,histological grade were relevant(P＜0．05);HER－2 and ER,PR status information were relevant(P＜0．05),the 5－year survival rate of patients with TIMP－1 expression(61．79%)was less than that of patients with no TIMP－1 expression(66．64%),and there was no statistical difference(P＞0．05);the 5－year survival rate of patients HER－2 expression(56．43%)was significantly lower than that of patients with the negative HER－2 expression(64．32%),and there was statistical difference(P＜0．05)．Conclusion TIMP－1 expression is related to lymphatic metastasis and tissue differentiation but it may be not an independent predictor of poor prognosis．The 5－year survival rate of HER－2 positive expression is significantly lower,which could be used as an adverse prognostic indicator．

metalloproteinase inhibitor;TIMP－1;HER－2;malignant breast tumors

R730．231；R737．9

A

1006－4931(2016)03－0021－04

2015－07－31)