高效液相色譜法測定香菊膠囊中蒙花苷含量

孫 菲，孫 欣，金 榮

（黑龍江省雞西市食品藥品檢驗檢測中心，黑龍江 雞西 158100）

高效液相色譜法測定香菊膠囊中蒙花苷含量

孫 菲，孫 欣，金 榮

（黑龍江省雞西市食品藥品檢驗檢測中心，黑龍江 雞西 158100）

目的 建立測定香菊膠囊中蒙花苷含量的反相高效液相色譜（RP－HPLC）法。方法 色譜柱為Agilent Zorbax SB－C18柱（250 mm× 4．6 mm，5 m），流動相為乙腈－甲醇－0．5%冰醋酸溶液，線性梯度洗脫，檢測波長為334 nm，柱溫為30℃，進樣量為10 L，流速為1．0 mL／min。結果 蒙花苷進樣量在4．266×10－2～8．532×10－1g（r＝1．000 0，n＝7）范圍內與峰面積線性關系良好，平均回收率為98．90%，RSD為0．54%（n＝6）。結論 該方法操作快速、簡便，結果準確、可靠，可用于香菊膠囊的質量控制。

香菊膠囊；含量測定；蒙花苷；高效液相色譜法

香菊膠囊由化香樹果序（除去種子）、夏枯草、野菊花、黃芪、辛夷、防風、白芷、甘草、川芎9味中藥組方，具有辛散祛風、清熱通竅的功效[1]，用于急、慢性鼻竇炎及鼻炎，療效顯著[2]?，F(xiàn)行質量標準僅有薄層色譜鑒別和黃芪有效成分黃芪甲苷的含量測定，無對處方臣藥野菊花的質量控制。2010年版《中國藥典（一部）》[3]規(guī)定，野菊花中蒙花苷的含量不能低于0．80%，蒙花苷為野菊花中的有效成分，其含量可作為香菊膠囊中野菊花質量優(yōu)劣的評定依據。目前，尚無文獻報道香菊膠囊中蒙花苷的含量測定方法，故本研究中建立了香菊膠囊中蒙花苷的含量測定方法，其專屬性強，結果準確、可靠，可為香菊膠囊中野菊花的質量控制提供依據。

1 儀器與試藥

1．1 儀器

HP1100型高效液相色譜儀（四元泵，紫外檢測器，自動進樣）；HP1100工作站；XSE 205型電子天平(Mettler Toledo公司)；JAC－40型超聲波清洗器（功率為100 W，頻率為40 kHz，濟寧市奧波超聲電器有限公司）；UV－2550型紫外－可見分光光度計（蘇州島津公司）。

1．2 試藥

蒙花苷對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號為11528－200606，含量為98．3%）；市售香菊膠囊（山東步長制藥有限公司，批號分別為 140416，140418，140312）；水為純化水，其他試劑均為色譜純。

2 方法與結果

2．1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗

色譜柱：AgilentZorbax SB－C18柱（250 mm×4．6 mm，5μm）；流動相：乙腈（A）－甲醇（B）－0．5%冰醋酸溶液（C），按表1中梯度洗脫程序進行線性梯度洗脫；檢測波長：334 nm；柱溫：30℃；進樣量：10 μL；流速：1．0 mL／min。蒙花苷與相鄰色譜峰之間的分離度大于1．5，理論板數(shù)以蒙花苷色譜峰計不低于9 000。

表1 流動相線性梯度洗脫程序表

2．2 溶液制備

對照品溶液：精密稱取五氧化二磷干燥24 h以上的蒙花苷對照品10．85 mg（含量98．3%），置10 mL容量瓶中，加甲醇適量，超聲使其完全溶解，放置冷卻至室溫，用甲醇稀釋至刻度，得質量濃度為1 040 μg／mL的對照品貯備液。

供試品溶液：取香菊膠囊10粒，傾出內容物，精密稱定，精密稱取相當于本品3粒質量，置50 mL容量瓶中，加甲醇35 mL，超聲提取30 min（功率為100 W，頻率為40 kHz），放置至室溫，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，微孔濾膜濾過，備用。

陰性對照品溶液：按香菊膠囊的處方，不加野菊花藥材，依法制備陰性樣品，按供試品溶液制備方法制備陰性對照品溶液。

2．3 方法學考察

專屬性試驗：分別取2．2項下3種溶液適量，按擬訂色譜條件分別進樣，色譜圖見圖1。結果，陰性樣品溶液對供試品溶液無干擾，表明該方法專屬性強。

圖1 高效液相色譜圖

線性關系考察：精密量取對照品貯備液2 mL，置50 mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，得質量濃度為42．66 μg／mL的蒙花苷對照品溶液，按擬訂色譜條件，分別進樣1，2，4，8，10，16，20 μL，記錄蒙花苷色譜峰面積。以峰面積（Y）對應進樣量（X，μg）進行線性回歸，得蒙花苷回歸方程 Y＝1．019×103X－6．223×10－1，r＝1．0000（n＝7）。結果表明，蒙花苷進樣量在4．266×10－2～8．532×10－1μg范圍內與峰面積良好線性關系。

精密度試驗：精密量取對照品貯備液適量，稀釋25倍，得質量濃度為42．66 μg／mL的對照品溶液，連續(xù)重復進樣5次，每次10 μL。結果蒙花苷峰面積的 RSD為0．6%（n＝5），表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗：取市售樣品適量，按2．2項下方法制備供試品溶液，按擬訂色譜條件，設定自動進樣器，分別于0，1，2，4，10，16，24 h時重復進樣。結果蒙花苷峰面積的 RSD為0．8%（n＝7），表明供試品溶液在24 h內穩(wěn)定性良好。

重復性試驗：取香菊膠囊樣品（批號為140416），按2．2項下方法平行制備供試品溶液5份，按擬訂色譜條件分別進樣并記錄色譜峰面積。結果蒙花苷的平均含量為每粒0．788 mg，RSD為0．6%（n＝5），表明該方法重復性較好。

加樣回收試驗：分別精密稱取已知含量香菊膠囊樣品（批號為140416）約0．5 g，稱取6份，分別置50 mL容量瓶中，精密加入蒙花苷對照品溶液（591．5 μg／mL）各2．0 mL，加甲醇適量，超聲提取30 min，靜置至室溫，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，進樣10 μL，記錄色譜峰面積，計算回收率。結果見表2。

表2 蒙花苷加樣回收試驗結果（n＝6）

2．4 樣品含量測定

取市售香菊膠囊3批，按2．2項下方法制備供試品溶液，每個批號的供試品平行制備3份，按擬訂色譜條件進樣測定峰面積，用峰面積外標法計算3批市售樣品中蒙花苷的含量。結果見表3。

表3 樣品含量測定結果（n＝3）

3 討論

3．1 測定波長選擇

文獻[4－5]報道，蒙花苷檢測波長為334 nm，本研究中采用紫外分光光度法，在200～700 nm波長范圍內對蒙花苷對照品溶液全波長掃描，結果蒙花苷的最大吸收波長為334 nm，與文獻報道相同。

3．2 流動相篩選

本試驗中先后考察了2010年版《中國藥典（一部）》中野菊花蒙花苷含量測定項下的流動相甲醇－水－冰醋酸（26∶23∶1）[3]、乙腈－水－冰醋酸（25∶73∶2）[4]、甲醇－0．9%冰醋酸（56∶44）[5]、乙腈－甲醇－0．5%冰醋酸溶液分別測定，試驗結果表明，乙腈－甲醇－0．5%冰醋酸溶液梯度洗脫分離效果最優(yōu)。

3．3 提取方法考察

首先，通過試驗比較加熱回流2 h與超聲30 min 2種提取方法的差異，結果表明2種方法無明顯差異。其次，文獻[4－6]報道了以甲醇或70%乙醇為超聲提取溶劑，試驗過程中分別考察了以乙醇、70%乙醇、甲醇、50%甲醇、75%甲醇溶液作溶劑超聲提取20，30，35，40 min，結果表明，甲醇稍微優(yōu)于70%乙醇，遠優(yōu)于其他提取溶劑，且超聲30 min能夠提取完全。

3．4 對照品溶液制備

蒙花苷對照品具有吸濕性[7]，因而臨用前需干燥處理，且注意對照品溶液制備過程中，需仔細觀察，確保超聲至使其完全溶解。

[1]WS3－161（Z－151）－2001（Z）．國家藥品標準·新藥轉正標準[S]．

[2]王桂安，李 歌，杜 蕾，等．香菊膠囊治療慢性鼻－鼻竇炎的臨床療效分析[J]．中國醫(yī)藥指南，2013（1）：598－600．

[3]國家藥典委員會．中華人民共和國藥典（一部）[M]．北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：295．

[4]葉 慧．HPLC測定復方瓜子金顆粒中蒙花苷的含量[J]．中國藥師，2012，15（9）：1 356－1 357．

[5]鄭 芳，李 鵬，李志浩，等．HPLC法測定神農香菊中蒙花苷的含量[J]．中國藥師，2010，13（3）：366－367．

[6]盧海霞，喬艷玲，梁春華．高效液相色譜法測定菊明降壓丸中蒙花苷[J]．中草藥，2010，41（12）：2 002－2 003．

[7]王波濤，林瑞超，魯 靜．RP－HPLC測定野菊花栓中蒙花苷的含量[J]．中成藥，2007，29（7）：附9－附11．

Content Determination of Buddleoside in Xiangju Capsules By HPLC

Sun Fei，Sun Xin，Jin Rong
（Jixi Food and Drug Testing Center，Jixi，Heilongjiang，China 158100）

Objective To establish an RP－HPLC method for the content determination of buddleoside in Xiangju Capsules．Methods The chromatogram column was Agilent Zorbax SB－C18column（250 mm×4．6 mm，5 μm）；the mobile phase was acetonitrile－methanol－0．5% glacial acetic acid by gradient elution and the detection wavelength was 334 nm；the flow rate was 1．0 mL／min，the injection volume was 10 μL，the column temperature was 30℃．Results The buddleoside had good linear relationship with the peak area from the range of 4．266×10－2－8．532×10－1μg(r＝1．000 0，n＝7）；the average recovery rate of buddleoside was 98．90%，RSD＝0．54%（n＝6）．Conclusion The method is convenient，quick，accurate and reliable，and can be used for the quality control of Xiangju Capsules．

Xiangju Capsules；content determination；buddleoside；HPLC

R284．1；R286．0

A

1006－4931(2016)08－0072－03

孫菲（1981－），女，副主任藥師，主要從事藥品檢驗工作，（電話）0467－6103277（電子信箱）chenlizhu1980＠163．com。

2015－12－10；

2016－01－19)